АГАР КАРТОПЛЯНОГО ДЕКСТРОЗИ: ОБГРУНТУВАННЯ, ПІДГОТОВКА ТА ВИКОРИСТАННЯ - БІОЛОГІЯ - 2025

Картопляний агар з декстрозой є середовищем, тверда речовина , НЕ - селективна поживні речовин культури. У ньому можуть рости бактеріальні та грибкові види, але його використання особливо показано для виділення ниткоподібних грибів та дріжджів. Він також відомий як середовище PDA для англійської експресії Potato Dextrose Agar.

Він особливо корисний для виділення фітопатогенних грибів, тобто тих, що вражають рослини. Для посіву зразків із заражених овочів можуть використовуватися інші засоби, такі як агар Сабуро або мальта-агар, однак для рутинного використання кращий декстрозний агар є кращим за рахунок отримання більшої спороношення.

Aspergillus niger і Sinemas на агарі картоплі декстрози відповідно. Джерело: Alextrevelian 006 в англійській Вікіпедії / Джозелрояс

Він також використовується для підрахунку грибкових колоній у зразках косметики, фармацевтичних продуктів та деяких молочних продуктів. Так само він підходить для посіву зразків шкірних покривів у пошуках дерматофітів, які дуже добре ростуть у цьому середовищі, розвиваючи свої характерні пігменти.

Картопляне декстрозне середовище - дуже просте і легке засіб для приготування в лабораторії. Він містить, як випливає з його назви, настій картоплі, декстрози та агар-агару. Додатково можуть бути додані інгібіторні речовини для запобігання росту бактерій та підвищення селективності для грибкових видів.

Основа

Картопляний декстрозний агар - культуральне середовище, яке забезпечує поживні елементи, необхідні для розвитку ниткоподібних грибів та дріжджів.

Поєднання настою картоплі з глюкозою забезпечує ідеальне джерело енергії для задовільного росту грибів. Тоді як агар - це той, хто забезпечує консистенцію середовища.

Само по собі середовище не пригнічує ріст бактерій, тому є неселективним середовищем. Щоб зробити його вибірковим, йому потрібно додати інгібіторні речовини, такі як винна кислота або антибіотики.

Підготовка

-Домашня (некомерційна) підготовка агару картоплі декстрози

Чашки Петрі

Він готується наступним чином:

В першу чергу картоплю дуже добре миють, видаляючи у них ґрунт. Їх нарізають тонкими скибочками з усім і шкаралупою. 200 грам картоплі відварюють і варять у літрі дистильованої води протягом півгодини.

По закінченні часу весь препарат проціджують або проціджують через марлю.

Отриману рідину доливають дистильованою водою до одного літра. Додайте до інфузії 20 г агар-агару і 20 г декстрози, добре перемішайте і автоклавуйте при 121 ° С при тиску 15 фунтів протягом 15 хвилин.

Дайте охолонути до 50 ° C і подайте в стерильний посуд Петрі. Підготовлені тарілки зберігають у холодильнику.

Клини

Також можна приготувати клини з агарового картопляного агару.

У цьому випадку перед стерилізацією в автоклаві 12–15 мл середовища поміщають в пробірки, пізніше їх автоклавують і, залишаючи, лягають на спеціальні підставки, поки вона не затвердіє. Зберігати в холодильнику.

Середовище залишається при рН 5,6 ± 0,2, проте деякі лабораторії додають 10% винної кислоти для зниження рН до 3,1 ± 0,1 для того, щоб гальмувати ріст бактерій.

У цьому ж сенсі інші лабораторії вважають за краще додавати антибіотики, щоб зробити його вибірковим для вирощування грибів та запобігти росту бактерій.

-Комерційна підготовка агару картоплі декстрози

Зважте 39 г комерційно доступного зневодненого середовища та розчиніть в одному літрі дистильованої води. Дайте йому відпочити 5 хвилин.

Суміш нагрівають при частому перемішуванні до повного розчинення. Згодом його стерилізують в автоклаві при 121 ° С протягом 15 хвилин.

Пластини або клини можна готувати. Продовжуйте, як описано вище.

PH залишається на рівні 5,6 ± 0,2. Якщо потрібен рН 3,1, перед подачею в тарілки слід додати 14 мл стерильної 20% винної кислоти.

Сире середовище бежеве, а підготовлене середовище - світло-бурштинове зі злегка каламутним або опалесцентним виглядом.

Програми

Процес посіву зразків рослин на агар картоплі декстрози

-Для забарвлених листя

Листя нарізають шматочками.

У 50-кубовий склянку з 50% -ним спиртом помістіть шматочки листя (пофарбовані та здорові шматки), щоб продезінфікувати поверхню на 20-30 секунд. Викиньте спирт і додайте 20% гіпохлориту натрію протягом 40 - 50 секунд, якщо вони тонкі листя, і збільште час до 80 секунд, якщо це кора і колоди.

Відкиньте гіпохлорит натрію і візьміть дезінфіковані шматки стерильними щипцями і помістіть їх на поверхню середовища (максимум 10 штук). Встановіть дату та інкубуйте при 20-30 ° C.

-Для фруктів і бульб

Якщо плід м’ясистий, відкрийте уражений гриб фрукт і візьміть шматочки стерильним скальпелем, як із хворих, так і здорових частин і покладіть їх на поверхню агару.

Якщо плід цитрусовий, наприклад, лимон або апельсин, його потрібно розкрити і посіяти насіння.

