ЦИГАРНИЙ АГАР SIMMONS: ОБГРУНТУВАННЯ, ПРИГОТУВАННЯ ТА ВИКОРИСТАННЯ - БІОЛОГІЯ

Агар Сіммонс цитрату це твердий носій , який використовується в якості біохімічних тестів ідентифікації мікроорганізмів, особливо гр - негативні бацил. Оригінальний носій був створений Косером у 1923 році.

Середовище цитрату Косера складалося з бульйону, що містить фосфат натрію, фосфат амонію, монокалієвий фосфат, сульфат магнію та цитрат натрію.

A. Торгова середовище цитратного агару з зневодненим симоном В. Підготовлений цитратний агар Simmons. Джерело: А. Фото зроблено MSc. Маріельса Гіл Б. Roto2esdios, з Вікісховища

Як видно, єдиним джерелом вуглецю в середовищі є цитрат, а азоту - фосфат амонію, опускаючи білки та вуглеводи як джерело цих елементів, вони зазвичай є в інших середовищах.

Тому бактерії, що прищеплюються в цьому середовищі, можуть розмножуватися лише в тому випадку, якщо він здатний вбирати вуглець з цитрату. Випробування було позитивним, якщо в середовищі була помутніння, проте він мав недолік, що може виникнути неспецифічна помутніння.

Цю проблему вирішив Сіммонс, додавши бромотимоловий синій колір і агар до початкової формули Козера. Хоча принцип однаковий, він трактується по-різному.

Основа

Деякі бактерії мають здатність виживати за відсутності бродіння або вироблення молочної кислоти, потребуючи отримання енергії за рахунок використання інших субстратів. У цьому тесті єдиним пропонованим джерелом вуглецю є цитрат.

Бактерії, які здатні вижити в цих умовах, швидко метаболізують цитрат за альтернативою традиційному шляху, використовуючи цикл трикарбонової кислоти або цикл бродіння цитрату.

Катаболізм цитрату бактеріями включає ферментативний механізм без втручання коензиму А. Цей фермент відомий під назвою цитриказа (цитрат оксалоацетатний ліаз) або цитратна десмолаза. Реакція вимагає наявності двовалентного катіону, який у такому випадку постачається магнієм.

Реакція утворює оксалоацетат і піруват, які потім дають органічні кислоти в середині лужного рН, утвореного при використанні джерела азоту. Ці органічні кислоти використовуються як джерело вуглецю, що генерує карбонати та бікарбонати, ще більше підщеплюючи середовище.

Режим посіву

Цитратове середовище Сіммонса слід злегка прищепити до рибного хвоща за допомогою прямої петлі або голки та інкубувати протягом 24 годин при температурі 35-37 ° С. Після закінчення часу результати спостерігаються.

Посів проводиться тільки на поверхню агару. Не проколюйте.

Інтерпретація

Якщо середовище залишається початковим кольором (зеленим) і немає видимого зростання, тест є негативним, але якщо середовище синіє, це вказує на наявність лужних продуктів, що виявляється за показником pH. У цьому випадку тест є позитивним.

Цитрат (+) і (-). Джерело: MSc Маріельса гіл

Це відбувається тому, що якщо бактерія використовує вуглець цитрату, вона також здатна приймати азот фосфату амонію, з яким вивільняє аміак, підкислюючи середовище.

З іншого боку, якщо зростання бактерій спостерігається в середовищі, але немає зміни кольору, тест також слід вважати позитивним, оскільки, якщо є зростання, це означає, що бактерії змогли використовувати цитрат як джерело вуглецю, хоча в даний час немає зміни pH (іноді це може зайняти час).

Якщо є сумніви в інтерпретації кінцевого кольору, його можна порівняти з неінокульованою цитратною пробіркою.

Підготовка

На один літр води зважте 24,2 г зневодненого середовища. Перемішайте і дайте йому відпочити приблизно 5 хвилин. Закінчіть розчинення середовища нагріванням протягом 1 або двох хвилин, часто струшуючи.

