Цетримід агар або цетримід є селективної твердої культуральної середовищем призначена для виділення синьогнійної палички. Він заснований на демонстрації виробництва характерних пігментів цього виду і був виготовлений з модифікації Tech agar, створеної Кінгом, Уордом та Рені.
Оригінальна формула містила солі хлориду магнію, сульфат калію, засвоєння желатином підшлункової залози та агар-агар. Модифікація формули полягала в додаванні цетриміду (цетил триметил амонію броміду) та гліцерину.
Цетримідний агар, посіяний Pseudomonas aeruginosa Джерело: BiotechMichael, від Wikimedia Commons
Цетримідний агар корисний для мікробіологічного дослідження зразків, де підозрюється наявність Pseudomonas aeruginosa. Слід зазначити, що ця бактерія є надзвичайно важливою, оскільки, хоча вона є частиною нормальної екологічної мікробіоти, вона часто поводиться як умовно-патогенний збудник.
З цієї причини однією з найпоширеніших проблем, спричинених цим зародком, є нозокоміальні інфекції, тобто ті, що трапляються всередині лікарняного середовища, нападаючи на пацієнтів, які мають депресивну імунну систему.
З іншого боку, через спорідненість, яку цей мікроорганізм має до вологості, найбільш уразливими об'єктами забруднення є: допоміжне дихальне обладнання, ліки, небулайзери, джерела води, кондиціонери, дезінфікуючі засоби, мильні розчини, ін’єкційні розчини, відкриті рани , катетери, сечові трубки, серед інших.
У цьому сенсі цетримідний агар корисний для здійснення мікробіологічного контролю та посівів раніше згаданих елементів.
Основа
Цетримідний агар заснований на здатності середовища сприяти росту P. aeruginosa, стимулювати вироблення його пігментів і, в свою чергу, гальмувати ріст інших мікроорганізмів.
Ці властивості обумовлені функцією кожного з його компонентів. Присутній желатиновий пептон служить джерелом азоту, вітамінів і мінералів. Гліцерин або гліцерин працює як джерело вуглецю.
Зі свого боку, цетримід (цетилтриметилмонієвий бромід) - це речовина, яка гальмує ріст бактерій, крім P. aeruginosa, включаючи інші види, що належать до цього ж роду.
Інгібування виникає через те, що цетрамід діє як катіонний миючий засіб, керуючи дестабілізацією плазматичної мембрани більшості бактерій, крім P. aeruginosa та деяких інших, яким вдається вижити.
З іншого боку, він містить хлорид магнію та сульфат калію. Ці сполуки стимулюють фенотипічну експресію, пов’язану з здатністю Pseudomonas aeruginosa виробляти різні пігменти, включаючи: піоціанін, піовердин, піорубін, піомеланін та флуоресцеїн. Нарешті, він містить агар-агар, який надає йому міцну консистенцію.
Інтерпретація
Інтерпретацію росту, отриманого в цьому агарі, проводять так:
Спостереження за круглими, гладкими колоніями з регулярними краями, з утворенням синьо-зеленуватого, зеленого, коричневого або червонуватого пігментів, плюс викид фруктового запаху (аміноацетофенон), є припущенним результатом присутності цієї бактерії у зазначеному зразку.
З іншого боку, спостереження яскраво-зеленувато-жовтого пігменту на колоніях свідчить про P. aeruginosa, коли пластина піддається впливу ультрафіолету.
Флуоресценція колоній P. aeruginosa на агарі цетриміду під ультрафіолетом.
Слід зазначити, що кожен спостерігається колір обумовлений виробленням певного пігменту. Синьо-зелений пігмент відповідає виробленню піоціаніну, зелений до піовердину, червонуватий до піорубіну, коричневий до піомеланіну, а яскраво-жовто-зелена флуоресценція при УФ-світлі до флуоресцеїну.
Підготовка
Зважте 43 г зневодненого середовища та розчиніть у дистильованій воді. Додайте 10 мл гліцерину. Віднесіть суміш до джерела тепла. Дайте йому кипіти кілька хвилин до повного розчинення.