Коли уражається поверхня плодів і спостерігаються спори, ідеальним є використання методу решітки на тарілці; Це полягає у дотику до спор стерилізованим та охолодженим шпателем у формі "L", а потім на 2 - 3 рази на агарі.

-Для зерна

Їх дезінфікують, як описано на листках, а пізніше поміщають на агар.

-Для гілок і стебел

Кору відчищають, а пізніше шматочки здорової та хворої частини беруть і висівають безпосередньо на агар.

Посіяні пластини інкубують аеробним шляхом при 20-30 ° С протягом 72 годин.

Процес посіву зразків шкіри, волосся або нігтів на агарі картоплі декстрози

Відбір проб слід проводити за допомогою леза скальпелю № 11 для вирізання уражених волосся, лусочок шкіри або нігтів у пошуках дерматофітів. Перед взяттям зразка ділянку слід продезінфікувати 70% спиртом.

-Зразок шкіри

При лускатих ураженнях краю ураження слід вискоблювати, так як грибок частіше зустрічається там.

При ексудативних ураженнях зразок беруть сухим або вологим тампоном. Посійте негайно на агар картоплі декстрози або агар Сабуро. Уникайте засобів пересування.

Інший метод відбору проб - це техніка квадратного килима Mariat і Adan Campos. У цьому випадку уражену ділянку 5 разів протирають шматочком стерильної вати для подальшого обробітку.

Зразок можна помістити безпосередньо в культуральне середовище.

-Приклад волоска

Залежно від патології уражену частину можна відрізати або викорінити. Помістіть зразок у культуральне середовище.

-Зразок нігтя

Конкретну частину ураженого нігтя можна вишкребити або порізати. Це буде залежати від типу травми.

Перед посівом розріжте зразок на шматки 1 мм, щоб збільшити ймовірність контакту гриба з культуральним середовищем.

Процедура ідентифікації

Колонії, отримані в тарілці, виділяють у пробірки, що містять агар картоплі декстрози, для проведення макроскопічного дослідження колоній (зовнішній вигляд, колір, консистенція, ступінь розвитку).

Мікроскопічне дослідження (спостереження за структурами та їх утвореннями) може проводитися мікрокультурами або прямим спостереженням під мікроскопом між слайдом і слайдом.

Колонія кол

Цей засіб також може бути використаний для визначення грибкового та дріжджового навантаження, наявного у рослинних, харчових, косметичних та лікарських зразках. Для цього використовується агар картоплею декстрози, доповнений антибіотиками, такими як: (хлорамфенікол, хлоротетрациклін або обидва).

Налийте 1 мл зразка - бажано розведеного - у стерильну та порожню чашку Петрі, після чого розплавіть килимок з агаром картопленої декстрози та дайте охолонути до 45 ° С. Налийте на чашку Петрі і обертайте до однорідності. Дайте йому відпочити, поки не затвердіє.

Інкубіруйте аеробним шляхом при 20-25 ° С (цвілі) або 30-32 ° С (дріжджі) протягом 5 - 7 днів і більше, залежно від типу гриба та типу зразка. Дві пластини можна використовувати для інкубації в обох діапазонах температур.

Підрахунок грибкових колоній у пробі їжі. Агар картопляного декстрози, доповнений антибіотиками. Джерело: фото Pxhere.com / 777267

Підтримання грибкових штамів

Агар картоплі Декстроза може використовуватися для підтримки життєздатних грибкових штамів протягом декількох років.

Для цього гриб вирощують на клинах агару картоплі декстрози, і як тільки гриб виріс, його покривають мінеральною олією. Масло слід стерилізувати в автоклаві протягом 45 хвилин і мати в'язкість приблизно від 300 до 330 сайбольт. Масло має бути на 1 - 2 см над кінчиком скоса.

QA

З кожної підготовленої партії візьміть 1 або 2 тарілки та інкубуйте їх при 25 ° С протягом 48 годин або при 20 ° С протягом 96 годин. Хороший контроль стерильності - це той стан, коли розвиток колонії не спостерігається.

Також можуть використовуватися відомі або сертифіковані контрольні штами, такі як:

Saccharomyces cerevisiae ATCC 9763, Candida albicans ATCC 10231, Aspergillus brasiliensis ATCC 16404, Trichophyton mentagrophytes ATCC 9533. Гарне зростання очікується у всіх випадках.

Список літератури

1. Britannia Laboratories. Картопля глюкозного агару. 2015. Доступний за адресою: britanialab.com
2. Неогенні лабораторії. Агар картопляний декстрози. Доступно за адресою: foodsafety.neogen.com
3. Інсумолаб-лабораторія. Агар з картоплею декстрози. Доступно за адресою: insumolab.cl
4. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Мікробіологічна діагностика Бейлі та Скотта. 12 ред. Редакція Panamericana SA Аргентина.
5. Казас-Рінкон Г. Загальна мікологія. 1994. Другий редактор Центрального університету Венесуели, бібліотечні видання. Каракас Венесуела.
6. Aceituno M. Оцінка мікробіологічної якості в тіні для повік, компактного порошку національної виробничої лабораторії, згідно з еталонним методом Pharmacopea Usp 2005. Дисертація на здобуття звання фармацевтичного хіміка. Університет Сан-Карлоса Гватемали.
7. Cuétara M. Обробка поверхневих зразків. Iberoamerican Journal of Mycology. 2007 р .; pp. 1-12