Агар Ендо або Ендо середовище являє собою тверду середу, диференціал і з деяким ступенем селективності культури. Оригінальна формула була створена Ендо в 1904 р. Для диференціації лактозоферментації від неферментуючих бактерій. Спочатку він був розроблений для виділення сальмонели тифу, але згодом мета середовища перейшла до пошуку коліформ.
Принцип Ендо Агара залишився, але його формулювання протягом багатьох років зазнало незліченних змін. В даний час засіб складається з перетравлюваної тканини тваринного походження, лактози, двокислого гідрофосфату, сульфіту натрію, основного фуксину та агару.
A: Діва Ендо Агар B: Насіннєвий Ендо Агар, посередині агару можна помітити металевий блиск штаму кишкової палички. Джерело: A: Strolch1983 / B: LenkaM
Основне використання середовища було пов'язане з виділенням та диференціацією грамнегативних бацил, що належать до родини Enterobacteriaceae та інших близьких родин.
Довгий час його застосовували при виявленні коліформ у зразках води, молочних продуктів та продуктів харчування, але сьогодні використання цього середовища витіснили інші, що мають подібні функції. Однак деякі мікробіологічні лабораторії використовують цей агар для виділення Enterobacteriaceae із зразків клінічного походження.
Основа
Ендо-агар містить пептони, які служать джерелом амінокислот, азоту, вуглецю та енергії, необхідних для росту невимогливих мікроорганізмів.
З іншого боку, трохи селективний характер агару забезпечується додаванням сульфіту натрію та основного фуксину; обидва компоненти частково або повністю пригнічують ріст більшості грампозитивних бактерій.
Диференціальний характер надається наявністю ферментованого вуглеводу, який в даному випадку є лактозою та основним фуксином, який також служить показником рН.
Грамнегативні бактерії, які ростуть на цьому агарі і здатні бродити лактозу, утворюють сильні рожеві колонії; Будучи патогномонічним кишковою паличкою, утворюються темно-червоні колонії з райдужним зеленуватим металевим блиском. Це пов’язано з високим виробництвом кислот із вуглеводного бродіння.
Слід зазначити, що середовище навколо колоній також набуває сильний рожевий колір. Тоді як ферменти, що не ферментують лактозою, грамнегативні стрижні утворюють блідо-рожеві колонії, схожі на середні або безбарвні.
Двокислий фосфат гідрогену врівноважує рН середовища, а агар є компонентом, що забезпечує тверду консистенцію.
Підготовка
Ендо-агар
Зважте 41,5 г зневодненого середовища і розчиніть в 1 літрі дистильованої води. Нагрівайте суміш при частому перемішуванні до повного розчинення середовища. Стерилізуйте в автоклаві при 121 ° С, тиску 15 фунтів, протягом 15 хвилин.
Виймаючи з автоклава, дайте охолонути до температури приблизно 45-50 ° C, струсіть суміш до гомогенізації перед подачею. Налийте 20 мл у стерильний посуд Петрі.
Дайте тарілкам затвердіти, переверніть і зберігайте в бляху або загорніть темним папером перед зберіганням у холодильнику. Дуже важливо захистити підготовлену середу від прямого світла. Найкраща практика - підготувати точну суму, яка вам знадобиться.
Якщо зберігати в холодильнику, тарілки перед використанням потрібно дати прогрітися.
PH середовища повинен бути від 7,2 до 7,6, а колір підготовленого середовища - блідо-рожевий.
Варіант агару М-Ендо
Існує ще одна версія агару Ендо (m-Endo), яка відповідає формулам Маккарті, Делані та Грассо, яка містить більше сполук і змінюється за формою приготування.
Цей варіант містить: лактозу, триптозу, ферментативний дайджест казеїну, ферментативний переварювання тканин тваринного походження, хлорид натрію, двоосновний фосфат калію, сульфіт натрію, екстракт дріжджів, одноосновний фосфат калію, основний фуксин, дезоксихолат натрію, лаурилсульфат натрію та агару.
