- Основа
- Підготовка
- Домашнє приготування жовчного ескулінового агару
- Отримання жовчного ескулінового агару з комерційного середовища
- Програми
- Посіяно
- Інтерпретація
- QA
- Обмеження
- Список літератури
Жовчі ескулін агар є селективним і диференціальної середовищем твердої культурою. Він використовується як діагностичний тест для визначення здатності певного мікроорганізму рости в середовищі, що містить жовч, а також розщеплювати глюкозид ескулін на ескулетин та глюкозу.
Цей діагностичний тест застосовується для диференціації видів роду Streptococcus, що належать до групи D (жовчний ескулін позитивний), від інших груп стрептококів, які негативно реагують на цей тест.
Пластина жовчного ескулінового агару, засіяна штамом ентерококу (тест позитивний). Джерело: Не надано машиночитаного автора. Філіппінль припускається (на основі претензій щодо авторських прав).
Слід зазначити, що деякі стрептококи групи віруданів можуть гідролізувати ескулін, але не здатні рости в присутності жовчі в концентрації 40%, тому в цій середовищі реакція для цієї групи негативна.
З іншого боку, ескулінове середовище жовчі також є корисним для діагностики видів Listeria monocytogenes або Aerococcus sp, оскільки ці мікроорганізми є позитивними на жовчний ескулін.
Ескуліновий жовчний агар складається з пептона, м'ясного екстракту, жовчної жовчі, ескуліну, цитрату заліза, агару та дистильованої води. Деякі комерційні будинки включають азид натрію до складу середовища.
Засіб можна приготувати в лабораторії, якщо у вас є всі сполуки окремо, або їх можна приготувати з комерційного зневодненого середовища.
Основа
Жовчноескулінове середовище містить пептони та екстракт м'яса, обидва сполуки забезпечують необхідні поживні речовини для росту мікроорганізмів.
Він також містить ескулін; Ця сполука являє собою глікозид, утворений об'єднанням простого моносахариду (глюкози) із сполукою, званою 6,7-дигідроксикумарином або ескулетином (аглюконом), зв’язаною ацетальною або глюкозидною зв'язком.
Тест заснований на тому, щоб показати, чи здатна бактерія гідролізувати ескулін. Якщо це відбувається, ескулін розпадається на ескулетин та глюкозу. Ескулетина вступає в реакцію з присутнім в середовищі залізом, утворюючи темно-коричневу, майже чорну сполуку.
Це означає, що цитрат заліза виконує роль збудника реакції. Ця характеристика робить білковий ескуліновий агар диференційованим середовищем.
Зі свого боку жовч є інгібітором, який перешкоджає зростанню деяких мікроорганізмів, тому бактерія, перш ніж розщеплювати ескулін, повинна бути здатна рости в присутності жовчі. Тому цей засіб вважається вибірковим.
Бактерії, які можуть розвиватися в цьому середовищі, - це переважно ті, що живуть у кишковому середовищі.
У цьому сенсі деякі комерційні компанії додають азид натрію до середовища, щоб додатково пригнічувати ріст кишкових грам негативних бацил, збільшуючи селективність середовища для зростання стрептокока.
Нарешті, агар надає середовищі тверду консистенцію, а вода є розчинником сполук.
Підготовка
Домашнє приготування жовчного ескулінового агару
Зважити:
5 г пептонів
3 г м'ясного екстракту
40 г яловичої жовчі
1 г ескуліну
0,5 г цитрату заліза
15 г агару
1000 мл дистильованої води
У разі додавання азиду натрію зважують 0,25 г / л і додають до суміші.
Розчиняють компоненти в літрі дистильованої води, нагрівають до повного розчинення сполук. Розподіліть 5 мл у пробірки з гвинтовими кришками розміром 16 х 125 мм. Автоклав при 121 ° С, 15 фунтів тиску протягом 15 хвилин.
Вийміть з автоклава і нахиліть трубки на підставку, щоб агар твердне у широкому дзьобі флейти.
Зберігати в холодильнику до використання. До посіву довести до кімнатної температури.
