ПЛЯМА ВІД ГРЮНВАЛЬДА-ГІМЗИ: ОБГРУНТУВАННЯ, ТЕХНІКА ТА ВИКОРИСТАННЯ - БІОЛОГІЯ - 2025

Травня Грюнвальд-Гімза або Паппенхайм пляма представляє собою диференційний метод фарбування , який змішує Ґімзо і травень Грюнвальд реагенти. Застосовується для диференціювання нормальних і аномальних клітин крові в мазках периферичної крові та кісткового мозку, а також для фарбування гістологічних зрізів та цитологічних проб.

Обидва реагенти - Giemsa та May Grünwald - походять від фарбування типу Романовського, методу, що ґрунтується на поєднанні кислих та основних барвників.

Мазок, що демонструє сегментований нейтрофіл і мілеоцит у випадку хронічного мієлоїдного лейкозу, зафарбований плямою травня Grünwald Giemsa. Д-р Рамон Саймон-Лопес (https://es.m.wikipedia.org/wiki/Archivo:LMC-1.JPG) через Wikipedia.org.

Giemsa покращила методику, стабілізуючи суміш еозину, метиленового синього та їх похідних із гліцерином. Натомість Мей Грюнвальд використовує еозин та метиленовий синій, використовуючи метанол як розчинник. Це стратегічне поєднання дало чудові результати.

Хоча з точки зору спостереження за клітинною морфологією він діє аналогічно плямам Гімса та Райт, ця методика покращує попередні, очищаючи фарбування паразитами, що викликають малярію, хворобу Шагаса, лейшманіоз та трихомоніаз.

Крім того, це виявилося дуже корисною методикою цитологічного дослідження сперматичної рідини. Він виділявся не лише тим, що демонстрував морфологічні характеристики сперми, але також дозволяючи диференціювати лейкоцити, епітеліальні клітини та клітини сперматогенезу з великою ефективністю.

Основа

Техніка слідує за основою плям Романовського, в яких кислі барвники мають селективну спорідненість до основних клітинних компонентів, а кислотні компоненти приваблюють основні плями.

Пояснено по-іншому, і клітинні структури, і барвники мають позитивні або негативні електричні заряди; як звинувачення відштовхуються, а різні звинувачення приваблюють.

Наприклад, основні барвники, такі як метиленовий синій, позитивно заряджаються і притягуються до негативно заряджених структур. Ось чому цей барвник забарвлює ядра, багаті ДНК та РНК, які мають негативно заряджені фосфатні групи.

Гранули сегментованих базофілів і цитоплазми мононуклеарних лейкоцитів, що містять РНК, також фарбуються.

Так само кислотний барвник несе негативний заряд, через що він зв’язується з позитивно зарядженими структурами, такими як еритроцити та гранули сегментованих еозинофілів. Що стосується гранул сегментованих нейтрофілів, то вони фіксують обидва барвники.

Різноманітність барвників

У цій техніці співіснує реакція між ортохроматичними та метахроматичними барвниками. Ортохроматики (еозин і метиленовий синій) зв’язуються з клітинною структурою, з якою вони пов'язані, і забезпечують стійке забарвлення, яке не змінюється.

З іншого боку, метахромати (похідні метиленового синього блакитного кольору А та блакитного кольору В) змінюють свій початковий колір після того, як вони прикріплені до конкретної структури, і навіть можуть бути різноманітні відтінки.

Нарешті, крок, який приймає розчин Мей Грюнвальда, вимагає наявності води, оскільки без цього барвник проникне в структури, але не зафіксується. Щоб це відбулося, барвник повинен стати полярним або іонізуватись, і таким чином мати можливість осаджуватися та зв'язуватися із спорідненими структурами.

Техніка

матеріали

- Слайди слайдів.

- Мости забарвлення.

- рішення Мей-Грюнвальд.

- пляма Гімзи.

- Дистильована вода.

Може концентрований розчин барвника Грюнвальда

0,25 г еозину-метиленового синього (пляма за Мей Грюнвальдом) слід зважити і розчинити в 100 мл метанолу. Потім препарат перемішують на 1 годину і залишають відпочивати на 24 години. Після закінчення часу його фільтрують.

Щоб застосувати техніку, барвник травня Грюнвальда необхідно розвести наступним чином: на 200 мл розведеного барвника відміряйте 30 мл концентрованого розчину, додайте 20 мл буферного розчину і 150 мл дистильованої води з доведенням pH 7,2-7,3 . Пізніше його перемішують і фільтрують.

Концентрат плям Giemsa

0,5 г лазурно-еозино-метиленового синього (пляма згідно Giemsa) необхідно зважити, розчинити у 50 мл метанолу та 50 мл гліцерину, що додається до суміші.

Для виконання методики розведіть 1:10 буферним розчином і дайте йому відпочити 10 хвилин. При необхідності його можна фільтрувати.

Приготування буферного розчину при рН 7,2

Вони повинні бути зважені:

- 40 мг двогідрофосфату калію (KH2PO4).