У цьому випадку 51 г зневодненого середовища зважують і суспендують в 1 літрі дистильованої води, що містить 20 мл етанолу.
Злегка нагрівайте, помішуючи, поки середовище повністю не розчиняється. Він не повинен перегріватися і не повинен автоклавуватися. Після того як суміш буде однорідною, подайте в стерильний чашки Петрі і дайте твердіти.
Використовуйте
У деяких країнах його все ще використовують для підрахунку загальних та фекальних коліформ у зразках їжі та води, особливо наявність кишкової палички як основного показника фекального забруднення.
Агар М-Ендо рекомендується Американською асоціацією громадського здоров’я (APHA) для моніторингу та контролю програм дезінфекції та очищення стічних вод, а також для оцінки якості питної води.
Найбільш широко застосовуваний метод - мембранна фільтрація після збагачення зразка відваром Лаурілсульфату протягом 2 - 4 годин.
Він також може бути використаний як замінник агару ЕМВ при мікробіологічному аналізі їжі та води найбільш ймовірною методикою числення (MPN), зокрема на повній фазі підтвердження для підтвердження присутності кишкової палички з мутних EC бульйонів.
QA
Для оцінки якості підготовленої партії Ендо-агару висівають відомі або сертифіковані контрольні штами.
Серед штамів, які можуть бути використані з цією метою, є: Escherichia coli ATCC 25922, Escherichia coli ATCC 11775, Enterobacter cloacae ATCC 13047, Klebsiella pneumoniae ATCC 13883, Salmonella typhimurium ATCC 14028, Shigella flexneri ATCC 12022, Proteus miracaliscus ATCC 12022, Proteus miracaliscus ATCC 12022, Proteus miracaliscus ATCC 12022, Proteus miracaliscus ATCC 12022, Proteus miracaliscus ATCC 12022, Proteus miracaliscus ATCC 11722 .
Штам висівають при виснаженні та інкубують при температурі 37 ° С протягом 24 годин при аеробіозі.
Очікувані результати:
- Для кишкової палички: сильні червоні колонії, з металевим блиском.
- Для E. cloacae та K. pneumoniae колонії мають бути рожевими мукоїдами.
- У випадку з S. typhimurium, S. flexneri та P. mirabilis колонії зазвичай блідо-рожеві або безбарвні.
- Нарешті, очікується, що E. faecalis частково гальмується, тому його ріст повинен бути поганим при дуже маленьких сильних рожевих колоніях.
Обмеження
-Ендосередовище має низьку селективну силу, отже, можливо, деякі грампозитивні мікроорганізми, такі як стафілокок, ентерокок і навіть дріжджі.
-Інші бацили, що не належать до сімейства Enterobacteriaceae, можуть розвиватися в цій середовищі, такі як Pseudomonas sp та Aeromonas sp. Характеристика цих штамів - безбарвні неправильні колонії.
-Це підготовлене середовище дуже чутливе до світла, тому тривале потрапляння на нього погіршує індикаторну систему, безповоротно пошкоджуючи середовище.
-Компоненти середовища вважаються канцерогенними, тому слід уникати прямого контакту.
-Засушене середовище дуже гігроскопічне і його слід зберігати в оригінальній ємності при кімнатній температурі, щільно закритій і в сухому середовищі.
Список літератури
- BD Laboratories. Ендо Агар 2013. Доступний за адресою: bd.com
- Неогенні лабораторії. М Ендо Агар. Доступно за адресою: foodsafety.neogen.com
- Ендо Агар Вікіпедія, Вільна енциклопедія. 7 вересня 2017, 08:27 UTC. 28 лютого 2019, 22:55. Доступно за адресою: en.wikipedia.
- MercK Laboratory. Ендо-агар. 2019. Доступний за адресою: merckmillipore.com
- Технічні листові лабораторії. М –закінчити Агар LES. 2015. Доступний за адресою: liofilchem.net