Налийте 4 мл у пробірки і автоклавуйте при 121 ° С протягом 15 хвилин. Виходячи з автоклава, нахиліться за допомогою підставки таким чином, щоб агар твердне у формі дзьоба флейти з невеликим блоком або дном і більше скосом.

Кінцевий pH цитратного середовища - 6,9 (зелений колір). Ця середовище дуже чутлива до змін pH.

При рН 6 або нижче середовище жовтіє. Цей колір не спостерігається при тесті на бактерії.

А при рН 7,6 або вище середовище стає глибоким прусським синім.

Використовуйте

Цитратний агар Simmons використовується для ідентифікації певних мікроорганізмів, особливо бацил, що належать до сімейства Enterobacteriaceae, та інших бацилів, що не ферментують глюкозою.

Джерело: Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Мікробіологічна діагностика. 5-е видання. Редакція Panamericana SA Аргентина.

Заключні думки

Цитратна середовище Сіммонса - це дуже делікатний тест, оскільки помилкові позитиви можна отримати, якщо будуть допущені певні помилки.

Потрібно бути обережним:

Інокулум

Не слід робити дуже товстий або навантажений бактеріальний прищеп, оскільки це може спричинити заростання мідно-жовтого кольору в місці посіву, не впливаючи на решту середовища, але це може призвести до того, що існує ріст. Це не означає позитивності тесту.

Також товстий інокулум може генерувати помилковий позитив, оскільки органічні сполуки, утворені в клітинних стінках відмираючих бактерій, можуть виділяти достатню кількість вуглецю та азоту, щоб перетворити показник рН.

Тому ідеальною є сіяння, використовуючи голку замість платинової ручки, щоб уникнути зайвого матеріалу.

Посіяно

З іншого боку, коли акумулятор біохімічних тестів для ідентифікації відповідного мікроорганізму висівають, важливо, щоб цитратна проба була першою щепленням, щоб уникнути перенесення білків або вуглеводів з іншого середовища.

За цієї обставини можна отримати помилковий позитив, оскільки будь-яка з цих речовин, які введені помилково, буде метаболізуватися і спричинить зміну pH.

Ще один спосіб уникнути переносу речовин - це добре спалити петлю і взяти новий прищеп між одним і іншим тестом.

Необхідно також бути обережними при дотику до колонії для виконання прищепи, оскільки слід уникати перетягування частини агару з культури, з якої походять бактерії, у зв'язку з вищесказаним.

У цьому сенсі Матсен, Шерріс і Бренсон рекомендують розвести інокулум у фізіологічному розчині перед щепленням цитратним тестом, щоб уникнути перенесення інших джерел вуглецю.

Інтенсивність кольору

Слід враховувати, що інтенсивність кольору, що випускається, коли тест є позитивним, може змінюватися залежно від комерційного будинку.

Крім того, є мікроорганізми, які тестують позитивну реакцію через 24 години, але є й інші штами, яким потрібно 48 годин і більше, щоб виробляти зміну pH.

Список літератури

Мак Фаддін Дж. (2003). Біохімічні тести для виявлення бактерій клінічного значення. 3-е вид. Редакція Panamericana. Буенос-Айрес. Аргентина.
Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Мікробіологічна діагностика Бейлі та Скотта. 12 ред. Редакція Panamericana SA Аргентина.
Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Мікробіологічна діагностика. 5-е видання. Редакція Panamericana SA Аргентина.
BD Laboratories. Цитрат агар-цинрат BBL Simmons. 2015. Доступний за адресою: bd.com
Britannia Laboratories. Цитрат-агар Simmons. 2015. Доступний за адресою: britanialab.com
Діагностичні лабораторії Valtek. Цитрат-агар Simmons. 2016. Доступний за адресою: andinamedica.com.

ЦИГАРНИЙ АГАР SIMMONS: ОБГРУНТУВАННЯ, ПРИГОТУВАННЯ ТА ВИКОРИСТАННЯ - БІОЛОГІЯ - 2025