ШОКОЛАДНИЙ АГАР: ОСНОВА, ВЖИВАННЯ ТА ПРИГОТУВАННЯ - БІОЛОГІЯ - 2025

Шоколадний агар є твердою культуральної середовищем, збагаченим, що не - селективний і не - диференціал. Його використовують переважно для виділення мікроорганізмів, що вимагають з поживної точки зору, хоча в ньому можуть рости будь-які види бактерій.

З цієї причини його корисність особливо збільшується при посіві зразків, які зазвичай є стерильними, такими як ЦНС та рідина в суглобах. Хоча він також входить до складу обраного засобу для посіву зразків полімікробних препаратів, але в цих випадках необхідно додавати антибіотики, що інгібують супутню флору.

Шоколадний агар з ростом бактерій

Цей засіб має характерний коричневий колір, дуже схожий на шоколадний, звідси і його назва. Препарат дуже схожий на препарат з агаром крові, тільки в цьому випадку кров повинна бути нагріта, щоб еритроцити руйнувалися.

Його приготування, як і кров’яний агар, дуже делікатне, оскільки легко забруднюється. З цієї причини багато лабораторій вважають за краще придбати цей засіб, вже підготовлений комерційними компаніями, що гарантує його якість.

Основа

Це середовище складається з багатого на поживні речовини агарової основи та нагрітої крові. Гемоліз еритроцитів забезпечує фактор X (гемін) і фактор V (NAD), необхідний для росту деяких мікроорганізмів, наприклад, роду Haemophilus. Він також дуже корисний для ізоляції Neisserias sp.

Як і кров'яний агар, в якості базового агару можуть використовуватися різні середовища, залежно від потреби. Серед використовуваних середовищ є інфузія мозку серця та соєвий агар триптикази, хоча найбільш рекомендованими є агар Columbia, Müeller Hinton, GC-агар та Thayer Martin агар.

Деякі варіанти шоколадного агару включають комерційно доступну збагачену добавку під назвою Isovitalex або Polivitex.

Ці добавки містять вітамін В ₁₂ , L-глютамін, аденін, гідахлорид гуаніну, р-амінобензойну кислоту, нікотинамід-аденінунунуклеотид (НАД), тіамінпірофосфат, нітрат заліза, тіамін гідрохлорид, цистеїну гідрохлорид, L-цистин та глюкозу.

Важливо зауважити, що шоколадний агар більше збагачений, ніж агар крові, але він не дозволяє спостерігати схеми гемолізу.

Програми

Джерело: pixnio.com. Автор:
Піт Сейдель, Аманда Мур, Массачусетс, Тод Паркер, кандидат наук, Одра Марш, USCDCP

Шоколадний агар, приготований з агаром Columbia

Цей засіб містить панкреатичний дайджест казеїну та серця, пептичний дайджест м’яса, хлорид натрію, агар, екстракт дріжджів та кукурудзяний крохмаль. Він також багатий вітамінами, мінералами та незамінними амінокислотами.

Ця нагріта основа крові ідеально підходить для виділення бактерій роду Neisseria. З іншого боку, якщо в середовище додатково додавати добавку для бруцел, згаданий мікроорганізм може бути виділений. Результати покращуються за допомогою крові коня.

Шоколадний агар, приготований з базовим агаром GC (для гонококів)

Це середовище містить пептони, кукурудзяний крохмаль, одноосновні та двоосновні буфери, хлорид натрію та агар.

Більшість комерційно готових презентацій шоколадного агару мають цю основу і не містять нагрітої крові, а синтетичну суміш геміну та хімічну добавку факторів росту, вітамінів, мінералів, амінокислот, фактора V та глюкози.

Шоколадний агар, приготований з агаром Мюллера Хінтона

Застосовується для перевірки антимікробної чутливості в'язких мікроорганізмів, таких як Streptococcus pneumoniae, використовуючи 5% нагріту кров овець.

Він також використовується для первинної ізоляції Нейссерій та Гемофілу, але в конкретному випадку виділення гемофілу переважним є використання конячої крові, оскільки це багате джерело фактора X і V.

З іншого боку, якщо проба, яку потрібно посіяти, походить з нестерильної ділянки, рекомендується додавати антибіотики для пригнічення нормальної флори місцевості.

