ВІДВАР З МАЛИНАТУ: ОСНОВА, ПІДГОТОВКА ТА ВИКОРИСТАННЯ - БІОЛОГІЯ - 2025

Малонат бульйон є середовище рідкої культури використовується для діагностичного тесту (малоната), використовується для диференціації деяких пологів сімейства Enterobacteriaceae. Він був створений Лейфсоном у 1933 році та пізніше модифікований Евінг, який додав невелику кількість екстракту декстрози та дріжджів до початкової формули.

На сьогоднішній день засіб складається з дріжджового екстракту, сульфату амонію, дикальфосфату, фосфату монокалію, хлориду натрію, малонату натрію, декстрози та бромотимолу синього кольору. Цей тест, як правило, входить до батареї біохімічної ідентифікації Enterobacteriaceae, що допомагає диференціювати певні пологи та види.

Графічне зображення малонатного тесту. A. Негативний тест, B. (Підкислення) Негативний тест, С. (Середня лужність) Позитивний тест. Джерело: Кольорові трубки publicdomainpictures.net

Малонатний тест в основному заснований на здатності деяких мікроорганізмів використовувати малонат натрію в якості єдиного джерела вуглецю, а сульфат амонію в якості джерела азоту.

Малонатний тест зазвичай позитивний у деяких видів родів Enterobacter, Klebsiella та Citrobacter. Тоді як більшість видів родів Escherichia, Salmonella, Shigella, Edwardsiella, Yersinia, Serratia, Morganella, Proteus і Providencia, дають негативну реакцію.

Основа

Тест малонат складається з показу тих бактерій, які здатні використовувати малонат натрію як єдине джерело вуглецю, а сульфат амонію як джерело азоту.

Більшість ентеробактерій, які не використовують малонат, здатні рости в цьому середовищі, приймаючи декстрозу та екстракт дріжджів як поживні речовини.

У цьому випадку будь-яка спроба лугати застосування пептонів буде протидіяти виробленню кислот, що утворюються в результаті бродіння декстрози. Аналогічно, фосфати двокалію та монокалію діють як буфер, підтримуючи pH на рівні 6,7.

Ось чому, коли тест негативний, бульйон залишається того ж початкового кольору (зелений). У рідкісних випадках середовище може стати кислим через бродіння декстрози; без використання пептонів та показника рН воно перетворило б колір середовища на жовтий. Щоб це сталося, pH повинен знизитися до 6.

Однак, коли цей тест є позитивним, говорять, що мікроорганізм використовував малонат і сульфат амонію як джерела вуглецю та азоту відповідно, не використовуючи інших компонентів.

У цьому випадку середовище стає лужним у зв’язку з виділенням натрію та наслідком утворення NaOH. У цьому сенсі показник рН (бромотимоловий синій) перетворює колір середовища з зеленого в синій, коли pH дорівнює або перевищує 7,6. Синій може бути легким або інтенсивним (прусський синій).

Нарешті, хлорид натрію підтримує осмолярність середовища, а вода є розріджувачем усіх компонентів.

Інтерпретація

Відвар одного кольору (зелений) - негативний тест

Жовтий відвар: негативний тест

Світлий або глибокий синій бульйон: тест позитивний

Існує варіант, який називається відваром фенілаланіну малоната, який також називають середовищем Шоу і Кларка. У цьому випадку можна проаналізувати два випробування, використання малоната як джерела вуглецю та отримання піровиноградної кислоти з фенілаланіну.

Підготовка

Відвар з малина

Кількість грамів, визначених вкладишем обраної комерційної компанії, зважується (може змінюватись від одного до іншого). Зважені грами суспендують в одному літрі дистильованої води. Злегка нагрійте до повного розчинення. Розподіліть 3 мл середовища в пробірки 13/100 з бавовняними кришками.

Стерилізують в автоклаві при 121 ° С протягом 15-20 хвилин.

Охолодити перед використанням. Якщо вони не будуть використані негайно, зберігайте в холодильнику до використання. Довести бульйони до кімнатної температури перед щепленням.

РН середовища повинен бути 6,7 ± 0,2. Колір підготовленого середовища буває зеленим.

Відвар фенілаланіну малонатний

Відважте 11 г зневодненого середовища і розчиніть в 1 літрі дистильованої води. Решта препарату така ж, як описана раніше.