- 151 мг двонатрієвого гідрофосфату двонатрію (Na2HPO4).

Обидві сполуки розчиняють у 100 мл води.

Процедура фарбування мазка крові або кісткового мозку

Є два режими: класичний і швидкий.

Класичний режим

1. Накрийте мазки на 2–3 хвилини розведеним розчином травня-Грюнвальда.
2. Промийте забуференною дистильованою водою, щоб видалити попередній розчин.
3. Накрийте тим же забуференним миючим розчином і залиште на 1 хвилину. Ідея полягає в тому, що попередній барвник закріплюється на структурах і в той же час клітини зволожуються.
4. Додайте 12 крапель розведеної настоянки Giemsa в воду, що охолоджується, і продуйте, щоб перемішати і гомогенізувати. Дайте йому відпочити 15-20 хвилин.
5. Вимийте мазки буферованою дистильованою водою і поставте на повітряне просушування.
6. Фокусуйте та переглядайте забарвлені клітини крові під світловим мікроскопом, використовуючи об'єктив 40X. При необхідності можна використовувати 100X.

Швидкий режим

1. Накрийте мазок розведеною плямою травня Грюнвальда на 1 хвилину.
2. Промийте забуференною дистильованою водою.
3. Залийте буферною водою і дайте їй відпочити 1 хвилину.
4. Додайте розведену пляму від Giemsa і залиште на 5 хвилин.
5. Промийте забуференною дистильованою водою і дайте висохнути на повітрі.

Описані тут методики є керівними принципами, але слід враховувати, що процедури та час фарбування різняться залежно від комерційної компанії, яка розповсюджує реактиви. Доцільно дотримуватися кроків, строго вказаних кожним комерційним будинком.

Техніка фарбування мазків сперматичної рідини

1- Покрийте мазок тонким шаром розчину травня Грюнвальда на 4 хвилини.

2- Видаліть барвник і промийте дистильованою водою.

3- Помістіть шар розведеної Giemsa (1:10) у дистильовану воду на 15 хвилин.

4- Видаліть барвник і промийте дистильованою водою.

5- Дайте висохнути і спостерігайте під мікроскопом.

Очікувані кольори з плямою травня Grünwald Giemsa

Важливі технічні характеристики

Методика вимагає, щоб реагенти та промивні розчини мали рН, відрегульований до 7,2 -7,3, щоб спорідненість барвників до клітинних структур не була спотвореною і очікуваний кінцевий колір не змінювався.

Програми

Ця методика використовується в клінічних лабораторіях для фарбування мазків периферичної крові та кісткового мозку, зрізів тканин та цитологій.

У гематологічній галузі ця методика має життєво важливе значення при вивченні аномалій клітин за формою, розміром та кількістю. Це дуже цінний інструмент для діагностики певних захворювань, таких як лейкемія та анемія.

Крім того, це надзвичайно корисно при пошуку паразитів у гематологічних (Plasmodium sp та Trypanosoma cruzi) або гістологічних (Leishmanias sp) областях.

Вагінальна цитологія

Що стосується цитології піхви, то ця методика є особливо вигідною для спостереження за тріхомонадою вагінальної. Це важлива знахідка, оскільки його наявність імітує картини раку in situ, які згодом зникають, коли паразит усувається.

Зразок сперми

Він був ідеальним інструментом для дослідження зразків сперми, оскільки надає цінну інформацію про якість сперми.

Дані, які він пропонує, стосуються в основному кількості та морфології, а також супутніх клітин, які можуть бути присутніми, і які мають життєво важливе значення, таких як статеві клітини, лейкоцити та епітеліальні клітини.

За допомогою цього аналізу можна описати відхилення, які спостерігаються у сперми в голові, шиї, акушерці та головному шматку.

Крім того, вони також можуть допомогти виявити випадки гемоспермії (наявність еритроцитів у спермі) та лейкоспермії або піоспермії (збільшення кількості лейкоцитів у спермі).

Список літератури

1. Costamagna S, Prado M. Валідація свіжого тесту, плями Грюнвальда-Гімса та Грамса та культуральні середовища для діагностики Trichomonas vaginalis. Паразитол. 2001 р .; 25 (1-2): 60-64. Доступно на: scielo.
2. Merck KGaA Laboratory. Травень Grünwald еозин метиленовий синій для мікроскопії.
3. "Пляма травень-Грюнвальд-Гімса". Вікіпедія, Вільна енциклопедія. 15 листопада 2018, 14:37 UTC. 8 січня 2019, 04:29: en.wikipedia.org
4. Лабораторія панкреаків скляних хімікатів. Реагенти для гістологічних методик, гематології та мікробіології. Доступний за адресою: glasschemicals.com
5. Retamales E, Manzo V. Рекомендація щодо фарбування мазків крові для зчитування гемограми. Національна та референтна біомедична лабораторія. Інститут громадського здоров’я Чилі.
6. Сарабія Л. Сперміограма за критеріями ВООЗ. Програма розвитку анатомії та біології. Школа медицини. Університет Чилі. Доступний за адресою: pp.centramerica.com