Агар Biggy є твердою середу селективної і диференціальної культури. Він був розроблений для виділення та допомоги у виявленні основних видів Candida. Його назва BIGGY походить від абревіатури англійською мовою дріжджі глікози Gismcose Gluscine.
Оригінальна формула була створена Нікерсоном, саме тому цей носій також відомий як агар Нікерсона. В даний час він складається з дріжджового екстракту, гліцину, декстрози, цитрату амонію, цитрату вісмуту, сульфіту натрію та агару.
Графічне зображення агару BIGGY Джерело: Flickr.com
BIGGY агар розроблений для диференціації виду Complex C. albicans, C. tropicalis, C. krusei та C. kefyr, але ростуть і інші види, такі як Candida glabrata, C. parapsilosis, C. guilliermondii, Trichosporun sp, Geotrichum candidum і Saccharomyces cerevisiae.
Він володіє хорошою чутливістю та специфічністю, однак, порівняно з іншими носіями з подібною функцією, він знаходиться на другому місці, перевершуючи CHROMagar. З цієї причини багато лабораторій віддають перевагу останній, хоча він коштує значно дорожче.
Повинно бути зрозуміло, що використання агару BIGGY, як і інших подібних засобів, допомагає швидко визначити припущення, але ніколи не підтверджує. Тому повинні бути доступні додаткові методи ідентифікації; наприклад, системи ідентифікації Vitek 32 та API 20.
Основа
Агар BiGGY вважається частково селективним середовищем для виділення дріжджів, особливо роду Candida, хоча можуть рости й інші пологи.
Це також диференційоване середовище, оскільки залежно від виду, що спостерігається, різні характеристики спостерігатимуться за зовнішнім виглядом, кольором, формою та розміром. Вважається хромогенним середовищем, завдяки розвитку в колоніях різних кольорів.
Колір дріжджових колоній обумовлений наявністю сульфіту вісмуту в агарі. Ніккерсон зрозумів, що дріжджі роду Candida здійснюють позаклітинне відновлення сульфіту вісмуту, перетворюючи його на сульфід вісмуту (нерозчинна чорна речовина). Це призводить до появи світло-коричневих до чорних колоній.
Цей агар містить дріжджовий екстракт і декстрозу, які забезпечують джерело основних поживних речовин та енергії для розвитку дріжджів. Гліцин - стимулятор росту дріжджів, при цьому він гальмує ріст певних бактерій.
У цьому ж сенсі цитрат амонію та вісмуту, а також сульфіт натрію діють як інгібітори росту бактерій. Агар - це агент, який надає середній твердій консистенції.
Підготовка
Зважте 45 г зневодненого культурального середовища та розчиніть у літрі дистильованої води. Суміш струсіть і нагрійте, киплячи протягом 1 хвилини до повного розчинення. Це культуральне середовище не є автоклавним.
Після охолодження приблизно до 45 ° C на водяній бані налийте 20 мл у стерильний посуд Петрі.
Колір зневодненого середовища жовтувато-сірий і підготовлений являє собою жовтувато-білий гель, в якому може спостерігатися легкий флокуляційний осад.
РН повинен бути 6,8 ± 0,2.
Підготовлену середу слід зберігати в холодильнику (4 ° С) і захищати від світла. Оскільки це засіб, який неможливо автоклавувати, його слід використовувати якомога швидше. Його застосування рекомендується використовувати до 3 днів після його приготування.
Використовуйте
Пластини інкубують при кімнатній температурі (25 ° С) протягом 24, 48 і 72 годин, а час інкубації можна продовжити до 5 днів.
Кожен вид Candida розвиває певні характеристики, які змушують їх відрізняти один від іншого. Виробники середовища описують наступні характеристики для кожного виду:
-Кандіда альбіканс комплекс: розвивається на цьому агарі як гладкі, круглі, коричневі або чорні колонії, з легкою міцеліальною межею. За винятком того, що темний колір не розсіюється до середини.
-Candida tropicalis: яскраві, невеликі темно-коричневі колонії з чорним центром і легкою міцеліальною облямівкою. Темний колір дифундує до середини, характерна для цього виду, після інкубації протягом 72 годин.
-Кандіда крусей розвиває великі плоскі колони, що мають шорсткий вигляд, з коричневою до чорнуватою облямівкою.
-Candida parakrusei: колонії середнього розміру, більшість часу грубі, плоскі. Колір може змінюватись від яскраво-темного червонувато-коричневого до світло-червонувато-коричневого. Кордон колоній має розгалужений міцелій жовтуватого кольору.
-Candida stellatoidea: розвивається середні, плоскі колонії, темно-коричневі, майже чорні. Міцелій розвитку дуже мізерний.
Дослідження, проведене Yücesoy та Marol у 2003 році, показало, що середовище CHROMagar має кращу чутливість та специфічність для диференціювання та ідентифікації різних видів Candida, ніж агар BIGGY.
QA
Для контролю стерильності неінокульовані пластини інкубують при 25 ° С, у темний час доби від 24 до 48 годин, очікується, що не спостерігається жодного зростання чи зміни кольору.
Штами ATCC, рекомендовані для контролю якості середовища, є:
Candida albicans ATCC 60193 комплекс, Candida glabrata ATCC 2001, Candida krusei ATCC 34135. У всіх них очікується зростання, як описано вище.
Також можуть використовуватися такі штами:
Escherichia coli ATCC 25922, Pseudomonas aeruginosa ATCC 27853 та Staphylococcus epidermidis ATCC 12228. У перших двох очікується повне гальмування, але у випадку часткового розростання колонії будуть кремового кольору.
У випадку з S. aureus очікується, що він повністю пригнічується, але якщо він частково росте, його колонії білі.
Обмеження
Деякі бактерії здатні рости в цьому середовищі і навіть можуть потемніти, імітуючи колонію Candida, але, розмазуючи колонію та спостерігаючи її під мікроскопом, вона легко відкидається.
Таблиця: Характеристика колоній деяких дріжджів на агарі BIGGY відповідно до робіт Yücesoy M та Marol S.
Джерело: Yücesoy M, Marol S. Продуктивність CHROMAGAR candida і BIGGY агар для ідентифікації видів дріжджів. Ann Clin Microbiol Antimicrob. 2003 р .; 2 (8): 1-7
Список літератури
- Yücesoy M, Marol S. Продуктивність CHROMAGAR candida і BIGGY агар для ідентифікації видів дріжджів. Ann Clin Microbiol Antimicrob. 2003 р .; 2 (8): 1-7.
- MCD LAB. Технічний лист BIGGY Agar. Доступно за адресою: mcdlab.net/
- Лабораторія Неоген. ВЕЛИКИЙ Агар. Доступно за адресою: foodsafety.neogen.com
- Conda Pronadisa Laboratories. ВЕЛИКИЙ агар. Доступний за адресою: condalab.com
- BD Laboratories. BD BiGGY Agar (Дріжджовий агар вісмуту, глюкози, глікози). 2011. Доступний за адресою: bd.com