EMB - агар є селективним і диференційне середовище , використовувана для культивування твердої ізоляції грамнегативних бацил, особливо ентеробактерій та інших грамнегативних бактерій невимогливих. Він також відомий за абревіатурою EAM, яка розшифровується як еозин-метиленовий синій.
Це середовище було створено Холт-Харрісом та Тігом у 1916 році. Він містить пептон, лактозу, сахарозу, фосфат двоталій калію, агар, еозин, метиленовий синій та воду. Він дуже схожий на MacConkey Agar, особливо при використанні модифікованого EMAR-агару Levine, який не містить сахарози.
Металевий блиск кишкової палички на агарі EMB Джерело: Кармен Морено Гонсалес, з Вікімедіа
Насправді кожна лабораторія вирішує, чи працювати з тим чи іншим, оскільки вони виконують одну і ту ж функцію, хоча біохімічно вони різні.
Він навіть має той самий недолік, що і класичний агар MacConkey в плані виробництва, що виробляється родом Proteus. Тому, щоб уникнути цього явища, концентрацію агару можна збільшити до 5%.
Основа
Вибірковий
EMB-агар є тонко селективним, оскільки містить анілінові барвники (еозин та метиленовий синій), які діють як інгібітори, запобігаючи росту більшості грампозитивних бактерій та деяких химерних грамнегативних паличок.
Однак у цього агару є недолік, що деякі грампозитивні бактерії можуть протистояти наявності інгібіторних речовин і виростати як невеликі безбарвні колонії пунктату, такі як Enterococcus faecalis і деякі стафілококи.
Деякі дріжджі також можуть рости, наприклад, комплекс Candida albicans, який дасть дуже маленькі рожеві колонії. Хламідоспори можуть навіть розвиватися з цих дріжджів, якщо проба засівається глибоко.
Диференціальний
З іншого боку, агар EMB також є диференційованим середовищем, оскільки ці барвники разом (еозин та метиленовий синій) мають властивість утворювати осад при кислому рН, тому вони служать індикаторами його виробництва.
Таким чином, слабо лактозні або сахарозні ферментирующие бактерії утворюють фіолетові колонії протягом 24 - 48 годин. Наприклад, пологи Klebsiella, Enterobacter і Serratia.
Ті бактерії, які сильно ферментують лактозу, такі як кишкова паличка або сахароза, такі як Yersinia enterocolitica або Proteus penneri, утворюють зеленувато-чорний осад, надаючи характерним металевим блиском вид у цих видів.
Слід зауважити, що якщо використовувати ЕМВ легке середовище (без сахарози), Yersinia enterocolitica та Proteus penneri утворюватимуть чіткі колонії.
Бактерії, які не ферментують лактозу або сахарозу, живляться наявністю пептонів, які забезпечують необхідні для росту бактерій амінокислоти та азот, і утворюють прозорі колонії. Наприклад, роди Salmonella та Shigella, серед інших.
Так само важливо відзначити, що рід Acinetobacter може представляти лавандово-сині колонії, хоча це не фермент лактози або сахарози, але має властивість фіксувати метиленовий синій на своїй клітинній стінці. Це може статися і з іншими окислювальними бактеріями.
Підготовка
Оригінальне зневоднене середовище світло-бежевого кольору.
Для приготування цього культурального середовища 36 грамів зневодненого середовища необхідно зважити і суспендувати в колбі, що містить один літр дистильованої води.
Давши суміші відпочити протягом 5 хвилин, віднесіть колбу до джерела тепла, енергійно і постійно перемішуючи, поки вона не закипить і не розчиниться повністю.
Згодом вже розчинену культуральну середовище необхідно стерилізувати, використовуючи автоклав при 121 ° С протягом 15 хвилин.
Після закінчення часу його виймають з автоклава і залишають ненадовго постояти. Потім, ще теплий (45-50 ° C), 15-20 мл агару подають у кожну стерильну чашку Петрі. Засіб має бути лакмусово-синім.
