АГАР БАЙДАР-ПАРКЕР: ОСНОВА, ПІДГОТОВКА ТА ВИКОРИСТАННЯ - БІОЛОГІЯ - 2025

Агар Берда Паркер є твердою середу селективної і диференціальної культури. Він був створений у 1962 році для виявлення та підрахунку коагулазних стафілококів (Staphylococcus aureus).

До його складу входить панкреатичний гідролізат казеїну, м'ясний екстракт, дріжджовий екстракт, хлорид літію, гліцин, піруват натрію, телурит калію, агар та емульсія яєчного жовтка.

Типові колонії стафілокока на агарі Бейрда Паркера. Джерело: Дейзі Джон

Агар Бейрда Паркера заснований на здатності S. aureus знижувати телурит і виробляти лецитиназу. Обидві властивості породжують колонію із специфічними характеристиками для цього виду. Тому він є високоефективним у виявленні цього мікроорганізму.

Типові колонії S. aureus - чорні або темно-сірі, з безбарвною облямівкою і світлим ореолом, який їх оточує, відрізняючи їх від інших мікроорганізмів. Цей збудник можна знайти в клінічних зразках, водах, косметиці, а також сирих або варених продуктах.

Його діагностика або виявлення має надзвичайно важливе значення через різноманітність патологій, які він виробляє, таких як харчові отруєння, синдром ошпареної шкіри, синдром токсичного шоку, абсцеси, менінгіт, септицемія, ендокардит, серед інших.

Основа

Живильна сила

Панкреатичний гідролізат казеїну, м'ясного екстракту та дріжджового екстракту є джерелами поживних речовин, вітамінів і мінералів, необхідних для загального розвитку мікробів, тоді як піруват та гліцин - сполуки, що сприяють специфічному зростанню золотистого стафілокока.

Вибірковий

Агар Baird Parker є вибірковим, оскільки містить речовини, що гальмують ріст супутньої флори, одночасно сприяючи розвитку S. aureus. Інгібіторними сполуками є хлорид літію та телурит калію.

Диференціальний

Цей засіб дозволяє диференціювати S. aureus від решти коагулазних негативних стафілококів. S. aureus має здатність зводити телурит до вільного металевого чорного телуру, утворюючи чорні або темно-сірі колонії.

Так само яєчний жовток забезпечує субстрати для демонстрації присутності ферменту лецитинази та ліпази. S. aureus позитивний на лецитиназу, тому навколо колонії буде спостерігатися чіткий ореол, що свідчить про гідролізацію лецитину.

У цьому сенсі поява на цьому агарі глянцевих чорних або темно-сірих колоній зі світлим ореолом навколо них свідчить про наявність S. aureus.

Якщо утворюється зона опадів, це свідчить про активність ліпази. Деякі штами S. aureus позитивні до ліпази, інші - негативні.

У випадку, якщо S. aureus позитивний до ліпази, навколо чорної або темно-сірої колонії буде спостерігатися непрозора ділянка з подальшим світлим ореолом внаслідок дії лецитинази.

Колонії бактерій, крім S. aureus, здатних рости на цьому середовищі, розвиватимуться безбарвними або бурими колоніями без навколишнього ореолу.

Атипові чорні колонії також можна побачити з безбарвною рамкою або без неї, але без легкого ореолу. Ці колонії не слід враховувати, вони не відповідають S. aureus.

Підготовка

Емульсія яєчного жовтка

Візьміть свіже куряче яйце, добре вимийте його і помістіть його в 70% -ний спирт на 2 - 3 години. Потім яйце розкривається асептично, а білий обережно відокремлюється від жовтка. Після цього беруть 50 мл жовтка і змішують з 50 мл стерильного фізіологічного розчину.

Телуріт калію 1% мас. / Об

Деякі комерційні будинки продають 1% телуриту калію, готового до використання. Його додають у середовище до затвердіння середовища.

Для приготування цього розчину в лабораторії зважують 1,0 г телуриту калію і розчиняють в одній частині води. Згодом кількість води заповнюється до досягнення 100 мл. Розчин необхідно стерилізувати методом фільтрації.

Підготовка культурального середовища

Зважте 60 г зневодненого середовища та розчиніть у 940 мл дистильованої води. Дайте суміші постояти приблизно 5-10 хвилин.

Піддайте тепло, часто перемішуючи середовище, щоб покращити процес розчинення. Доведіть до кипіння хвилину. Стерилізуйте в автоклаві при 121 ° С протягом 15 хвилин.

Дайте постояти до досягнення температури 45 ° C і додайте 50 мл емульсії яєчного жовтка і 10 мл 1% телуриту. Добре перемішайте і вилийте 15-20 мл на стерильний посуд Петрі.