Автоклавуйте при 121 ° С протягом 15 хвилин. Дайте постояти і подайте в стерильний посуд Петрі, коли температура становить близько 50 ° C.
Дайте твердіти, перевернути, замовити в бляшках і зберігати в холодильнику до використання. Тарілки з атрином цетримідом слід заздалегідь вийняти з холодильника до висіву насіння і залишити кімнатну температуру.
Кінцевий pH середовища повинен бути 7,2 ± 0,2.
Колір зневодненого середовища - бежевий, а препарат непрозорий - білий.
Програми
Всі види зразків, у яких підозрюється наявність синьогнійної палички, можна висівати на цетримідний агар. Тому він корисний у всіх областях мікробіології (екологічній, промисловій, клінічній, воді та харчовій).
Важливо проаналізувати лікарняне середовище і, таким чином, мати можливість застосовувати коригувальні заходи, оскільки цей мікроорганізм потрапляє до пацієнтів через забруднене обладнання, ліки, розчини та витратні матеріали, які використовуються пацієнтом.
Таким чином мікроорганізм може заразити нижні дихальні шляхи, сечовивідні шляхи та рани хворих з імунодепресією.
Підрахунок колоній P. aeruginosa також можна проводити в рамках граничних тестів на мікроби.
Посіяно
Цетримідний агар можна використовувати в якості первинної культури. Пластину прищеплюють по одному з її країв і звідти розподіляються шляхом виснаження на решту пластини. Рідкі зразки можна насіти на поверхню за допомогою шпателя дригальські.
Пластинки інкубують аеробним шляхом при 37 ° С протягом 24 годин інкубації.
Обмеження
-Малий відсоток штамів Pseudomonas aeruginosas не виробляє піоціанін, тому хибний негатив можна інтерпретувати.
- Деякі види клітини Pseudomonas, що мають клінічне значення, гальмуються в цьому середовищі.
-Не дивлячись на характеристики, описані для Pseudomonas aeruginosa, вони повинні бути підтверджені додатковими ідентифікаційними тестами. Тест, який не слід пропускати, - це тест на оксидазу, він повинен дати позитивний результат.
- Деякі Enterobacteriaceae можуть рости в цьому середовищі і утворювати жовтий пігмент, але він відрізняється від Pseudomonas aeruginosa тим, що, коли пластинка піддається ультрафіолетовому світлу, флуоресценції немає.
- Serratia marcescens вдається розробити і виробляти рожевий пігмент.
-Якщо пластинки, посіяні цетримідним агаром, піддаються впливу кімнатної температури протягом певного часу, штам P. aeruginosa може втратити флуоресценцію, що спостерігається при ультрафіолетовому світлі, однак властивість відновлюється, якщо їх знову інкубувати при 37 ° C.
QA
Для аналізу хороших показників цетримідного агару можна використовувати контрольні штами, такі як: Pseudomonas aeruginosa ATCC 9027, Stenotrophomonas maltophilia ATCC 13637, Escherichia coli ATCC 25922 та Staphylococcus aureus ATCC 25923.
Очікувані результати:
- Гарний ріст для P. aeruginosa, із синьо-зеленим пігментом та позитивним флуоресцеїном.
- S. maltophilia та S. aureus будуть частково повністю пригнічені.
- Очікується, що кишкова паличка буде повністю пригнічена.
Список літератури
- Callicó A, Cedré B, Sifontes S, Torres V, Pino Y, Callís A, Esnard S. Фенотипічна та серологічна характеристика клінічних ізолятів Pseudomonas aeruginosa. VacciMonitor. 2004 р .; 13 (3): 1–9.
- Conda Pronadisa Laboratories. Основа атрибу цетриміду. 2014. Доступний за адресою: condalab.com
- Britannia Laboratories. Цетримідний агар. 2015. Доступний за адресою: britanialab.com
- BD Laboratories. BD Pseudosel agar (Цетримідний агар). 2013. Доступний за адресою: bd.com
- Лабораторія Франциско Сорія Мельгуїзо, агар цетриміду Каліфорнії. 2009. Доступний за адресою: http://f-soria.es