Маннитол агар сіль або маніт сіль являє собою тверду середу селективної і диференціальної культури. Він був створений Чапманом для виділення патогенних грампозитивних коків, особливо золотистого стафілокока.
Однак корисно також виділити Staphylococus epidermidis, який іноді може бути присутнім як умовно-патогенний збудник, і Staphylococcus saprophyticus, визнаний збудник сечовиділення, серед інших видів.
A. Фіола з підготовленим солоним манітоловим агаровим середовищем. В. Солоні пластинки манітольного агару, засіяні бактеріальними штамами манітолу, що не ферментують, та неферментуючими. Джерело: A і B: Фотографії зроблені автором MSc. Маріельса Гіл.
Деякі ентерококи здатні рости на цьому середовищі, а також деякі грампозитивні спороутворюючі стрижні.
Цей засіб дуже корисний при аналізі клінічних зразків, але його також використовують у мікробіологічному дослідженні харчових продуктів та в контролі якості промислових продуктів, таких як косметика, медикаменти, серед інших.
Солоний манітоловий агар складається з екстрактів і пептонів з яловичини, триптеїну, манітолу, хлориду натрію, фенолу червоного та агару.
Основа
Аніт манітолу вибірковий завдяки високій концентрації солі. Солоність діє як гальмівна речовина і перешкоджає росту грамнегативних бактерій.
Він також диференційований завдяки наявності вуглеводного манітолу та фенольного червоного показника pH. Від цього бактерії, здатні бродити манітол, виробляють кислоти, підкислюючи середовище, перетворюючи колонії та середовище в жовтий колір.
З іншого боку, колонії, які не ферментують манітол, ростуть у середовищі, приймаючи поживні речовини, що забезпечуються екстрактами та пептонами м'яса та триптеїну. Звідти бактерії видобувають вуглець, азот, вітаміни та мінерали, необхідні для їх росту.
Колонії в цьому випадку можуть бути слабкими або сильно рожевими, а середовище залишається того ж кольору або змінюється на фуксію.
Агар - це речовина, яка забезпечує консистенцію середовища.
Підготовка
Для приготування літра солоного манітолового агару 111 г зневодненого середовища від бажаної комерційної компанії зважують і розчиняють в 1000 мл дистильованої води, використовуючи колбу.
Нагрівання застосовують при частому перемішуванні середовища для поліпшення процесу розчинення. Прокип’ятіть хвилину.
Колбу поміщають в автоклав при 121 ° С на 15 хвилин.
Після закінчення часу вийміть флакон з автоклава, дайте йому відпочити і подайте від 15 до 20 мл на стерильних чашках Петрі, коли температура становить приблизно від 50 до 55 ° C.
Дозволяється тверднути, замовляючи перевернутим способом у бляшки та зберігаючи в холодильнику до використання. Перш ніж посіяти зразок, дочекайтеся, коли плита досягне кімнатної температури.
Пластини висівають шляхом прошивання або поверхневого посіву дригальським шпателем. Кінцевий рН підготовленої середовища повинен бути 7,4 ± 0,2
Колір зневодненого середовища світло-бежевий, а колір підготовленого середовища - оранжево-червоний.
Програми
Завдяки високій селективності це середовище ідеально підходить для посіву зразків зі змішаною флорою, в яких потрібно шукати наявність золотистого стафілокока, як основного збудника цього роду.
У цьому сенсі одним з найчастіших його застосувань є мікробіологічний аналіз глоткового ексудату та зразків носових виділень, особливо для виявлення безсимптомних носіїв S. aureus.
Деякі країни застосували цей аналіз як обов'язкову вимогу для людей, які хочуть працювати постачальниками продуктів харчування.
Цей контроль запобігає прийняттю на роботу людей, які є переносниками S. aureus, тим самим уникаючи масових харчових отруєнь через споживання їжі, зараженої стафілококовим ентеротоксином.
Він також може бути включений в посів ранних інфекцій, культур крові, ЦНС, бронхоальвеолярного промивання, серед інших.
Солений манітольний агар корисний для повторної ізоляції колоній з культур сечі з агару CLED або агару крові, грам виявив грампозитивні коки в кластерах.
Це також справедливо в мікробіологічному аналізі продуктів харчування, питної води, ґрунтів, серед інших застосувань.
QA
Після того як партія тарілок з солоним манітоловим агаром готується, доцільно провести контроль якості. Контрольні штами висівають, щоб показати, чи є зростання чи ні.
Відомі штами золотистого стафілокока можна використовувати як позитивний контроль. Він повинен задовільно розвиватися жовтими колоніями, а середовище також виходить того ж кольору.
Так само зручно включати відомий штам Staphylococcus epidermidis. Він повинен задовільно розвиватися рожевими колоніями, а середовище залишається того ж кольору або темніє до сильніше рожевого.
В якості негативного контролю використовуються штами, які не повинні рости на цьому середовищі. Наприклад, можна вирощувати відомий штам Escherichia coli або Klebsiella pneumoniae. Очікуваний результат - повне гальмування, тобто не зростання.
Крім того, неінокульовану тарілку необхідно інкубувати. У ньому не повинно бути ні зростання, ні зміни кольору.
Важливо, щоб тарілка не використовувалася, якщо є ознаки погіршення, такі як забруднення, зневоднення, знебарвлення тощо.
Заключні думки
При використанні солоного манітолового агарового середовища слід враховувати деякі важливі аспекти:
- Одержання росту жовтих колоній не означає, що це золотистий стафілокок. Потрібно пам’ятати, що деякі штами ентерококу здатні рости в цьому середовищі і бродити манітол, а також певні спороутворюючі грампозитивні стрижні.
Тому важливо виконати грам на колонії та тест на каталазу.
З іншого боку, слід враховувати, що інші види стафілококів, крім ауреуса, також здатні бродити манітол. Тому важливо субкультуру колонії до живильного бульйону, щоб взяти звідти і провести тест на коагулазу.
Серед видів стафілокока клінічного значення для людини, які ферментують маніт, є: S. aureus, S. simulans, S. capitis ssp capitis, S. capitis ssp urealyticus, S. xylosus, S. cohnii ssp urealyticum, серед інших.
Інші можуть дати змінну реакцію, тобто іноді позитивну, а іноді негативну. Деякі - S. saprophyticus, S. haemolyticus, S. warneri, S. intermedius, серед інших.
-Не рекомендується брати колонії безпосередньо з манітольного агару для проведення тесту на коагулазу, оскільки висока концентрація солі в середовищі може перешкоджати результату.
-Зрештою, рекомендується інкубувати пластини, посіяні солоним манітолом, до 48 годин, оскільки деякі штами S. aureus можуть повільно бродити манітол, хоча це не дуже часто.
Список літератури
- Britannia Laboratories. Солоний манітоловий агар. 2015. Доступний за адресою: britanialab.com
- "Солоний манітоловий агар". Вікіпедія, Вільна енциклопедія. 31 жовтня 2018, 19:08 UTC. 17 січня 2019, 20:55, доступно за адресою: es.wikipedia.org.
- Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Мікробіологічна діагностика. (5-е видання). Аргентина, редакція Panamericana SA
- Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Мікробіологічна діагностика Бейлі та Скотта. 12 ред. Аргентина. Редакція Panamericana SA
- BD Laboratories. Сіль-агар BD манітолу. 2013. Доступний за адресою: bd.com.