ФАРБУВАННЯ КАПСУЛИ: ОБГРУНТУВАННЯ ТА МЕТОДИКА - БІОЛОГІЯ - 2025

Фарбування капсула являє собою диференційний метод фарбування , який має властивість структури полісахариду напруг навколишнього певних бактерій і дріжджі званих капсулами. Він використовується в клінічних лабораторіях, щоб допомогти діагностувати певні патології, спричинені капсульованими мікроорганізмами.

Він також використовується у навчальних лабораторіях для демонстрації цієї морфологічної структури студентам кар'єри наук про здоров'я, таких як: медицина, біоаналіз, сестринська справа або цитотехнологія, серед інших.

Мазок Klebsiella pneumoniae, забарвлений плямою на капсулі. Індійський чорнильний метод із сафранином. Джерело: А.А.В

Існує кілька простих прийомів продемонструвати наявність капсули в мікроорганізмах, які її мають, це: негативна пляма, пляма Ентоні та варіант, що поєднує в собі попередні два.

Негативне фарбування в основному застосовується у зразках CSF при підозрі на наявність дріжджів Cryptococcus neoformans. Ці дріжджі є частою причиною менінгіту.

Ця методика використовує нігросинову або індійську фарбу і заснована на створенні контрасту між фоном препарату та непроникною капсулою мікроорганізму. Фон стає темним, а капсула - безбарвною. Таким чином розкривається ця структура.

Щодо техніки Антонія, то можна сказати, що її в основному використовують у навчальних лабораторіях для демонстрації полісахаридної структури таких бактерій, як Klebsiella pneumoniae, Streptococcus pneumoniae та Neisseria meningitidis.

Використання цієї методики для діагностичних цілей дуже рідкісне, оскільки існують інші рутинні тести, які дозволяють ідентифікувати ці мікроорганізми.

Основа

Капсула - це сильна структура полісахаридного характеру. Це захищає мікроорганізми від фагоцитозу, а тому є важкою для проникнення структурою.

Саме тому плями на капсулах засновані на контрасті. Барвники забарвлюють дно препарату, поки капсула залишається безбарвною.

Тому за допомогою цих методик капсулу легко впізнати. Якщо мікроорганізм не має капсули, його не можна буде відрізнити за допомогою такого типу забарвлення, оскільки все буде забарвлене одним кольором.

Усі методи, які використовуються для фарбування капсули, мають однакове обґрунтування, незважаючи на використання різних барвників та процедур.

Техніка, абз

-Антонічна пляма

Пляма Ентоні використовує кришталеву фіалку як пляму. Це забарвить бактеріальне тіло і фон фіолетовим.

З іншого боку, використовується 20% мідний купорос. Це служить миючим розчином, тобто видаляє зайвий фіолетовий кристал з препарату, роблячи капсули прозорими, але без бактеріального тіла або фону втрачає колір.

матеріали

- райдужне молоко.

- Слайд.

- 1% фіолетовий кристал.

- 20% мідного купоросу.

- Оптичний мікроскоп.

- Масло для занурення.

Процес

Ця методика складається з:

1. Культивуйте мікроорганізм у райдужному молоці протягом 36 годин.
2. Помістіть краплю культури на кінець слайда, а поруч з ним покладіть краплю фіолетового скла, перемішайте та намажте кінцем іншого слайда.
3. Повітря сухий і не піддаються тепла.
4. Промийте 20% розчином мідного купоросу, дайте висохнути на повітрі.
5. Спостерігайте під мікроскопом із зануреною метою. Шукайте до кінців розвороту.

Важливо не використовувати тепло ні для закріплення, ні для висихання, оскільки це пошкоджує капсулу. Також не мийтеся водою.

Інтерпретація

Райдужне молоко є чудовим культуральним середовищем, оскільки воно забезпечує необхідні поживні речовини для мікроорганізму для розвитку видатної капсули.

З іншого боку, райдужне молоко утворюватиме товсте і компактне дно, яке буде забарвлюватися фіолетовим кольором разом з тілом бактерій, але капсула, яка оточує мікроорганізм, залишиться безбарвною. Тому навколо організму бактерій спостерігається чіткий ореол.

Графічне зображення на мікроскопічному спостереженні мазка Klebsiella pneumoniae, забарвленого плямою Ентоні. Джерело: Зроблено автором MSc. Маріельса Гіл.

Перевага

Це проста техніка виконання. Не потребує фіксації.

Також слід зазначити, що можна використовувати й інші культуральні середовища, але молочне середовище є кращим, оскільки воно має перевагу в наданні більш помітних капсул.