Дати затвердіти, замовити перевернутими в бляшанках і зберігати в холодильнику до використання.

Кінцевий рН підготовленої середовища повинен бути 6,8 ± 0,2.

Перш ніж посіяти зразок, дочекайтеся, коли плита досягне кімнатної температури. Насійте пластини за допомогою просочування або поверхневого висіву шпателем Дригальського.

Колір зневодненого середовища - світло-коричневий, а колір підготовленого - світло-бурштиновий.

Використовуйте

Клінічні зразки

Клінічні зразки висівають безпосередньо, вивантажуючи частину матеріалу на одному кінці пластини, а звідти просочується виснаженням. Інкубуйте протягом 24 - 48 годин при 35-37 ° C.

Зразки їжі

Зважують 10 г харчового зразка і гомогенізують у 90 мл 0,1% пептонної води, звідти при необхідності готують розведення. Пластини в триразовому екземплярі інокулюйте 0,3 мл приготованих розчинів і насіньте на поверхню шпателем Дригальського. Інкубуйте протягом 24 - 48 годин при 35-37 ° C.

Ця методологія дозволяє підрахувати отримані типові колонії і є ідеальною, коли підозра на наявність S. aureus перевищує 10 КУО на г / мл зразка.

Якщо кількість S. aureus є підозрюваним невеликим або є багато супровідної флори, пропонується збагатити пробу в соєвому бульйоні триптикази 10% NaCl і 1% піруватом натрію. Це сприятиме зростанню S. aureus та гальмує розвиток супутньої флори. Каламутні трубочки висівають на агар Бейрд Паркер.

Зразки води

У стерилізованій вакуумній системі фільтрації фільтрують 100 мл досліджуваної води, а згодом 0,4 мкм мікропористу мембрану видаляють стерильними щипцями і поміщають на тарілку Бейрда Паркера. Інкубуйте протягом 24 - 48 годин при 35-37 ° C. Ця методика дозволяє підрахувати типові колонії S. aureus.

QA

Відомі штами, такі як Staphylococcus aureus ATCC 25923, Staphylococcus aureus ATCC 6538, Staphylococcus epidermidis ATCC 12228, Escherichia coli ATCC 25922 або Proteus mirabilis ATCC 43071 можуть бути використані для оцінки якості агару Баїрда Паркера.

У випадку штамів S. aureus ATCC відомо, що вони знижують телурит, і вони є позитивними щодо ліпази та лецитинази. Тому має бути задовільний розвиток і вирощування опуклих колоній з чорним центром і безбарвною облямівкою, з непрозорим ореолом і легким зовнішнім ореолом.

Зі свого боку, на цьому середовищі очікується поганий розвиток S. epidermidis, з буро-сірими до чорними колоніями, без легкого ореолу.

Для кишкової палички та P. mirabilis очікується, що вона повністю або частково пригнічена. У разі зростання бурі колонії розвиватимуться без непрозорої ділянки або легкого ореолу.

рекомендації

-Засоби не слід нагрівати після додавання телуриту та яєчного жовтка.

-Приготування емульсії яєчного жовтка та її додавання в середину є дуже вразливим етапом для забруднення. Потрібно бути надзвичайно обережним.

-Якщо є типові колонії S. aureus, це слід підтвердити встановленням коагулазного тесту на зазначений штам.

-Якщо при коагулазі є сумнівні результати, слід встановити інші підтверджуючі тести.

-Будьте обережні, щоб не переплутати наявність типових колоній S. aureus з атиповими чорними колоніями.

Список літератури

1. Автори Вікіпедії Агар Бейрда-Паркера. Вікіпедія, Вільна енциклопедія. 15 березня 2017 р., 19:36 UTC. Доступно за адресою: wikipedia.org/ Доступ 18 лютого 2019 року.
2. BD Laboratories. Берд Паркер Агар. 2006. Доступний за адресою: bd.com
3. Britannia Laboratories. Агарна база Бейрд Паркер. 2015. Доступний за адресою: britanialab.com
4. Лабораторії Франсіско Сорії Мельгуїзо 2009. Берд Паркер Агар. Доступно за адресою: http://f-soria.es/Inform
5. Britannia Laboratories. Телуріт калію. 2015. Доступний за адресою: britanialab.com
6. Alarcón-Lavín M, Oyarzo C, Escudero C, Cerda-Leal F, Valenzuela F. Перевезення ентеротоксигенного золотистого стафілокока типу A, в мазках з носоглотки в харчових продуктах. Rev Med Чилі 2017; 145: 1559-1564
7. Венесуельський стандартний Ковенін 1292-89. (1989). Продукти харчування. Виділення та перерахування золотистого стафілокока. Доступний за адресою: sencamer.gob.ve