Його також можна приготувати, додавши 2 г / л фенілаланіну в середовище відвару малонат перед стерилізацією.

Використовуйте

Він використовується як частина акумуляторів біохімічних тестів, які збираються для ідентифікації бактерій родини Enterobacteriaceae.

Допомагає розрізняти:

-Рід Klebsiella та Enterobacter (+) з роду Escherichia та Serratia (-).

-Види Salmonella enterica ssp arizonae, Salmonella enterica ssp salame і Salmonella enterica ssp diarizonae (+), з виду Salmonella enterica ssp enterica (-).

-З роду Klebsiella взагалі (+) з роду Actinobacillus (-).

- Іноді це може сприяти диференціації родів і видів бактерій, що не належать до сімейства Enterobacteriaceae, наприклад серед неферментуючих грамотрицальних бацил Alcaligenes faecalis (+) та Acinetobacter sp (-).

Джерело: Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Мікробіологічна діагностика. 5-е видання. Редакція Panamericana SA Аргентина.

Процес

Під запальничку беруть порцію чистого одеколону, використовуючи правильно стерилізовану і охолоджену платинову ручку. Взятий зразок (легкий інокулум) розчиняють у малонатному бульйоні. Інкубуйте кришкою при аеробіозі при температурі 35 ° С ± 0,2 протягом 24 - 48 годин.

Малочний бульйон можна також прищеплювати з 18-24 годинної культури в соєвий бульйон триптикази. У цьому випадку стерильною піпеткою приймають 0,01 мл, а відвар малонату прищеплюють. Інкубуйте кришкою при аеробіозі при температурі 35 ° С ± 0,2 протягом 24 - 48 годин.

В кінці часу результати інтерпретуються. Будь-який слід блакитного кольору після 48 годин інкубації слід вважати позитивним. Тест не слід інтерпретувати як негативний, поки не закінчиться 48 годинний час інкубації.

У разі використання варіанту бульйонного відвару фенілаланіну спочатку інтерпретують малонат, після чого додають 5 крапель 1н HCl та 3-5 крапель 8% хлориду заліза. Темно-зелений колір трактується як позитивний тест на фенілаланін. Якщо, з іншого боку, середовище стає блідо-синім, тест на фенілаланін негативний.

QA

Для здійснення контролю стерильності середовища слід інкубувати один або два бульйони при температурі 35 ° С ± 0,2 протягом 24 годин інкубації. Після закінчення цього часу не повинно бути помутніння або зміни кольору.

Для контролю якості можуть використовуватися відомі або сертифіковані штами, такі як: Enterobacter aerogenes ATCC 13048, Klebsiella pneumoniae ATCC 33945, Salmonella enterica ssp arizonae ATCC 13314 та Escherichia coli ATCC 25922.

Очікувані результати:

• Ентеробактер аероген, Klebsiella pneumoniae та Salmonella enterica ssp arizonae дають позитивну реакцію (середній синій колір).
• Для кишкової палички результат повинен бути негативним, тобто очікується, що не зміниться колір (зелений) або він пожовтіє внаслідок бродіння глюкози.

Обмеження

Не використовуйте відвар, який проявляє помутніння, осад, зміну кольору або будь-які ознаки погіршення.

Список літератури

1. Pedraza J, Sanandres N, Varela Z, Aguirre E, Camacho J. Мікробіологічна ізоляція Salmonella spp. і молекулярні інструменти для його виявлення. Uninorte Health. Barranquilla (Col.) 2014; 30 (1): 73-94. Доступно за адресою: scielo.org.co
2. BBL. Відвар малона, модифікований Юінг. 2007. Доступний за адресою: bd.com
3. Сенна Лабораторії. Відвар Малонато. Доступно за адресою: cientificasenna.com
4. RenyLab. Відвар Малонато. 2013. Доступний за адресою: es.renylab.ind.br
5. Мбіолог Діагностика. Відвар Малонато. Доступно за адресою: mbiolog.com
6. Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Мікробіологічна діагностика. 5-е видання. Редакція Panamericana SA Аргентина.
7. Conda Pronadisa Laboratories. Відвар фенілаланіну малонатний. Доступний за адресою: condalab.com