АГАР САБУРО: ОСНОВА, ПІДГОТОВКА ТА ВИКОРИСТАННЯ - БІОЛОГІЯ - 2025

Агар Сабуро , також відомі як Сабуро агар з декстрозой, є твердою середовищем, особливо збагаченої для виділення і розвитку грибів, такі як дріжджі, цвіль і дерматофіти.

Тому цього засобу не може бракувати в лабораторії мікробіології для дослідження наявності патогенних або умовно-патогенних грибів, як із клінічних, так і неклінічних зразків. Так само він ідеально підходить для росту ниткоподібних бактерій, таких як Streptomyces і Nocardias. Його використання дуже широке, оскільки його можна використовувати в людській, тваринній, рослинній та промисловій мікології.

A. Агар без насіння Сабуро. В. Агар Сабуро, посіяний дріжджами. Джерело: Фотографії зроблені автором MSc. Маріельса гіл

Це середовище було створено в 1896 році видатним дерматологом Раймоном Сабуро, який став всесвітньо відомим фахівцем з розладів шкіри голови, в основному викликаних дерматофітами.

Його створення було настільки важливим, що воно використовувалося з тих пір і залишається сьогодні, хоча з деякими модифікаціями.

Хоча це особливе для грибів, бактерії можуть рости в цьому середовищі, тому для зразків зі змішаною флорою необхідне включення антибіотиків до їх приготування для пригнічення росту бактеріальної флори, яка може бути присутнім.

Вибір антибіотика повинен здійснюватися ретельно і з урахуванням виду грибка, який підлягає відновленню, оскільки деякі інгібуються в присутності певних речовин.

Основа

Декстрозний агар Сабуро - це середовище, яке в початковому складі є слабко селективним, завдяки кислотному pH 5,6 ± 0,2, проте бактерії все ще можуть розвиватися, головним чином у тривалих інкубаціях.

Середовище містить казеїновий пептон і підшлункову залозу з тканини тварин, які забезпечують джерело вуглецю та азоту для росту мікроорганізмів.

Він також містить високу концентрацію глюкози, яка діє як джерело енергії, сприяючи зростанню грибів над бактеріями. Все це змішується з агар-агаром, компонентом, який надає йому правильну консистенцію.

З іншого боку, агар декстрози Сабуро може бути вибірковим, якщо додавати антибіотики.

Антибіотики особливо корисні при зразках ран, відкритих виразок або будь-яких зразках, у яких підозрюється велике бактеріальне зараження.

Найчастіше використовуються комбінації декстрази агару Сабуро з антибіотиками

-Сабуровий агар з хлорамфеніколом: ідеально підходить для відновлення дріжджів і ниткоподібних грибів.

- Агар Сабуро з гентаміцином та хлорамфеніколом: майже всі нитчасті гриби та дріжджі ростуть у цьому середовищі, і він пригнічує велику кількість бактерій, включаючи ентеробактерії, псевдомонас та стафілокок.

- Агар Сабуро з циклогексимідом: він особливо корисний для зразків з шкіри або дихальних шляхів, якщо підозра є на диморфні гриби.

Циклогексимід слід застосовувати обережно; Хоча він використовується для інгібування росту непатогенних чи екологічних грибів та дріжджів, які можуть бути присутніми в складі забруднюючих речовин у зразку, він також пригнічує ріст деяких грибів, таких як Cryptococcus neoformans, Aspergillus fumigatus, Allescheria boydii, Penicillium sp та інших умовно-патогенних грибів.

- Агар Сабуро з хлорамфеніколом плюс циклогексимідом: застосовується головним чином для виділення дерматофітів та диморфних грибів. Недоліком є ​​те, що він пригнічує деякі види умовно-патогенних грибів, такі як Candida no albicans, Aspergillus, Zygomycetes або C. neoformans.

- Агар Сабуро з хлорамфеніколом, стрептоміцином, пеніциліном G та циклогексимідом: він ідеально підходить для зразків, надзвичайно забруднених бактеріями та сапрофітними грибами, але має недолік, оскільки він пригнічує ріст Actinomyces та Nocardias, крім вищезгаданих умовно-патогенних грибів.

Підготовка

Якщо інгредієнти у вас є окремо, його можна приготувати наступним чином:

Агар з декстрози Сабуро

Зважити:

- 40 гр декстрози

- 10 г пептону

- 15 гр агар-агару

- Виміряйте 1000 мл дистильованої води

Всі інгредієнти змішуються, pH доводять до 5,6. Розчини розчиняють кип’ятінням, 20 мл середовища розподіляють по пробірках розміром 25 х 150 мм, без ободів і бажано з бавовняною кришкою.

Трубки з бавовняною кришкою. Джерело: Фото зроблено автором MSc. Маріельса гіл

Також можна використовувати інші розміри труб, залежно від наявності.