Недоліки

Це трохи більш трудомістка техніка, ніж негативне фарбування, і її візуалізація вимагає дочекатися повного висихання препарату.

-Негативне фарбування

матеріали

- Слайди слайдів.

- культуральне середовище з мікроорганізмом.

- китайська чорнило або нігрозин.

- Оптичний мікроскоп.

- Фізіологічний сольовий розчин.

Процес

Покладіть краплю фізіологічного сольового розчину на покрив і розведіть невелику частину мікробної культури. Важливо, щоб препарат був не надто густим. Потім помістіть краплю китайської фарби або нігрозину і перемішайте.

Потім поверх препарату кладуть покривний лист, не переливаючи рідину. Це спостерігається під мікроскопом, спочатку зосереджуючись на об'єкті 10X, а потім переходячи до 40X.

Ця методика також може бути використана безпосередньо на зразках CSF. Тобто замість того, щоб помістити краплю мікробної культури, поміщають краплю ЦСЖ.

Перевага

Це простий метод виконання і в той же час недорогий. Він не вимагає фіксації або висушування препарату.

Недоліки

Недоліком є ​​те, що його потрібно спостерігати під мікроскопом до висихання препарату, оскільки, якщо це станеться, мікроорганізми будуть стискатися, що ускладнить візуалізацію.

З іншого боку, помилкові позитиви можуть виникати, якщо аналітик недосвідчений, оскільки лейкоцити часто плутають із дріжджами.

Спостереження за дріжджовими капсулами за допомогою китайської фарби або нігросину слід розглядати як припущенний діагноз Cryptococcus neoformans до тих пір, поки його не продемонструють з культурою.

Це тому, що є інші дріжджі, які можуть бути причиною менінгіту, а не тільки Cryptococcus neoformans, такі як рід роду Candida та Rhodotorula, а також інші види криптококів.

Інтерпретація

Якщо є капсульовані мікроорганізми, буде спостерігатися темний фон, прозорі тіла плавають у рідині, підкреслюючи наявність капсули.

Капсула Cryptococcus neoformans, забарвлена ​​китайським чорнилом. Джерело: Кредит на фотографії: Постачальники вмісту: CDC / Dr. Леанор Хейлі

-Індійська техніка чорнила

Цю методику можна виконати і за допомогою нігрозину. Це поєднання методик, що раніше були пояснені. У цій техніці використовують кришталево-фіолетове та індійське чорнило або нігрозин.

Тіло бактерій стає фіолетовим від кришталево-фіолетового, оскільки воно негативно заряджене, тоді як нігрозин забарвлює дно мазка. Якщо бактерія має капсулу, вона виявиться прозорим ореолом навколо мікроорганізму.

Кришталевий фіолетовий можна замінити будь-яким із цих кольорів: сафранином, основним фуксином або метиленовим синім.

матеріали

- Фіолетове скло.

- Нігрозин або індійська чорнило.

- Слайди слайдів.

- Мікроскоп.

Процес

- Культивувати мікроорганізм у культуральному середовищі.

- Помістіть краплю культури на кінець слайда, а поруч з ним покладіть краплю кристалічної індійської фарби або нігрозину, перемішайте та намажте кінцем іншого слайда.

- Повітря сухий і не фіксується до тепла.

- Накрийте фіолетовим кристалічним розчином на 1 хвилину, промийте дистильованою водою, але дуже делікатно (м'якою струменем), дайте їй висохнути на відкритому повітрі.

- Спостерігайте під мікроскопом із зануреною метою. Шукайте до кінців розвороту.

Інтерпретація

Буде видно фіолетове бактеріальне тіло і темний фон. Капсула, якщо вона присутня, виявиться безбарвною навколо бактерій.

Список літератури

1. Ковадонга А, Силуніз М, Серрано С. Основні методи мікробіології. Спостереження за бактеріями. Редука (біологія). Серія мікробіології. 2010 р .; 3 (5): 15-38. D
2. Лопес-Жакоме L, Ернанде-Дуран М, Колін-Кастро С, Ортега-Пенья S, Серон-Гонсалес Г, Франко-Кендеяс Р. Основні плями в лабораторії мікробіології. Mediagraphic.org. 2014 рік; 3 (1): 10-18. Доступний за адресою: medigraphic.com
3. Гіл М. Негативне фарбування: обгрунтування, техніка, переваги та недоліки. Lifeder.com.
4. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. 2009. Мікробіологічна діагностика Бейлі та Скотта. 12 ред. Аргентина. Редакція Panamericana SA
5. Танкешвар А. Капсульна пляма: принцип, процедура та результати. 2019. Медичний посібник з мікробіології. Доступно на: microbeonline.com