Приклад для респіраторних проб, де підозрюється наявність бактерій роду Haemophilus, бацитрацин використовується для пригнічення росту стафілокока, мікрокока, стрептокока та сапрофітних Neisserias.

У випадку зразків генітального шанкру, де підозра на гемофілус дукреїй, успішно застосовується шоколадний агар, приготовлений так: Мюллер - агар Хінтона з 5% конізованою кінською кров’ю, 1% збагаченням Isovitalex та 3 мкг / мл ванкоміцину.

Шоколадний агар, приготований з агаром Thayer Martin

Це середовище особливе для виділення Neisseria gonorrhoeae. Він повинен містити антибіотики для пригнічення супутньої флори. Використовується кров ягняти.

Підготовка

Ви повинні побачити показання до приготування базового агару, який слід використовувати. Вони знаходяться на звороті контейнера зневодненого середовища. Вони зазвичай описують, скільки потрібно важити, щоб приготувати літр культурального середовища.

Точну необхідну кількість можна підготувати в лабораторії, вона може бути більше або менше літра.

Розрахунки

Правило трьох використовується для обчислення кількості зважування, щоб підготувати бажаний об'єм. Приклад:

Якщо на 1 літр потрібно зважити 40 гр, а лабораторія потребує 800 мл, сказано:

1000 мл ----------- 40 гр

800 мл -----------– X

Формула буде такою:

X = 32 гр (кількість, яку слід зважити на 800 мл).

Зважте і розведіть

Необхідну кількість зважують і поміщають у колбу з водою.

Нагрівайте на помірному вогні і обережно перемішуйте обертовими рухами до повного розчинення зневодненого середовища, даючи йому кипіти протягом 1 хвилини.

Стерилізувати

Колбу поміщають в автоклав для стерилізації середовища при 121 ° С протягом 20 хвилин.

Збір крові

Виходячи з автоклава, його витримують, поки температура середовища приблизно не буде від 56 до 70 ° C, щоб помістити кров і перемішати, поки середовище не стане коричневим.

Якщо ви додаєте добавки, настав час це зробити. Згодом перемішайте і подайте по 20 мл в кожну стерильну чашку Петрі.

Усю процедуру слід проводити в ламінарному витяжці або навколо пальника Bunsen.

Дайте настоятися, поки вони не затвердіють, і зберігайте перевернуті в холодильнику.

Ще один спосіб приготування шоколадного агару без використання крові

Базове середовище готують, як описано вище, отриманий на комерції зневоднений гемоглобін розчиняють і стерилізують в автоклаві.

Обидва розчини дають охолонути до 50 ° C, з'єднують і додають добавку. Змішайте в асептичних умовах, а потім подайте в стерильний чашки Петрі.

QA

Важливо, щоб кров була розміщена при зазначеній температурі, оскільки вона є ідеальною для лізингу еритроцитів і в той же час підтримує фактор V, який чутливий до температури.

На поверхні агару не повинно залишатися бульбашок. З кожної партії по 100 тарілок одну чи дві тарілки необхідно інкубувати в духовці при температурі 37 ° C протягом 24 годин, щоб перевірити їх стерильність.

Для найкращих результатів шоколадний агар слід використовувати незабаром після приготування.

Контрольні бактеріальні штами слід зберігати в лабораторії для оцінки ефективності свіжого середовища для росту основних невсипучих мікроорганізмів, що мають клінічне значення.

Список літератури

1. García P, Paredes F, Fernández del Barrio M. (1994). Практична клінічна мікробіологія. Кадізький університет, 2-е видання. Служба публікацій UCA.
2. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Мікробіологічна діагностика Бейлі та Скотта. 12 ред. Аргентина. Редакція Panamericana SA
3. Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Мікробіологічна діагностика. (5-е видання). Аргентина, редакція Panamericana SA
4. Llanes R, Reyes A, Rodríguez C, Guzmán D, Llop A. Доцільність використання середовища для базової культури GC-Biocen Agar в лабораторії мікробіології. Rev Cubana Med Trop, 2004; 56 (3): 237-238. Доступно за адресою: scielo.sld.
5. Автори Вікіпедії Шоколадний агар. Вікіпедія, Вільна енциклопедія. 17 грудня 2018 р., 19:54 UTC. Доступно за адресою: en.wikipedia.org.