BHI АГАР: ОСНОВА, ПІДГОТОВКА ТА ВИКОРИСТАННЯ - БІОЛОГІЯ - 2025

Агар BHI або Brain Heart Infusion агару середовища є живильним твердої культурою. Іспанською ми називаємо це агаром інфузії мозку серця. Це неселективне культуральне середовище, що означає, що можуть розвиватися всі типи грампозитивних та грамнегативних бактерій, а також деякі дріжджові та нитчасті гриби.

Він складається з інфузії яловичого мозку та серця, пептичного гідролізату з тканин тварин, панкреатичного гідролізату казеїну, хлориду натрію, глюкози, динатрію фосфату та агару.

Тарілки BHI. Джерело: Фото зроблено автором MSc. Маріельса Гіл.

Слід зазначити, що агар BHI є одним з найбільш часто використовуваних культуральних середовищ у лабораторіях бактеріології. Його можна використовувати без добавок як первинну культуру, субкультуру колоній, отриману на інших селективних середовищах, або для підтримання штамів в лабораторії.

З іншого боку, це ідеальне середовище, яке слід використовувати в якості основи при приготуванні збагачених середовищ, таких як кров’яний агар і шоколадний агар. Обидва ідеально підходять для виділення складних мікроорганізмів з поживної точки зору. Однак слід зазначити, що оскільки він містить глюкозу, він не підходить для спостереження за схемами гемолізу.

Аналогічно, агар BHI можна використовувати для приготування спеціальних середовищ для виділення важкорослих патогенних мікроорганізмів у загальних середовищах, серед яких: Haemophilus sp, Francisella tularensis, Corynebacterium diphtheriae та Histoplasma capsulatum.

За допомогою добавки до антибіотиків агар BHI стає селективним середовищем для виділення грибів.

Основа

Це поживне культуральне середовище для виділення помірно вимогливих мікроорганізмів, і його збагачення може бути збільшено за рахунок додавання крові та інших харчових добавок.

Це неселективне культуральне середовище, тому дозволяє вирощувати більшість грампозитивних та грамнегативних бактерій, а також деяких грибів. Однак це може бути вибірково з додаванням антибіотиків.

Засіб містить інфузію телячого мозку та серця, пептичний гідролізат тканин тварин та панкреатичний гідролізат казеїну; Всі ці сполуки виступають джерелами вітамінів, амінокислот, азоту та вуглецю.

Глюкоза - це вуглевод, який забезпечує енергію мікроорганізмам, як тільки вони ферментують її. Тим часом хлорид натрію та динатрію фосфат підтримують осмотичний баланс і забезпечують рН, близький до нейтралітету. Нарешті, агар дає середню тверду консистенцію.

Підготовка

Зважте 52 грами зневодненого середовища і розчиніть в одному літрі дистильованої води. Доведіть суміш до джерела тепла до кипіння, часто перемішуючи в процесі розчинення.

Плити або клини BHI-агару можна приготувати без добавок.

Клини

Для приготування клинів подайте препарат до тих пір, поки половина кожної пробірки не заповниться, накрийте кришкою і стерилізуйте в автоклаві при 121 ° С протягом 15 хвилин, при виході лягайте на основу, поки вони не затвердіють. Пізніше зберігайте в холодильнику до використання.

BHI клини для бактеріотеки. Джерело: Фото зроблено автором MSc. Маріельса Гіл.

Тарілки

Розчинену суміш автоклавують при 121 ° С протягом 15 хвилин, після її залишення дають охолонути до 50 ° С і 20 мл середовища подають у стерильний посуд Петрі. Їм дозволяють затвердіти, перевертають і зберігають у холодильнику до використання. Дозвольте плитам підійти до кімнатної температури перед посівом.

РН середовища повинен залишатися на рівні 7,4 ± 0,2.

Сире середовище має бежевий колір, а підготовлене - світло-бурштинового кольору.

Приготування агару крові

Після стерилізації середовища охолоджують до температури приблизно від 45 до 50 ° С, потім додають кров (50 мл), обережно перемішують до гомогенізації і подають по 20 мл у кожну чашку Петрі. Якщо на тарілці утворюються бульбашки, більш легке полум'я повинно швидко пройти над бульбашками, щоб їх усунути.

Аналогічно, спеціальні носії можна приготувати, додаючи відповідні добавки, коли суміш досягає температури від 45 до 50 ° С.

Середовище залишається вишнево-червоним.

Програми

Вживати без добавок

Агар BHI без добавок корисний як первинна культура і для посіву чистих штамів низько- або середньовисоких мікроорганізмів для їх подальшої ідентифікації.

