АГАР ЧАПЕК: ОБГРУНТУВАННЯ, ПІДГОТОВКА, ВИКОРИСТАННЯ ТА ОБМЕЖЕННЯ - БІОЛОГІЯ - 2025

Чапека (ЦС) є селективної твердої середовищем , спеціально призначеної для вирощування сапрофітних бактерій і грибів. Його створили ботанік Фрідріх Йоганн Франц Чапек польського походження та американський хімік Артур Вейланд Докс; з цієї причини цей агар також відомий як середовище Чапека-Докса.

Вихідне середовище було рідким, але пізніше додавали агар, щоб зробити його твердим середовищем. Середовище Чапека складається з нітрату натрію, фосфату двокалію, магнію сульфату, хлориду калію, сульфату заліза, сахарози, агару та дистильованої води.

Чапек-агар A. Aspergillus parasiticus B. Aspergillus fumigatus Джерело: A. Medmyco / B. Фото: доктор Девід Мідглі. Wikipedia.com

РН агару Чапека - 7,3, але є варіант, до якого додають 10% молочної кислоти, pH якої залишається на рівні 3,5. Це кислотне середовище використовується для вирощування ацидофільних мікроорганізмів.

З іншого боку, деякі комерційні будинки модифікували склад агару Чапека, змінюючи сульфат магнію та фосфат двокалію на гліцерофосфат; ця модифікація перешкоджає утворенню осаду фосфату магнію, який спостерігається за звичайною формулою. Так само є ще один варіант, до якого додають дріжджовий екстракт.

Нарешті, агар Чапека рекомендується Американською асоціацією громадського здоров’я APHA для вивчення Actinomycetes sp, Aspergillus sp, Paecilomyces sp та Penicillium sp. Для цих видів характерні екологічні мікроорганізми та умовно-патогенні збудники.

Основа

Це середовище містить сахарозу; Цей вуглевод служить джерелом вуглецю, тоді як нітрат натрію є джерелом азоту, але, на відміну від інших середовищ, наданий азот є неорганічним.

З цієї причини середовище Чапека вважається вибірковою, оскільки можуть виростати лише мікроорганізми, здатні використовувати неорганічні сполуки як єдине джерело азоту.

В якості регулюючої речовини осмолярності середовища виступає фосфат двокалій. Зі свого боку, сульфат магнію, хлорид калію та сульфат заліза мають суттєві мінерали для росту сапрофітних (вільноживучих) мікроорганізмів. Ця формула утворює осад фосфату магнію.

Нарешті, агар-агар - це сполука, яка забезпечує тверду консистенцію середовища, а вода є розчинником для всіх компонентів.

З модифікованою формулою агару Чапека не утворюється осад, і це покращує показники росту деяких грибів.

Надмірна кислотність кислоти Чапека-агару робить його більш селективним середовищем, що дозволяє лише рости ацидофільних мікроорганізмів, здатних використовувати неорганічний азот. Тим часом дріжджовий агар Чапек покращує продуктивність певних грибів.

Підготовка

Середній Чапек-Докс

Зважте 49 г зневодненого культурального середовища та розчиніть у дистильованій воді. Подайте тепло до кипіння. Часто збивайте суміш до повного розчинення.

-Чапек Агар Клин

Розподіліть розчинену суміш по пробірках і автоклавуйте при 121 ° С протягом 15 хвилин. Виймаючи з автоклава, гомогенізуйте перед закладанням пробірки і дайте твердіти.

-Чапекові агарові пластини

Автоклавуйте розчинену суміш при 121 ° С протягом 15 хвилин і залиште охолонути до 50 ° С, гомогенізуйте і вилийте 20 мл у стерильний посуд Петрі. Дайте твердіти, переверніть і зберігайте в холодильнику до використання.

РН повинен залишатися на рівні 7,3 ± 0,2. Колір зневодненого середовища білий, а підготовлене середовище - світло-бурштинове, злегка каламутне через наявність флокуляційного осаду.

Середовище Чапека при кислому рН

Готуйте так, як уже було описано, але додаючи 10 мл стерильної 10% молочної кислоти на кожен літр підготовленого середовища. Модифікована середовище Чапека повинна бути при pH 3,5 ± 0,2.

Модифікований середній Чапек

Зважте 45,4 г зневодненого середовища і розчиніть в 1 літрі води. Решта препарату така ж, як описана вище. Колір зневодненого середовища білий, а підготовлене середовище - білуватий. Кінцевий pH середовища - 6,8 ± 0,2.

