КУКУРУДЗЯНИЙ БОРОШНЯНИЙ АГАР: ФОН, ПІДГОТОВКА ТА ВИКОРИСТАННЯ - БІОЛОГІЯ - 2025

Агар кукурудзяної муки є тверда культуральная среда, низька поживна харчування, корисною для пересіву деяких грибів і для демонстрації хламідоспори в штамах Candida Albicans комплексу. Англійською вона відома як кукурудзяна їжа Agar.

Звичайне кукурудзяне середовище має дуже простий склад, воно містить кукурудзяну муку, агар-агар і воду. Завдяки своєму низькому поживному рівню він ідеально підходить для використання в утриманні грибкових штамів протягом помірного періоду часу, особливо чорних грибів.

A. Графічне зображення комплексу Candida albicans на агарі з кукурудзяного борошна. В. Хламідоспори комплексу Candida albicans, що спостерігаються під мікроскопом, утворені на кукурудзяному агарі. Джерело: A. GrahamColm / B. Автор: CDC / Dr. Вільям Каплан, люб’язно: Бібліотека зображень громадського здоров'я.

Спороношення комплексу Candida albicans є сприятливим у цьому середовищі, якщо під час приготування агару додають 1% Tween 80. Утворення хламідоспор характерне для цього виду і практично єдине, що вражає людину.

Є й інші види, які утворюють хламідоспори, але вони навряд чи вплинуть на людину, такі як Candida australis, присутній у пінгвінових послідах, або C. clausenii, який рідко зустрічається сапрофітом. Так само винятком їх можуть сформувати види C. stellatoidea та C. tropicalis.

З іншого боку, додавання глюкози до кукурудзяного борошна сприяє утворенню пігментів у штамах Trichophytom rubrum.

Важливо підкреслити, що є гриби, які не утворюють гіфи або псевдогіфи в кукурудзяному агарі, такі як Cryptococcus neoformans, що відрізняються від інших родів.

Кукурудзяний агар можна виготовити в домашніх умовах в лабораторії або також можна використовувати комерційні носії.

Основа

Кукурудзяна каша - це субстрат, агар - затверджувач, а вода - розчинник.

Кукурудзяний агар можна доповнити твін 80 (моноолеат сорбітану або полісорбатний поліестер 80). Ця сполука знижує поверхневий натяг середовища за рахунок його емульгуючої сили.

Це також створює вороже середовище, яке пригнічує перебільшене розмноження клітин і стимулює ріст гіф, також сприяючи виробленню хламідоспор; останні розглядали структури опору. Ця структура допомагає визначити вид Candida albicans.

Зі свого боку, глюкоза в цьому середовищі підвищує пігментоутворюючу здатність деяких грибів.

Слід зазначити, що середовище кукурудзяної муки з глюкозою не є корисним для демонстрації хламідоспори в комплексі Candida albicans.

Підготовка

Приготування домашнього кукурудзяного агару

Відважте 47 г жовтого кукурудзяного борошна і розчиніть у 500 мл дистильованої води. Нагрівають до 60 ° C, перемішуючи препарат протягом приблизно 1 години. Потім фільтрують через шматок марлі та бавовни, за бажанням його можна знову фільтрувати, пропускаючи препарат через фільтрувальний папір Whatman №2.

Доповнюють об’єм до 1000 мл дистильованою водою. Додайте 17 г агар-агару, нагрівайте до розчинення. Автоклавуйте протягом 15 хвилин при 121 ºC.

Подавати в стерильному посуді Петрі. Зберігати в холодильнику.

Колір підготовленого середовища білуватий з грудчастим виглядом.

Якщо ви хочете приготувати кукурудзяне борошно з глюкозою до описаного вище препарату, додайте 10 г глюкози.

Комерційний агар кукурудзяного борошна

Зважте 17 г зневодненого середовища і розчиніть в 1 літрі дистильованої води. Суміш можна нагріти, акуратно струшуючи до повного розчинення. Стерилізуйте в автоклаві при 121 ºC, 15 фунтів, протягом 15 хвилин.

Налийте в стерильний посуд Петрі. Нехай твердне. Переверніть і зберігайте в холодильнику до використання. Загартовуйте перед використанням.

РН повинен бути 6,0 ± 0,2 при 25 ºC.

Кукурудзяний борошняний агар з Твін 80

Щоб відповідати ISO 18416, агар кукурудзяної муки необхідно приготувати наступним чином:

Зважте 65 грам на літр і додайте 10 мл Tween 80. Нагрійте і кип'ятіть кілька хвилин до розчинення, обережно, щоб не перегріти занадто сильно. Стерилізуйте при 121 ° С протягом 15 хвилин.