Після подачі тарілки залишають трохи незакритими, поки агар трохи не охолоне. Потім їх накривають і дають повністю затвердіти. Згодом їх розміщують у перевернуті тарілки для зберігання та зберігають у холодильнику (8 ° C) до використання.
Переважно цю процедуру проводять у кришці для ламінарного потоку або перед пальником Bunsen, щоб уникнути забруднення.
Важливо враховувати, що кожен комерційний будинок вказуватиме суму, яку необхідно зважити для підготовки культурального середовища.
Кінцевий pH середовища повинен бути 7,2 ± 0,2
Програми
Це середовище використовується для посіву сечі та фекалій чи будь-якого типу клінічного зразка, особливо якщо є підозра на наявність невмілих грамнегативних бацил, таких як бацили, що належать до сімейства Enterobacteriaceae, які дуже добре ростуть на цьому середовищі.
Ентеропатогенні бактерії родів Shigella та Salmonella відрізняються своїми безбарвними або злегка бурштиновими колоніями.
Зростають і інші нелактозні ферментирующие бацили, такі як Aeromonas, Pseudomonas, Acinetobacter.
Так само це середовище є дуже корисним при мікробіологічному аналізі їжі та води, оскільки ідеально підходить для повного підтверджуючого етапу визначення коліформ, тобто для підтвердження присутності кишкової палички з мутних відварів ЄС, від найбільш ймовірної техніки числення (MPN).
QA
Щоб переконатися, що свіжоприготована культуральна середовище працює добре, контрольні штами можна висаджувати, щоб спостерігати за характеристиками колоній та перевіряти, чи дають вони так, як очікувалося.
Для цього можуть використовуватися штами ATCC або добре ідентифіковані штами E. coli, Enterobacter aerogenes, Klebsiella sp, Salmonella typhimurium, Shigella flexneri, Pseudomonas aeruginosa та деякі грампозитивні бактерії, такі як S. aureus.
Очікується, що кишкова паличка породжує добре розвинені синьо-чорні колонії із зеленим металевим блиском. В той час, як Enterobacter aerogenes і Klebsiella sp мають добре розвинені синювато-чорні слизові колонії.
З іншого боку, Salmonella typhimurium та Shigella flexneri повинні розвиватися великими колоніями, безбарвними або з легким бурштиновим забарвленням.
Нарешті, рід Pseudomonas aeruginosa виростає у вигляді безбарвних колоній неправильної величини, тоді як грампозитивні бактерії повинні повністю гальмуватися або розростатися рідко з дуже маленькими колоніями.
Заключні думки
Іноді стерилізація призводить до зменшення метиленового синього кольору, проявляючи середній оранжевий колір. Для того, щоб метиленовий синій окислився і відновив фіолетовий колір, його потрібно обережно перемішувати, поки колір не відновиться.
Також після стерилізації барвник може осадитися, тому його слід добре перемішати перед подачею страв Петрі.
Список літератури
- Camacho A, Giles M, Ortegón A, Palao M, Serrano B та Velázquez O. 2009. Методи мікробіологічного аналізу харчових продуктів. 2-е вид. Хімічний факультет, УНАН. Мексика.
- Carranza C, León R, Falcón N, Neumann A, Kromm C. Характеристика та розповсюдження потенційно патогенних штамів Escherichia coli, виділених з курчат-бройлерів з птахівничих ферм у Перу. Преподобний слідчий. ветеринар. Перу 2012 23 (2): 209-219. Доступно за адресою: scielo.org.
- Laboratorios Conda SA Еозин та метиленовий синій агар. 2010. Доступний за адресою: condalab.com
- Britannia Laboratories. Levine EMB (з еозином та метиленовим синім) 2011. Доступний за адресою: britanialab.com
- BD Laboratories. BD EMB Агар (Eosin Methtile Blue Agar), модифікований. 2013. Доступний за адресою: bd.com
- Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Мікробіологічна діагностика. (5-е видання). Аргентина, редакція Panamericana SA
- Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. 2009. Мікробіологічна діагностика Бейлі та Скотта. 12 ред. Аргентина. Редакція Panamericana SA