НЕГАТИВНЕ ФАРБУВАННЯ: ОБГРУНТУВАННЯ, ТЕХНІКА, ПЕРЕВАГИ ТА НЕДОЛІКИ - БІОЛОГІЯ - 2025

Негативне фарбування є методом спеціального фарбування , щоб виділити наявність капсули в деяких мікроорганізмах , в основному Пневмококк, Klebsiella пневмонії і Cryptococcus neoformans-, з клінічних зразків або чистих культур.

Прямий зразок, який зазвичай використовується для нанесення негативного фарбування, - цереброспінальна рідина. Ця методика є швидкою альтернативою припущенного діагнозу менінгіту, особливо Cryptococcus neoformans.

A. Стоматологічний зубний камінь, забарвлений чорнилом Індії, B. Cryptococcus neoformans var gatti слабо інкапсульований, як це відбувається в природі, використовуючи нігрозин. C. Cryptococcus neoformans var gatti з товстою капсулою, як виявлено в її паразитарній формі, використовуючи нігрозин. D. Cryptococcus neoformans з слабо розведеним чорнилом Індії. Gisell Quinde, з Wikimedia Commons / CDC, через Wikimedia Commons / Кредит для фотографій: Постачальники вмісту: CDC / Dr. Леанор Хейлі, через Wikimedia Commons

Так само ця пляма може бути нанесена на мокроту і стерильні рідини взагалі, а також на штами, отримані з молодих чистих культур. Ця методика використовує нігрозінові або індійські чорнила для його виконання; тому застосовувати дуже просту і недорогу методологію, яка надає інформацію, яка має велику діагностичну цінність за короткий час.

У цьому сенсі будь-яка лабораторія здатна виконувати це фарбування. Звичайно, лабораторія повинна мати кваліфікований персонал, здатний розпізнавати виділені або породжені дріжджі Cryptococcus neoformans та диференціювати їх від лейкоцитів та артефактів, які може мати зразок.

Основа

Чорнила Нігрозин та Індія працюють аналогічно; отже, будь-яку з двох речовин можна використовувати взаємозамінно.

Цей прийом називають негативним фарбуванням, оскільки він діє протилежним чином решті методів фарбування. У цьому, що залишається невирішеним, це структура, яку шукають або яку хоче бачити; тобто мікроорганізми.

Тому фарбування ґрунтується на фарбуванні дна мазка темним кольором. У цьому сценарії капсульовані структури будуть виділятися світлим або безбарвним кольором.

Взагалі дріжджі рефлекторні, оточені прозорим ореолом, що відповідає капсулі. Це відбувається тому, що чорнило та нігрозин індії є речовинами, не здатними проникати в полісахарид, що складається з капсули живих мікроорганізмів.

Варто зазначити, що інші структури, які можуть бути присутніми в прямому зразку, такі як лейкоцити або еритроцити, також не проникають.

Однак якщо мікроорганізми мертві, барвник може проникнути всередину них, так що це фарбування також корисно оцінити життєздатність мікроорганізмів.

Техніка

матеріали

Нігрозин

Нігрозин зобов'язаний своєю назвою чорному кольору. Це синтетична речовина, яка отримується при нагріванні суміші органічних сполук, таких як нітробензин, анілін та аніліну гідрохлорит, з використанням каталізатора (заліза або міді) у зазначеній реакції.

Китайська чорнило

Китайська чорнило - це речовина, яка в основному використовується азіатами для письма, виготовлення творів мистецтва та монохроматичного живопису. Це дуже популярно в китайській культурі.

Його отримують із чорнила з кальмарів, змішаного з порошкоподібним вугіллям, продуктом спалювання низько смолистих дерев.

Можна також приготувати його від сажі від спалювання вуглеводнів (рослинних масел) разом з білковим желатином, який надає йому правильної консистенції, щоб уникнути осадження частинок вуглецю.

Технічні умови для відбору проб

- Це не вимагає посту.

- Зразок з CSF, мокротиння або стерильної рідини повинен містити не менше 1 мл об'єму і негайно бути переданий в лабораторію при кімнатній температурі.

