АГАР МС: ОСНОВА, ПІДГОТОВКА ТА ВИКОРИСТАННЯ - БІОЛОГІЯ - 2025

Агар МРС є селективної твердої культуральної середовищем , використовуваної для виділення і підрахунку молочно - кислих бактерій, особливо з роду Lactobacillus. Цей агар був створений в 1960 році Маном, Рогозою та Шарпом, що носить однойменну назву, але через свою складність часто використовується абревіатура MRS.

До його складу входить протеозовий пептон, м'ясний екстракт, дріжджовий екстракт, глюкоза, сорбітан монолеат, двоталій фосфат, ацетат натрію, цитрат амонію, сульфат магнію, сульфат марганцю та агар.

Насіння людини Rogosa та Sharpe Agar (MRS) з Lactobacillus sp. Джерело: Фотографії, подаровані авторами за цю статтю: Баес Е, Гонсалес Г, Ернандес Г, Лопес Е, Мега М. Фото, зроблені під час дослідження під назвою: Оцінка молочнокислих бактерій та біфідобактерій з пробіотичним потенціалом у грудному молоці та дитячому стільці .

Цей склад дозволяє правильно розвивати молочнокислі бактерії з клінічних проб, таких як кал, виділення з піхви, пероральні проби та грудне молоко, а також молочна та м'ясна їжа.

Його не застосовують регулярно в клінічних лабораторіях, оскільки молочнокислі бактерії рідко беруть участь у хворобливих процесах. Однак у галузі харчової мікробіології частіше застосовують агар MRS.

З іншого боку, це середовище використовується деякими дослідницькими центрами, метою яких є вивчення молочнокислих бактерій.

Основа

Агар Людина, Рогоза та Шарп має досить складний склад. Розбивши функцію кожного з її компонентів, можна пояснити її основу.

Пептон протеїну, м'ясний екстракт, дріжджовий екстракт і глюкоза - це поживні речовини, які забезпечують джерело вуглецю, азоту, вітамінів і мінералів, необхідних для росту бактерій. Крім того, глюкоза є універсальним джерелом енергії, що використовується в більшості культурних середовищ.

З іншого боку, для сприяння росту молочнокислих бактерій необхідна наявність кофакторів (катіонів), необхідних для метаболізму лактобактерій та супутніх бактерій; Ці сполуки - солі натрію, магнію та марганцю.

Так само сорбітан монолеат або полісорбат 80 є важливим джерелом жирних кислот, оскільки вони поглинаються як поживні речовини.

Крім того, монолеат сорбіту та цитрат амонію діють шляхом пригнічення розвитку супутньої флори, особливо грамнегативних бактерій, забезпечуючи селективний характер цього агару.

Нарешті, агар-агар - це той, який забезпечує тверду консистенцію середовища.

Є й інші варіанти агару Man Rogosa Sharpe; одна з них доповнена цистеїном (MRSc), дуже корисним для виділення біфідобактерій, серед інших мікроорганізмів. З іншого боку, є середовище MRS, доповнене неоміцином, паромоміцином, налідиксиновою кислотою та хлоридом літію, спеціальна для селективного підрахунку біфідобактерій у молочних продуктах.

Підготовка

Зважте 68,25 грама зневодненого середовища і розчиніть в одному літрі дистильованої води. Дайте постояти 5 хвилин. Щоб повністю розчинитися, зверніться до джерела тепла, часто помішуючи, і кип’ятіть 1–2 хвилини. Стерилізуйте в автоклаві при 121 ° С протягом 15 хвилин.

Виходячи з автоклава, дайте постояти кілька хвилин і розподіліть, поки ще гаряче, в стерильному посуді Петрі.

Дайте затвердіти та перевернути тарілки, замовляйте у тарілки та холодильник до використання. Перед використанням дозвольте плитам нагрітися до кімнатної температури.

РН середовища повинен бути 6,4 ± 0,2. Деякі комерційні будинки рекомендують pH від 5,5 до 5,9.

Зневоднене середовище має бежевий колір і готується темно-бурштиновий.

Як зневоднене середовище, так і підготовлені тарілки слід зберігати при температурі 2-8 ° C.

Програми

Пластини агару MRS можуть бути насінні на поверхні (виснаження або шпатель Дригальського). Його також можна посіяти на глибину. Пластини слід інкубувати при 37 ° С в мікроаерофільності (4% O ₂ і 5-10% CO ₂ ) протягом 24 - 72 годин.

Спосіб висіву вибирається відповідно до мети, що переслідується (виділення або підрахунок).

Характеристика колоній

Припущенні колонії Lactobacillus мають білуватий колір і мають мукаїдний або кремовий вигляд на цьому агарі. Згодом вони повинні бути ідентифіковані.

Виділення молочнокислих бактерій

Для цього використовується поверхневий посів насіння. Зразки для посіву потребують попередньої процедури.

У випадку зразків грудного молока рекомендується центрифугувати 1 мл зразка при 14000 об / хв протягом 10 хвилин, щоб видалити жировий шар. 900 мкл викидається, а в решті 100 мкл осад суспендують і виливають на поверхню агару MRS, після чого він повинен розподілятися рівномірно за допомогою шпателя Дригальського.