Кукурудзяний борошняний агар з глюкозою

Для поліпшення хромогенної сили колоній Trichophyton rubrum та диференціювання їх від T. mentagrophytes до початкової формули можна додати 0,2% глюкози. Не потрібно мати Tween 80, оскільки глюкоза гальмує утворення хламідоспор.

Використовуйте

В основному використання кукурудзяного агару призначене для вивчення штамів Candida, що сприяє їх ідентифікації за допомогою характерного спостереження за хламідоспорами у видів альбіканс. Тобто використання цього агару служить допоміжним методом ідентифікації цих дріжджів.

На цьому агарі можуть розвиватися як сапрофітні, так і патогенні види, але кожен утворює характерні міцеліальні структури. Наприклад, види роду Torulopsis не виробляють міцелій і розмножуються лише бластоконідіями.

Так само, види трихоспорону та Geotrichum виробляють артроконідії на кукурудзяному агарі, і іноді важко відрізнити одне та інше.

Артроконідії роду Geotrichum виробляють розширення гіф, що нагадує хокейну палицю.

Також виробництво пігментів з використанням агару кукурудзяного борошна, доповненого глюкозою, є корисним для ідентифікації Trichophytom rubrum.

Посіяно

Підозрілі колонії Candida, отримані в первинному культуральному середовищі - агарі Sabouraud - з клінічних зразків, косметики, ґрунтів, серед іншого, субкультуряться на агарі з кукурудзяного борошна. Середовище висівають і інкубують при 22 ° С протягом 24 - 48 годин. Час інкубації при необхідності можна подовжити.

Демонстрація хламідоспори

З цією метою агар кукурудзяного борошна з Твін 80 необхідно прищеплювати за допомогою методики Далама. Цей спосіб полягає в тому, щоб взяти частину підозрілої колонії з платиновою ручкою і зробити три паралельних надрізи посередині, тримаючи ручку на 45º. Зрізи слід відокремлювати на відстані 1 см один від одного.

Згодом попередньо полум'яний покривний предмет розміщується на посіяних смугах таким чином, що половина покривається, а інша не розкривається.

Інкубуйте посіяні пластини при 30 ° С протягом 48-72 год, а потім дослідіть під мікроскопом через кришку.

Підтримання грибкових штамів

Для утримання штамів висіяні та вирощені тарілки зберігають у холодильнику (4 до 8 ºC). Таким чином вони можуть тривати кілька тижнів і використовуватися для навчальних чи дослідницьких цілей.

QA

Для контролю стерильності планшет інкубують без щеплення при кімнатній температурі, очікується, що не буде зростання чи зміни кольору.

Для контролю якості можна висівати відомі штами, такі як: Staphylococcus aureus, ATCC 6538, Escherichia coli ATCC 25922, Aspergillus niger ATCC 16404, Candida albicans ATCC 1023, Saccharomyces cerevisiae ATCC 9763.

Очікувані результати - часткове гальмування для S. aureus та кишкової палички. Хоча очікується задовільне зростання в решті штамів.

Aspergillus niger росте чорними і споронованими колоніями приблизно за 5 днів інкубації.

Дріжджові колонії Candida albicans з виробленням хламідоспори.

Saccharomyces cerevisiae продукують великі клітини дріжджів.

Обмеження

На дні пластини утворюється жовтий осад, який не слід плутати з колоніями.

Список літератури

1. Неогенні лабораторії. Кукурудзяна їжа Агар. Доступно за адресою: foodsafety.neogen.com.
2. Microkit Media Media. Кукурудзяна їжа Агар. Доступний за адресою: Medioscultivo.com.
3. Лінарес М, Посібник із виявлення дріжджів Соліса Ф. Доступно за адресою: http: //www.guia.revibero.
4. Урсія F, Гевара М. Преподобний Перу Мед. Громадське здоров'я, 2002; 19 (4): 206-208. Доступно за адресою: Scielo.com
5. Казас-Рінкон Г. Загальна мікологія. 1994. Другий редактор Центрального університету Венесуели, бібліотечні видання. Каракас Венесуела.
6. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Мікробіологічна діагностика Бейлі та Скотта. 12 ред. Редакція Panamericana SA Аргентина.
7. Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Мікробіологічна діагностика. 5-е видання. Редакція Panamericana SA Аргентина.
8. Кастільо Е. Порівняльне вивчення деяких макро- та мікроскопічних методів виділення та розпізнавання роду Candida. Колумбійський рев. Фармацевтичних хімічних наук. 1970; 3 (1): 33-57. Доступний за адресою: Ciencias.unal.edu.co