- Зразки ЦСЖ та стерильних рідин повинні бути взяті спеціалізованим лікарем.

- Це також може бути чиста культура підозрілого штаму, пов'язаного з вищезгаданими збудниками.

Виконання методики з прямими зразками

- Зразки необхідно центрифугувати, потім супернатант відкидають і осад відбирають.

- Крапля центрифугованого матеріалу (осаду) і крапля індійського чорнила або нігрозину поміщаються на чисту гірку.

- Його слід добре перемішати і накрити простирадлом, щоб крапля поширилася як тонка плівка, не переходячи по краях.

- Згодом препарат встановлюють на мікроскоп.

- Якщо препарат занадто темний, його можна розбавити водою.

Виконання методики зі штамами з культури

- Дуже невелику порцію молодої культури беруть насінням голкою і розчиняють у краплі індійського чорнила, попередньо поміщеної на чисту гірку.

- Зверху розміщується покривала.

- Він спостерігається в мікроскопі в 10X, а потім при 40X.

Можна також розчинити частину колонії в дистильованій воді, а звідти взяти краплю і змішати її з чорнилом Індії. Таким чином препарат не буде настільки густим, що дозволяє спостерігати за конструкціями ізольовано; якщо є натовп, це буде недостатньо спостерігатися.

Інша методологія така:

- Покладіть краплю культури суспензії на один кінець гірки.

- Помістіть крапку нігрозину в той же кінець і перемішайте.

- За допомогою іншого слайда розкладіть зразок так, ніби роблячи гематологічний мазок.

- Дайте висохнути і спостерігайте під мікроскопом.

Спостереження під мікроскопом

Спочатку потрібно сфокусуватись із ціллю 10X, щоб мати широкий вигляд поля. Згодом слід шукати, якщо є чіткі пробіли; якщо є, фокусуйте 40X, щоб переглянути деталі.

Перевага

- Це легко виконати.

- Це недорога техніка.

- Цей метод не вимагає, щоб мазок фіксувався на нагріванні або з хімічними речовинами; тому мікроорганізми спостерігаються без спотворень.

- Свіжий препарат не потрібно сушити, тому його можна спостерігати негайно, швидко даючи результати.

Недоліки

Після збирання свіжі препарати потрібно негайно спостерігати; якщо їм дають висохнути, спостерігати за ними більше неможливо, і потрібно встановити нове.

Фарбування тканини чорнилом Індії

Інша функція, яку чорнила Індії можуть виконувати, - це в лабораторіях з патології. Це застосовується до хірургічно витягнутих зразків тканин з метою позначення меж резекції пухлини.

Позначена тканина обприскується оцтовою кислотою. Це діє як морилка і запобігає витіканню чорнила, коли тканина піддається рутинній обробці для препарату біопсії.

Процедура складається з купання тканини в спирті та ксилолі, а потім замочування її в парафіновому воску. Це маркування спрямовує патологоанатома при спостереженні за тканиною, вказуючи, де знаходиться хірургічна межа резекції або інша цікава точка.

Список літератури

1. «Нігросіна». Вікіпедія, Вільна енциклопедія. 11 липня 2017, 22:46 UTC. 6 січня 2019, 16:56: en.wikipedia.org
2. "Китайська чорнило". Вікіпедія, Вільна енциклопедія. 1 жовтня 2018, 03:08 UTC. 6 січня 2019, 18:20: es.wikipedia.org/
3. Silva L, Silva C, Fernández N, Bueno C, Torres J, Rico M, Macías J та співробітники. (2006). Трудовий персонал автономної громади Естремадури. Конкретний порядок денний Том IV. Редакція MAD. Севілья-Іспанія, с. 211-212.
4. Silva M, García M, Corrales J, Ponce E. (2006), спеціаліст-лаборант, Галицька служба охорони здоров'я (SERGAS). Конкретний том теми порядку денного 2. Редакція MAD. Севілья-Іспанія, стор 79-80.
5. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. 2009. Мікробіологічна діагностика Бейлі та Скотта. 12 ред. Аргентина. Редакція Panamericana SA