Агар Hektoen або Hektoen ентеросолюбільного агару твердого середовища є селективним і диференціальної культурою. Він був створений в Інституті Гектоена Кінгом і Мецгером для виділення ентеропатогенних бактерій родів Шигелла та Сальмонела.
Засіб складається з протеозного пептону, дріжджового екстракту, жовчних солей, лактози, сахарози, саліцину, тіосульфату натрію, хлориду натрію, цитрату заліза, цитрату амонію, бромотимолу синього, кислого фукзину та агару. Цей склад дозволяє диференціювати роди шигел та сальмонел від решти бактерій, здатних рости в цьому середовищі.
A. Агар Діва Хектоен B. Насіннєвий агар Гектоен. Джерело: Flickr.com/ Оригінальним завантажувачем був Philippinjl у Французькій Вікіпедії.
Хоча є й інші носії з такою ж функцією, як агар Hektoen, він має більшу перевагу порівняно з іншими носіями, особливо, коли ви хочете відновити види шигел.
Види обох статей викликають серйозні шлунково-кишкові проблеми у людини через споживання забрудненої їжі; тому передача фекально - оральна. Ось чому використання агару Гектоена в основному показано при мікробіологічному аналізі стільців та проб їжі.
Основа
Гектоен Агар містить пептони та дріжджовий екстракт як джерело поживних речовин, забезпечуючи необхідні елементи для розвитку мікробів.
Однак у ньому також є жовчні солі, які діють, пригнічуючи ріст деяких бактерій, особливо грампозитивних та деяких грамнегативних. Саме з цієї причини він вважається селективним засобом.
З іншого боку, агар Гектоен є диференційованим середовищем. Ця властивість надається наявністю ферментованих вуглеводів, таких як лактоза, сахароза та саліцин, разом із системою показників рН, представленою бромотимолом синього та кислотного фуксину.
Усі бактерії, здатні рости на цьому середовищі, які не належать до роду Salmonella та Shigella, розвиватимуть колонії лосося чи апельсина, за винятком роду Proteus. Це пов’язано з ферментацією одного або декількох присутніх вуглеводів, які підкисляють середовище, завдяки чому показник рН перетворюється.
Зі свого боку, род шигел та сальмонел не здатний ферментувати жоден з присутніх вуглеводів, використовуючи лише пептони як джерело енергії, що лужить середовище, і тому їх колонії синьо-зелені.
У цьому середовищі також можна виділити бактерії, здатні утворювати сірководень (безбарвний газ). Тиосульфат натрію виступає джерелом сірки, тоді як цитрат заліза є розробником. Обидві сполуки дозволяють утворити чорний осад сульфіду заліза, що показує реакцію.
Чорний осад в центрі колонії з прозорим ореолом навколо нього надає вигляду риб'ячих очей. Ця характеристика говорить про наявність роду Salmonella.
Нарешті, хлорид натрію підтримує осмотичний баланс, а агар забезпечує тверду консистенцію середовища.
Підготовка
Зважте 76 г зневодненого середовища і розчиніть в літрі дистильованої води. Енергійно збийте суміш, а потім дайте їй відпочити 10 - 15 хвилин. Його можна нагрівати і кип'ятити, здійснюючи обертові рухи до повного його розчинення. Цей засіб не є автоклавним.
Коли середовище досягає температури приблизно 45 ° C, об’єм 20 мл заливають безпосередньо в стерильний посуд Петрі.
Агару дають затвердіти. На той час вони готові до використання. Рекомендується використовувати їх негайно. Якщо це неможливо, їх зберігають у холодильнику до використання.
Плити слід заздалегідь вийняти з холодильника до висіву, щоб довести їх до кімнатної температури.
РН середовища повинен бути 7,5 ± 0,2. Колір зневодненого середовища фіолетовий, а підготовлений засіб - коричнево-зелений.
Використовуйте
Використання агару Гектоена рекомендується для пошуку бактерій роду Шигелла та Сальмонели у зразках калу та їжі.
Можливість виділення цих бактерій значно збільшується, якщо зразок попередньо збагачується спеціальними бульйонами, такими як бульйон селеніту, цистиновий селенітовий відвар, тетратіонатний бульйон тощо.
Прищепка повинна бути міцною, а посів проводиться прожилкою. Пластинки інкубують при температурі 37 ° С протягом 24 - 48 годин при аеробіозі.
Інкубація протягом 48 годин рекомендується, оскільки характеристики колоній чіткіші для їх інтерпретації та диференціації в цей час.
QA
Для здійснення контролю якості на цьому середовищі використовуються сертифіковані бактеріальні штами, такі як: Salmonella typhimurium ATCC 14028, Salmonella enteritidis ATCC 13076, Shigella flexneri ATCC 12022 та Shigella sonnei ATCC 25931.
Очікувані результати такі: Salmonella typhimurium та Salmonella enteritidis повинні розвивати синьо-зелені колонії з чорним центром або без нього. Тоді як види шигел виростатимуть як синьо-зелені колонії.
Також можуть бути включені штами Escherichia coli ATCC 29212, Proteus mirabilis, Klebsiella pneumoniae ATCC 700603, Enterococcus faecalis ATCC 29212 та Staphylococcus aureus ATCC 25923.
У цих випадках спостерігаються такі ознаки: E. coli та K. pneumoniae розвиватимуться в цьому середовищі лососево-оранжеві колонії з осадом одного кольору. Тоді як Proteus розвиватиме синьо-зелені колонії з чорним центром або без нього.
У той час як S. aureus та E. faecalis повинні бути загальмовані, E. faecalis періодично вдається виростити як дуже маленькі, жовті колонії.
З іншого боку, оскільки цей засіб не є автоклавним, важливо оцінити стерильність середовища. Тому з кожної підготовленої партії одну-дві неінокульовані пластини слід інкубувати при температурі 37 ° С протягом 24 годин при аеробіозі.
Очевидно, жодного зростання на тарілці не очікується.
Обмеження
-Види Proteus можуть розвиватися в цьому середовищі, а характеристики їх колоній можна сплутати з видами Salmonella або Shigella. З цієї причини будь-яка підозріла колонія повинна бути підтверджена біохімічними тестами.
- Необхідно супроводжувати використання цього середовища з іншими менш селективними агарами, оскільки, якщо шуканий мікроорганізм виявляється в низьких концентраціях, він може не розвиватися в цьому середовищі.
-Не перегрівайте під час підготовки, оскільки надмірне тепло змінює склад середовища.
-Зазвичай, можуть з'являтися колонії сальмонели, що ферментує лактозу, які можуть залишитися непоміченими.
Список літератури
- Автори Вікіпедії Ектоен ентеричний агар. Вікіпедія, Вільна енциклопедія. 13 березня 2019 р., 23:38 UTC. Доступно за адресою: .wikipedia.org / Доступ 16 березня 2019 року.
- BD Laboratories. BD Гектоен Ентеральний агар (HE Agar). 2013. Доступний за адресою: bd.com
- Britannia Laboratories. Гектоен Ентерік Агар. 2015. Доступний за адресою: britanialab.com
- Лабораторії Difco Francisco Soria Melguizo. Гектоен агар. Доступно за адресою: f-soria.es
- Інструкція Difco & BBL, Hektoen Enteric Agar. 2-е видання. Доступно на сайті: bd.com/europe