АГАР САЛЬМОНЕЛИ-ШИГЕЛИ: ОБГРУНТУВАННЯ, ПІДГОТОВКА ТА ВИКОРИСТАННЯ - БІОЛОГІЯ - 2025

Агар сальмонела шигелла також відома як SS агар є селективної і диференціальної середовищем помірно, спеціально призначеним для ізоляції ентеропатогенних бактерій родів Salmonella і Shigella, як проби навколишнього середовища , таких як клінічні.

SS-агар має складний склад; Він складається з м'ясного екстракту, пептону, лактози, жовчних солей, цитрату натрію, тіосульфату натрію, цитрату заліза, агару, нейтральної червоної, яскраво-зеленої та дистильованої води. Враховуючи велику вибірковість, можна висівати зразки з рясною змішаною флорою.

SS агар з колоніями Salmonella sp. Джерело: Manurx27, з Wikimedia Commons

У лабораторіях мікробіології середовище сальмонели та шигел широко використовується для дослідження наявності сальмонел та шигел у зразках діареального стільця, стічних вод, питної води та їжі.

Іноді для відновлення штамів сальмонели доводиться використовувати відвари попереднього збагачення (лактозний бульйон) і збагачувальний відвар (селенітовий цистиновий відвар).

Ці кроки необхідні, коли підозрюється наявність сальмонели в дуже низькій кількості або коли штам може зловживати процесами, характерними для промислового виробництва, переважно переробленими продуктами харчування. Також доцільно збагатити зразки калу у пацієнтів, які пройшли лікування антибіотиками.

Згодом збагачений бульйон може бути посіяний на агар сальмонели-шигели та інші подібні носії, такі як ксилоза-агар, лізин-дезоксихолат (XLD) та кишковий агектоен-агар (ВІН).

Основа

Кожен компонент культурального середовища сальмонелла-шигелла має специфічну функцію, а суміш у цілому надає їй властивості, що характеризують його.

Живильна сила

Екстракт м’яса та пептон (засвоюються казеїном та тканиною тварин) забезпечують необхідні поживні речовини (нітрогени, вуглець та вітаміни) для розвитку мікроорганізмів, здатних переносити решту компонентів.

Послідовність

Агар-агар відповідає за забезпечення твердої консистенції середовища.

Вибірковий

Цей засіб є високоселективним, оскільки містить жовчні солі, цитрат натрію та яскраво-зелений колір. Тому він пригнічує ріст усіх грампозитивних бактерій і більшості грамнегативних бацил, включаючи деякі коліформи.

Хоча бактерії роду Salmonella та деякі штами Shigella підтримують ці сполуки.

В основному рід сальмонел дуже стійкий до жовчних солей, настільки, що вони здатні жити в жовчному міхурі деяких пацієнтів-носіїв, які постійно проливають бактерії в своєму стільці.

Диференціальний

Лактоза - це ферментований вуглевод, який допомагає диференціювати лактозоферментаційні штами від неферментуючих. Про цю властивість свідчить наявність показника рН, який у цій середовищі феноловий.

Лактозні ферментуючі штами дають червоні колонії, тоді як неферментуючі штами - безбарвні. Ця характеристика важлива, оскільки сальмонела та шигелла не ферментують лактозу.

З іншого боку, це середовище містить тіосульфат натрію як джерело сульфіду та цитрат заліза як джерело заліза. Обидва сполуки здатні диференціювати бактерії, здатні продукувати сірководень. Вони реагують з утворенням видимого нерозчинного осаду чорного сульфіду заліза.

Ця властивість є у деяких штамів роду Salmonella. Зазвичай їх колонії плоскі безбарвні з чорною крапкою в центрі. Решта сальмонел не виробляють H ₂ S і розвиваються як безбарвні колонії.

З іншого боку, колонії роду Shigella плоскі безбарвні без почорніння.

Підготовка

Готувати цей засіб дуже просто.

Зважте 63 г зневодненого комерційного середовища та розчиніть у літрі дистильованої води. Нагрійте розчин і перемішайте. Суміш може кипіти до хвилин.

Цей носій не повинен автоклавуватися. Після розчинення його подають безпосередньо на одиночні або подвійні стерильні тарілки.

Коли вони затвердіють, їх розташовують перевернутим на тромбоцити і зберігають у холодильнику (2-8 ° С) до використання.

Середовище після приготування повинно залишатися при pH 7,2 ± 0,2 і мати оранжево-червоний колір.

Важливо дати дозволити прогріватися пластинам перед висіванням зразків. Оригінальний зразок можна висівати безпосередньо, вивантажуючи матеріал на частину агару і потім протікаючи звідти.

У разі використання збагачених відварів пропустіть порцію селенітового відвару і сійте дригальським шпателем.

Інкубуйте при температурі 37 ° C протягом 24 годин при аеробіозі.

Майте на увазі, що кількість грамів, які слід зважити, та кінцевий рН середовища може змінюватись від комерційного будинку до іншого. Середня основа завжди містить показання до її приготування.

Використовуйте

Він часто використовується для аналізу культури стільця та мікробіологічного дослідження стічних вод, питної води та проб харчових продуктів.

Часто готують подвійні пластини, з одного боку розміщують агар сальмонели-шигелли, а з іншого агар XLD.

Обмеження

- Деякі штами шигел не ростуть у цьому середовищі. Тому не рекомендується для первинної ізоляції цього роду.

-Ні кожна прозора колонія з чорним центром не свідчить про сальмонели; Для правильної ідентифікації повинні бути проведені біохімічні випробування, оскільки колонії деяких штамів Proteus не відрізняються від сортів сальмонели.

-Зневодне середовище повинно дбати про вплив навколишнього середовища, оскільки воно дуже гігроскопічне. Тому його потрібно зберігати в сухому та добре закритому середовищі. Відкрито для дуже коротких періодів.

-З часом жовчні солі в середовищі можуть осідати, утворюючи зображення, схоже на килимок в межах агару, але це не впливає на результати.

- Деякі штами шигел можуть повільно бродити лактозу.

QA

Щоб довести, що середовище працює правильно, доцільно посадити відомі або сертифіковані контрольні штами та спостерігати, чи відповідає зростання очікуваним характеристикам.

Для цього можуть використовуватися штами E. coli, Enterobacter sp, Klebsiella pneumoniae, Shigella flexneri, Salmonella typhimurium або Enterococcus faecalis.

Очікувані результати:

Ентеробактер і Клебсіелла ------ великі колонії і червоні або рожеві мукоїди.

Shigella flexneri ---------- прозорі або безбарвні плоскі колонії.

Сальмонела тифімурій ------ безбарвні колонії з чорними центрами.

Enterococcus faecalis -------- загальне гальмування.

Список літератури

1. Лабораторії Difco Francisco Soria Melguizo. Агар-сальмонела-Шигелла. 2009. Доступний за адресою: f-soria.es
2. BD Лабораторія. BD Salmonella-Shigella Agar. 2013. Доступний за адресою: bd.com
3. Britannia Laboratories. Сальмонела-Шигелла агар. 2015. Доступний за адресою: britanialab.com
4. Валтекська діагностика. Сальмонела-Шигелла Агар (СС Агар). 2010. Доступно за адресою: andinamedica.com
5. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Мікробіологічна діагностика Бейлі та Скотта. 12 ред. Редакція Panamericana SA Аргентина.
6. Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Мікробіологічна діагностика. 5-е видання. Редакція Panamericana SA Аргентина.