Оскільки це світло-забарвлене середовище, воно ідеально підходить для спостереження за пігментами і, оскільки воно не містить заважаючих речовин, на ньому можуть бути проведені деякі біохімічні випробування, такі як оксидаза та каталаза, або інші біохімічні випробування можуть бути встановлені з колоній агар.

Так само клини BHI-агара широко використовуються для утримання штамів протягом певного часу в лабораторії (бактеріотека).

Пластини або клини, засіяні поверхнею бактеріальними штамами, інкубують при 37 ° С протягом 24 - 48 годин. Тим часом у грибів температура та час інкубації залежатимуть від типу гриба, який шукають.

В якості базового агару для приготування інших середовищ

За допомогою цієї основи можна готувати збагачені та селективні носії.

Збагачений

Основна його функція - служити основою для підготовки агару крові до рутинного використання в лабораторіях мікробіології. Особливо, база BHI сприяє виділенню Streptococcus sp. Однак у нього є недолік того, що він не підходить для спостереження за схемами гемолізу, оскільки він містить глюкозу.

Його також використовують для приготування агара кролика кролика або коня для виділення Haemophilus sp. Для найкращих результатів можна додати збагачувальну добавку (IsoVitaleX).

Якщо зразки надходять з дихальних шляхів, до агару можна додати бацитрацин, щоб пригнічувати супутню флору та збільшувати ймовірність відновлення Haemophilus sp.

Альтернативно, для виділення Corynebacterium diphtheriae можна приготувати кров'яний агар (ягнячий або людський) з цистиновим телуритом. Так само корисно готувати агар кролика кролика з додаванням цистину та глюкози для виділення Francisella tularensis.

Висівання пластин з агаром крові здійснюється виснаженням, і їх інкубують при 35-37 ° С протягом 24-48 годин у мікроаерофільності (5-10% CO ₂ ).

Вибірковий

Цей засіб з додаванням антибіотиків може замінити агар Сабуро для виділення грибів.

Поєднання агара BHI з хлорамфеніколом - гентаміцином або пеніциліном, стрептоміцином та конем крові ідеально підходить для виділення капсулату Histoplasma.

Залежно від мікроорганізму, який потрібно виділити, рекомендується інкубація при 35-37 ° C або при кімнатній температурі при аеробіозі. Іноді інкубація необхідна в обох діапазонах температур, використовуючи для цього 2 пластини.

Деякі гриби, такі як Trichophyton mentagrophytes, необхідно інкубувати при кімнатній температурі протягом 7 днів.

QA

З кожної підготовленої партії рекомендується протягом 24 годин інкубувати 1 тарілку або клин при 37 ° C і перевірити, чи немає зростання; Це особливо важливо при приготуванні агару крові, оскільки це легко забруднене середовище.

З іншого боку, якість середовища можна оцінити, прищепивши відомі або сертифіковані стандартні штами та спостерігаючи за їх розробкою.

У цьому сенсі для оцінки агару BHI без добавок можуть бути використані штами Escherichia coli ATCC 25922, Staphylococcus aureus ATCC 25923 або Candida albicans ATCC 10231, які інкубуються при 37 ° С в аеробіозі протягом 24 - 48 годин. У всіх випадках очікується задовільне зростання.

Штуми Streptococcus pyogenes ATCC 19615, Streptococcus pneumoniae ATCC 6305 або Trichophyton mentagrophytes ATCC 9533 можуть бути посіяні для оцінки пластин агару крові.

Штам бактерій інкубують при 37 ° С в мікроаерофільності протягом 24 годин, тоді як гриб інкубують при кімнатній температурі у вологій камері до 7 днів. Задовільний ріст очікується у всіх випадках.

Список літератури

1. Britannia Laboratories. Мозковий серцевий настій агар. 2015. Доступно за адресою: britanialab.com.
2. BD Laboratories. Мозковий серцевий настій (BHI) Агар. 2013. Доступний за адресою: bd.com.
3. Laboratorios Difco Francisco Soria Melguizo, SA Інфузія мозку серця Агар. 2009 рік.
4. Неогенна лабораторія. Мозковий серцевий настій агар. Доступно за адресою: foodsafety.neogen.com
5. Джил М. Кров'яний агар: основа, застосування та підготовка. 2018. Доступний за адресою: lifeder.com.
6. Автори Вікіпедії Мозковий серцевий настій. Вікіпедія, Вільна енциклопедія. 19 вересня 2018 р., 03:58 UTC. Доступно за адресою: wikipedia.org. Доступ 2 березня 2019 року.
7. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Мікробіологічна діагностика Бейлі та Скотта. 12 ред. Редакція Panamericana SA Аргентина.