У випадку зразків калу один (1) грам калу зважують та гомогенізують у 9 мл 0,1% стерильної пептонної води, що відповідає розведенню 1/10. Потім проводять серійні розведення, до остаточного розведення 10 ^-4 .

Нарешті, 100 мкл розведення 10 ^-2 , 10 ^-3 та 10 ^-4 беруть і кожне розведення висівають на агар MRS, рівномірно розподіляючи шпателем Дригальського.

Молочнокислі бактерії

У цьому випадку посів проводиться на глибину.

Для зразків грудного молока беруть 1 мл і поміщають у стерильну конічну пластикову пробірку. Агар MRS додають при приблизній температурі 40 ° С до кінцевого об'єму 25 мл, отримуючи однорідну суміш. Згодом його розливають у стерильний посуд Петрі рівномірним способом і дають постояти до полімеризації.

Для зразків калу проводять розведення, як описано раніше. Візьміть 1 мл кожного розведення і помістіть його в стерильні конічні пластикові пробірки. Розплавлений агар MRS додають до об'єму 25 мл.

Суміш кожного розведення рівномірно виливають у стерильний чашки Петрі. Нарешті, його залишають відпочивати до полімеризації.

Колонія розраховує на агар Man Rogosa та Sharpe (MRS). Джерело: Фото подаровано для цієї статті. Автори: Báez E, González G, Hernández G, López E, Mega M. Фото, зроблене під час дослідження під назвою: Оцінка молочнокислих бактерій та біфідобактерій з пробіотичним потенціалом у грудному молоці та дитячому калі.

Рівень досліджень

З кожним днем ​​вивчення молочнокислих бактерій викликає все більший інтерес; Дослідники, зокрема, прагнуть дізнатись про нові штами та їх потенціал як початкових ферментів для стандартизації у виробництві молочних продуктів, серед інших видів використання.

У цьому сенсі Альварадо та ін. (2007) використовували агар MRS для того, щоб провести дослідження, в якому вони виділили, ідентифікували та охарактеризували молочнокислі бактерії, присутні у курячому венесуельському копченому Андському сирі.

У сирі вони виявили наявність бактерій родів Lactococcus і Lactobacillus і дійшли висновку, що суміші виділених штамів підходять як початкові штами при виробництві сирів з пастеризованого молока.

З іншого боку, Sánchez та ін. (2017) використовували агар MRS для дослідження наявності молочнокислих бактерій у травному тракті поросят, щоб використовувати їх як нативних пробіотиків, що підвищують продуктивність здорових поросят.

За допомогою цього середовища їм вдалося виділити чотири види: Lactobacillus johnsonii, Lactobacillus brevis, Enterococcus hirae та Pediococcus pentosaceus.

Аналогічно, Báez та ін. (2019) використовували агар MRS для оцінки молочнокислих бактерій (LAB) та біфідобактерій з пробіотичним потенціалом у грудному молоці та дитячому калі.

Їм вдалося виділити 11 BAL та 3 Bifidobacteria sp у грудному молоці та 8 BAL та 2 Bifidobacteria sp. в калі. Усі відповідали певним параметрам, які доводять їх як бактерії з пробіотичною активністю.

Автори дійшли висновку, що як грудне молоко, так і кал у виключно годуваних дітей грудного віку є природними джерелами пробіотичних бактерій.

QA

Для оцінки якості агару MRS контролюють штами, такі як:

Lactobacillus fermentum ATCC 9338, Lactobacillus casei ATCC 393, Bifidobacterium bifidum ATCC 11863, Lactobacillus plantarum MKTA 8014, Lactobacillus lactis MKTA 19435, Pediococcus damnosus MKTA 29358, Escherichia coli та Bacillus cerei.

Очікувані результати - задовільний ріст для перших 6 бактерій, тоді як кишкова паличка та Bacillus cereus повинні бути повністю пригнічені.

Список літератури

1. Alvarado C, Chacón Z, Otoniel J, Guerrero B, López G. Ізоляція, ідентифікація та характеристика бактерій молочної кислоти з венесуельського копченого андського сиру Artisan. Її використання в якості початкової культури. Коефіцієнт. (Маракайбо) 2007; 17 (3): 301-308. Доступно за адресою: scielo.org.
2. Sánchez H, Fabián F, Ochoa G, Alfaro Виділення бактерій молочної кислоти з травного тракту порося. Преподобний слідчий. ветеринар. Перу 2017; 28 (3): 730-736. Доступно за адресою: scielo.org.
3. Баес Е, Гонсалес Г, Ернандес Г, Лопес Е, Мега М. Оцінка молочнокислих бактерій та біфідобактерій з пробіотичним потенціалом у грудному молоці та фекаліях немовлят в муніципалітеті Асеведо, Міранда 2017. Бакалаврська робота для отримання ступеня бакалавра в Біоаналіз. Університет Карабобо, Венесуела.
4. Британія. MRS агар. 2015. Доступний за адресою: britanialab.com
5. Автори Вікіпедії MRS агар. Вікіпедія, Вільна енциклопедія. 10 січня 2018, 19:44 UTC. Доступно за адресою: wikipedia.org Доступно 17 лютого 2019 року.
6. Рой Д. Носії для виділення та перерахування біфідобактерій у молочних продуктах. Int J Food Microbiol, 200128; 69 (3): 167-82.