Їх автоклавують протягом 10 хвилин в атмосфері тиску (121 ° C). Час автоклавування не слід перевищувати. Виходячи з автоклава, трубки нахиляються за допомогою опори, поки вони не затвердіють у дзьобі флейти.

Інший спосіб - розчинити інгредієнти нагріванням, поки не закипить. Автоклавуйте 10 хвилин у тому ж флаконі, після чого розподіліть по 20 мл у чашках Петрі.

Якщо у вас є середовище агару Sabouraud з декстрозою, яке вже містить всі інгредієнти, продовжуйте зважувати кількість, визначену комерційною компанією, на один літр води. Решта етапів ті ж, що описані вище.

Декстрозний агар Сабуро (модифікація Еммонса)

Зважити:

- 20 гр декстрози

- 10 г пептону

- 17 гр агар-агару

- Виміряйте 1000 мл дистильованої води

Всі інгредієнти змішуються, pH доводять до 6,9. Дійте так само, як і в попередньому випадку.

Є комерційні будинки, які пропонують засіб з усіма інгредієнтами. У цьому випадку зважте і підготуйте так, як описано на вкладиші.

Декстрозний агар Сабуро (модифікація Еммонса) з хлорамфеніколом

Хлорамфенікол Столовий розчин

- Важать 500 мг основи хлорамфеніколу

- Відміряйте 100 мл 95% етанолу

- Змішайте

Середовище агару Sabouraud (Emmons) готується, як описано раніше, і додатково на кожен літр середовища додають 10 мл вихідного розчину хлорамфеніколу перед автоклавуванням.

Агар Сабуро Еммонс з декстрозою з циклогексимідом

Циклогексимід вихідний розчин

- Зважте 5 г циклогексиміду

- Відміряйте 100 мл ацетону

- Змішайте

Середовище агару Sabouraud (Еммонс) готують, як описано раніше, і додатково на кожен літр середовища додають 10 мл вихідного розчину циклогексиміду перед автоклавуванням.

Ахар декстрози Сабуро (Еммонс) з хлорамфеніколом та циклогексимідом

Середовище агару Sabouraud (Еммонс) готується, як уже описано, і додатково на кожен літр середовища додають 10 мл вихідного розчину хлорамфеніколу та 10 мл вихідного розчину циклогексиміду перед автоклавуванням.

Інші антибіотики, які можна додавати

Від 20 000 до 60 000 одиниць пеніциліну на літр середовища.

30 мг стрептоміцину на літр середовища.

Обидва повинні бути включені після автоклавування середовища, злегка охолодженого (50-55 ° C).

0,04 г неоміцину на літр середовища.

0,04 г гентаміцину на літр середовища.

Особливі міркування

В цілях безпеки бажано висівати декстрозний агар Сабуро в клиноподібні трубки (нахилені в дзьобик флейти), а не в чашки Петрі, щоб уникнути розсіювання та вдихання спор.

Важливо, щоб трубки з агаром Сабуро були покриті бавовною, а не гвинтовим ковпаком, оскільки, як показано, напіванаеробні умови гальмують утворення спор у деяких штамах, наприклад Coccidioides immitis. Також більшість грибів є аеробними.

У разі використання гвинтової кришки не закривайте герметично.

QA

Підготовлений носій повинен пройти контроль якості для перевірки його належного функціонування. Для цього висівають певні контрольні штами.

Для агару декстрози Сабуро з хлорамфеніколом можна використовувати штами ATCC Candida albicans, які повинні мати відмінний ріст. Ще одну пластинку прищеплюють штами Escherichia coli, які повинні бути повністю пригнічені.

Неінокульована пластина також інкубується, в якій не повинно рости мікроорганізми.

Для агару декстрози Сабуро з хлорамфеніколом і циклогексимідом можна використовувати штами Trichophyton mentagrophytes, і вони повинні добре розвиватися. Ще одну тарілку прищеплюють штамом Aspergillus flavus, в якому не повинно бути мало або немає зростання. Крім того, неінокульовану тарілку інкубують для демонстрації її стерильності.

Для агару декстрози Сабуро з циклогексимідом застосовують штами Candida albicans, Trichophyton rubrum або Microsporum canis, які мають добре демонструвати ріст.

Так само включається штам Aspergillus flavus, який демонструє незначне зростання або його відсутність. Нарешті, інкубують неінокульовану тарілку для контролю стерильності.

Програми

Первинна культура

Класичний агар декстрози Сабуро містить 4 грами декстрози і є чудовим як первинне ізоляційне середовище, оскільки показує характерну морфологію кожного гриба.

Він також відмінний для демонстрації виробництва пігменту. Однак це не найкращий засіб спостереження за спороношенням.

Також не рекомендується вирощувати Blastomyces dermatitidis, який пригнічується високою концентрацією присутнього глюкози.

З іншого боку, для вирощування необхідно враховувати певні міркування.