Чапек-дріжджове середовище

Також називають дріжджовим екстрактом Чапека (CYA). Він містить елементи класичного агару Чапека плюс екстракт дріжджів.

Використовуйте

Середовище Чапека використовується для пошуку сапрофітних мікроорганізмів у зразках ґрунту, овочів, зерна, повітря, комах, серед інших.

Агар Чапека при кислому рН використовується для росту ацидофільних мікроорганізмів, тоді як модифікований агар Чапека особливо корисний для утворення хламідоспор у видів комплексу Candida albicans.

Нарешті, дріжджовий агар Чапека дуже корисний для виділення Aspergillus і Penicillium.

Посіяно

-Чапек агар

Для пошуку актиноміцетів у ґрунті дійте так: зразок обробляють фенолізованою водою протягом 30 хв, а потім 1 мл суспензії висівають на агар Чапека. Інкубують при 28 ° С протягом 5 - 7 днів.

Для зразків овочів, зерна та комах їх поміщають безпосередньо на агар. Також можна зробити розведення і насіння 0,1 мл на поверхню агару.

-Модифікований агар Чапека

Для посіву використовується пряма петля або голка, її просочують тампоном і агару прищеплюють, роблячи прокол, поки він не торкнеться основи пластини. Інкубуйте протягом 24 годин при 28 ° C і досліджуйте під мікроскопом над та під пластиною, щоб побачити, чи утворилися хламідоспори.

Температура та час інкубації

Температура та час інкубації змінюються залежно від типу мікроорганізму, який потрібно виділити. Пластини зазвичай інкубують протягом одного-двох тижнів у температурному діапазоні від 20 до 25 ° С.

Однак для деяких штамів існують специфічні умови. Наприклад, більшість видів роду Aspergillus оптимально ростуть при 30 ° C; проте A. fumigatus росте при 50 ° C.

Щодо часу інкубації один або два тижні є нормальним, однак Candida albicans може розвиватися за 24 до 48 годин при температурі 25 ° C.

Характеристика деяких колоній на цьому носії

-Penicillium atrovenetum

Він розвивається за 12 днів інкубації при 27 ° C. Їх колонії невеликі (25 мм).

Колонії мають оксамитовий вигляд, з чітко вираженою білою облямівкою та синьо-зеленим відтінком у центрі, який старіє сірим у віці. Зворотна сторона колонії помаранчева, завдяки чому середина має однаковий колір завдяки виробництву пігменту.

-Aspergillus niger

Розвивається з білим до жовтим міцелієм і чорними спорами.

-Candida albicans

Розвиваються кремово-світло-бежеві колонії. У модифікованому агарі Чапека він утворює хламідоспори.

-Aspergillus parasiticus

Темно-зелений міцелій розвивається за 7 днів при 25 ° С.

QA

Для оцінки якості культурального середовища можуть бути посаджені сертифіковані контрольні штами, такі як: Aspergillus niger MKTA 16404, Candida albicans MKTA 10231.

Aspergillus niger розвивається від білого до жовтого міцелію та чорних спор приблизно за 5 днів, тоді як Candida albicans матиме задовільний ріст за 24 години інкубації при 25 ° C; колонії кремового кольору.

Обмеження

Деякі дослідження показали, що для відновлення актиноміцетів, агар з найкращим урожаєм - це картопляний декстрозний агар, агар Чапек - на другому місці, але для відновлення аспергілл та пеніцилій агар Чапек - це той, який забезпечує найвищу швидкість одужання.

Список літератури

1. Давіла М та ін. Антагоністичні актиноміцети проти фітопатогенних грибів сільськогосподарського значення. Преподобний Мекс. Наука. Agríc 2013, 4 (8): 1187-1196. Доступно за адресою: scielo.org.
2. Luna M, Lozada Y, Пшениці Á. Виділення штамів Aspergillus niger, що виробляють охратоксин А, у зберігається зеленій каві (Coffea arabica). Преподобний Мекс. Мікрофон. 2010 р .; 32: 63-68. Доступно на сайті.scielo.org.
3. Автори Вікіпедії Чапек середній. Вікіпедія, Вільна енциклопедія. 13 січня 2019 р., 20:30 UTC. Доступно за адресою: en.wikipedia.org
4. Conda Pronadisa Laboratories. Модифікований агар Чапек-Докса. Доступний за адресою: condalab.com
5. Microkit Media Media. Чапек-Докс-агар. Diosponible в: Medioscultivo.com