Пластини з жовчним ескаліновим агаром також можна приготувати; в цьому випадку вся суміш автоклавується в колбі і згодом розподіляється в стерильні чашки Петрі. Дайте їм затвердіти і зберігайте в холодильнику.
РН середовища повинен бути 6,6 ± 0,2.
Отримання жовчного ескулінового агару з комерційного середовища
Зважте кількість, вказану вставкою. Це може відрізнятися від одного бізнес-будинку до іншого. Згодом дійте так само, як описано вище.
РН середовища повинен бути 6,6 ± 0,2. Колір зневодненого середовища світло-бежевий, а підготовлений засіб - темно-бурштиновий.
Комерційне жовчне ескулінове середовище. Джерело: Фото зроблено автором MSc. Маріельса Гіл.
Програми
Середовище ескуліну жовчі використовується в основному для диференціювання стрептокока групи D (жовчний ескулін позитивний), від решти стрептококових груп (жовчно-ескулінонегативний).
Поєднавши тест на зростання гіперсольованого відвару з тестом на ескулін жовчі, можна визначити особливу групу стрептококів групи D під назвою ентерококк.
Ця особлива група стрептококів належить до групи D вищезгаданого роду, і вони здатні гідролізувати ескулін у присутності жовчі, як і інші члени групи D, але вони також здатні розвиватися у гіперсольованому середовищі (BHI з хлоридом 6,5% натрію), властивість, яка робить різницю.
Тому стрептококи, які гідролізують ескулінову жовч, але не ростуть у гіперсольованому бульйоні, називаються стрептококами групи D.
Посіяно
Зараховувати середовище бажано з чистого відвару Тодда-Хьюітта протягом 24 годин.
Додайте 2 краплі на поверхню середовища піпеткою Пастера і розкладіть в середовищі платиновою петлею.
Інкубуйте при 35 ° С протягом 48 годин, поки час інкубації дотриманий, його можна контролювати, щоб побачити, чи є позитивна реакція. Якщо наприкінці часу реакція залишається негативною, її можна інкубувати до 72 годин.
Інтерпретація
Позитивна реакція : поява темно-коричневого, майже чорного кольору у дзьобі флейти (у випадку проби з пробіркою) або почорніння агару навколо колоній (у випадку з пластинковою пробою).
Негативна реакція : не спостерігається чорніння середовища або чорний колір менше ніж в половині пробірки після 72 годин інкубації. З іншого боку, ріст бактерій у середовищі без появи чорного кольору слід вважати негативним тестом.
QA
Для оцінки якості середовища, штам Enterococcus faecalis ATCC 29212 повинен бути доступний як позитивний контроль, а штам стрептокока, що не належить до групи D, як негативний контроль.
Обмеження
-Меди, які не містять азид натрію, дозволяють виростити кишкові грам негативні бацили. Деякі з них можуть почорніти середину.
- Деякі комерційні будинки додають низьку концентрацію жовчі (10%), і з цієї причини деякі стрептококи, які не належать до групи D, можуть розвиватися в середовищі і гідролізувати ескулін, що може породжувати помилки в інтерпретації.
Список літератури
- Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Мікробіологічна діагностика. 5-е видання. Редакція Panamericana SA Аргентина.
- Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Мікробіологічна діагностика Бейлі та Скотта. 12 ред. Редакція Panamericana SA Аргентина.
- Мак Фаддін Дж. (2003). Біохімічні тести для виявлення бактерій клінічного значення. 3-е вид. Редакція Panamericana. Буенос-Айрес. Аргентина.
- Лабораторія Британія. Ескулінова жовч з азидним агаром. 2015. Доступний за адресою: britanialab.com
- "Жовчний ескуліновий агар". Вікіпедія, Вільна енциклопедія. 22 серпня 2017, 17:30 UTC. 22 квітня 2019, 17:35. es.wikipedia.org.
- Laboratorios Bd. Bile Esculin Agar Snts. 2015. Доступний за адресою: bd.com
- Неогенні лабораторії. Жовчний ескуліновий агар. Доступно за адресою: foodsafety.neogen.com