Деякі гриби найкраще ростуть при кімнатній температурі, наприклад, цвілі, інші успішно ростуть при 37 ° С, наприклад, деякі дріжджі, а інші можуть рости при обох температурах (диморфні гриби).

З цієї причини іноді доводиться використовувати кілька пластин агару Сабуро для одного зразка, оскільки дублювання посівів часто робиться для інкубації однієї пластини при кімнатній температурі, а іншої при 37 ° С.

Наприклад, Sporothrix schenckii висівають у дві тарілки; один інкубується при кімнатній температурі для отримання фази цвілі, а інший інкубується при 37 ° С для отримання дріжджової фази, але в останню необхідно додати 5% крові до середовища.

В інших випадках, таких як зразки міцетоми, висівають дві пластинки агару Сабуро, одна - хлорамфеніколом, а друга - циклогексимідом. Перший дозволить розростатися збудників мікотоми грибкового походження (Еуміцетома), а другий збудників міцетоми бактеріального походження, таких як актиноміцетоми.

Спороношення

Екзон Модифікований аґруст із декстрози Сабуро містить 2 грами декстрози і використовується не тільки для виділення, але і для спороношення та збереження грибів.

У цьому середовищі штами Blastomyces dermatitidis можуть бути відновлені.

Збереження

Для збереження грибних культур їх можна зберігати в холодильнику (2-8 ° C). Час збереження може коливатися від 2 до 8 тижнів. Після закінчення цього часу їх потрібно субкультурити, щоб повторити процес.

Деякі гриби найкраще зберігаються при кімнатній температурі, такі як Epidermophyton foccosum, Trichophyton schoenleinnii, T. violaceum та Microsporum audounii.

Утримання штаму може бути подовжено, щоб уникнути плеоморфізму, якщо декстроза повністю виведена з агару і якщо кількість агару в середовищі зменшиться, щоб уникнути сухості.

Мікрокультури

Для ідентифікації деяких ниткоподібних грибів необхідно проводити мікрокультури за допомогою агару Сабуро або інших спеціальних засобів для спостереження за структурами статевого та безстатевого розмноження.

У людській мікології

Його застосовують переважно для діагностики грибкових захворювань, особливо тих, що вражають шкіру та її прикріплення (волосся та нігті).

Зразками можуть бути виділення, ексудати, шкіра, волосся, нігті, мокрота, ЦНС або сеча. Поширеними збудниками хвороби є дерматофіти, грибки, які викликають підшкірні та системні мікози.

Мікологія тварин

Тварини часто уражаються грибковими інфекціями, тому агар Сабуро так само корисний у мікології тварин, як і у людини.

Наприклад, дерматофіти часто можуть вражати тварин. Так відбувається з Microsporum canis var distortum, який часто заражає собак, котів, коней, свиней та мавп. Так само Microsporum gypseum заражає собак, котів та худобу.

Птахи, такі як кури, півні та кури, уражаються Microsporum gallinae.

Інші грибки, такі як Zymonema farciminosum, також є причиною захворювання у тварин, головним чином коней, мулів та ослів, спричиняючи значне запалення в лімфатичних судинах.

Sporothrix schenkii та Histoplasma capsulatum вражають домашніх тварин та людей.

Екологічна мікологія

Багато хвороботворних або умовно-патогенних грибів можуть концентруватися в будь-який момент часу в певному середовищі, особливо в операційних та відділеннях інтенсивної терапії (КНС) поліклінік та лікарень. Тому необхідно контролювати їх.

Інші вразливі простори - це бібліотеки та старі будівлі, на які може впливати концентрація екологічних грибів.

У екологічних дослідженнях для виділення грибів використовується агар декстрози Сабуро.

Промислова мікологія

Дегазковий агар Сабуро не може бути відсутним для вивчення забруднюючих грибів у виробництві косметики, продуктів харчування, напоїв, шкіри, текстилю.

Мікологія рослин

Рослини також страждають від хвороб, спричинених грибками, що вражають різні частини рослини, що навіть може закінчити збір врожаю, спричиняючи великі втрати в сільському господарстві.

Список літератури

1. Cuenca M, Gadea I, Martín E, Pemán J, Pontón J, Rodríguez (2006). Мікробіологічна діагностика мікозів та дослідження протигрибкової чутливості. Рекомендації Іспанського товариства інфекційних хвороб та клінічної мікробіології. Доступно за адресою: coesant-seimc.org
2. ValteK Laboratory. (2009). Агар декстрози Сабуро з циклогексимідом. Доступно за адресою: andinamedica.com.
3. Наварро О. (2013). Ветеринарна мікологія. Національний аграрний університет. Нікарагуа.
4. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. 2009. Мікробіологічна діагностика Бейлі та Скотта. 12 ред. Аргентина. Редакція Panamericana SA
5. Казас-Рінкон Г. Загальна мікологія. 1994. Другий редактор Центрального університету Венесуели, бібліотечні видання. Каракас Венесуела.