СОЄВИЙ АГАР ТРИПТИКАСЕЇНУ: ОБГРУНТУВАННЯ, ПІДГОТОВКА ТА ВИКОРИСТАННЯ - БІОЛОГІЯ - 2025

Соєвий агар триптон або Trypticase соєвого агару є твердою культуральної середовищем, а також харчові неселективних. Він позначений літерами TSA за його абревіатурою англійською мовою Trypticase Soy Agar. До його складу входять триптейн, сопний пептон, хлорид натрію та агар-агар.

Завдяки високій живильній силі ідеально підходить для вирощування помірно вимогливих та невимогливих мікроорганізмів. Середовище без додаткових добавок не рекомендується для первинних культур, але це дуже корисно для субкультури чистих штамів та підтримання їх життєздатності серед інших цілей.

Триптикасеїнові клини соєвого агару в пробірках з бакелітовими ковпачками. Джерело: Фотографія, зроблена автором MSc. Маріельса Гіл.

Також цей агар служить базою для приготування збагаченого середовища, такого як кров'яний агар, особливо коли потрібно дотримуватися схеми гемолізу та встановлювати таксони оптохіну та бацитрацину, необхідні при діагностиці Streptococcus pneumoniae та Streptococcus pyogenes відповідно.

З іншого боку, у поєднанні з антибіотиками корисно виділяти клінічно важливі факультативні та суворі анаеробні мікроорганізми із зразків зі змішаною флорою.

Нарешті, склад соєвого агару триптикасеїну та його ефективність відповідають вимогам, встановленим різними фармакопеями (європейською, японською та північноамериканською).

Основа

Для правильного розвитку бактерій необхідна наявність запасів енергії, таких як амінокислоти, вітаміни, пуринові та піримідні основи.

У цьому сенсі триптейн та соєвий пептон забезпечують ці поживні речовини мікроорганізмами, тим самим забезпечуючи їх повноцінний розвиток. Однак для вибагливих бактерій необхідно доповнити цей агар дефібринованою кров’ю або прогрітою кров’ю для посилення його збагачення.

З іншого боку, якщо до середовища додавати антибіотики, він стає селективним середовищем. Також можна додати 0,6% екстракту дріжджів для сприяння виділенню видів роду Listeria, тоді як додавання цистинового телуриту та крові ягняти ідеально підходить для Corynebacterium diphteriae.

Нарешті, хлорид натрію забезпечує осмотичний баланс середовища, а агар забезпечує тверду консистенцію.

Підготовка

Пластини соєвого агару триптикасеїну

Для приготування триптикасеїнового соєвого агару в цифровому масштабі необхідно зважити 40 г зневодненого комерційного середовища. Його розчиняють в одному літрі дистильованої води, що міститься в колбі.

Суміш залишають відпочивати на 5 хвилин, після чого її відводять до джерела тепла, щоб допомогти розчинити середовище. Його слід часто перемішувати і кип’ятити протягом 1 - 2 хвилин. Згодом середовище стерилізують в автоклаві при 121 ° С протягом 15 хвилин.

Дайте охолонути до 50 ° C і розподіліть у стерильний посуд Петрі. Дайте твердіти, перевернути, замовити в бляшках і зберігати в холодильнику.

Кінцевий рН середовища повинен бути 7,3 ± 0,2.

Слід зазначити, що колір зневодненого культурального середовища світло-бежевий і його слід зберігати при температурі від 10 до 35 ° C у сухому місці.

Зі свого боку підготовлений агар світло-бурштинового кольору. Підготовлені тарілки слід зберігати в холодильнику (2-8 ° C) до використання.

Плити перед використанням повинні досягати кімнатної температури.

Планшети соєвого агару триптикасеїну, доповнені кров’ю

Кров'яний агар готують додаванням 5% дефібринованої крові під час охолодження триптикасеїнового соєвого агару до 50 ° C. Суміш гомогенізують обертанням легкими рухами.

Подавати в стерильному посуді Петрі. Середній колір повинен бути вишнево-червоним.

Планшети соєвого агару триптикасеїну, доповнені прогрітою кров’ю

Щоб приготувати кров'яний агар на основі TSA, виконайте те ж саме, що і описані вище процедури, але, залишаючи автоклав, його залишають відпочивати, поки температура середовища не буде приблизно від 56 до 70 ° C. У цей час кров поміщається і перемішується, поки середовище не стане коричневою.

Подавати в стерильному посуді Петрі. Колір середовища - шоколадно-коричневий.

Кліни соєвого агару триптикасеїну

Процедура приготування агару така ж, як описана для тарілок, з тією різницею, що замість подачі середовища на чашки Петрі вона розподіляється між 10-12 мл в тубах з бакелітовими кришками перед стерилізацією.

Згодом пробірки автоклавують при 121 ° С протягом 15 хвилин. Коли вони виїжджають, їх схиляють за допомогою опори і дозволяють затвердіти.

Підготовлені клини висіваються за площею поверхні і служать для збереження життєздатності певних мікроорганізмів протягом певного часу.

Програми

Триптикасеїн соєвий агар застосовується в таких випадках:

-Як є основою для приготування класичного агару крові, який використовується звичайно в більшості лабораторій.

-Ізоляція вимогливих бактерій.

-Спостереження за схемою гемолізу.

-Виконання діагностичних тестів.

-В якості основи готують спеціальний агар крові для Corynebacterium diphteriae, з цистиновим телуритом та ягнячою кров’ю.

-В якості основи готують ягнячий агар з крові, а також канаміцин-ванкоміцин для росту анаеробів, особливо Bacteroides sp.

- Для утримання не вимогливих штамів (Bacterioteca).

- кількість аеробних мікробів при дослідженні мікробної межі води, навколишнього середовища, продуктів харчування та косметичних проб.

Посіяно

Зразки можна висівати безпосередньо на поверхню триптікасеїну соєвого агару, доповненого кров’ю або іншими добавками. Її сіють виснаженням.

Тоді як триптикасеїнові пластини соєвого агару без добавок зазвичай використовують для субкультури мікробних штамів (бактерій або дріжджів).

QA

Контроль стерильності

Для перевірки стерильності різних середовищ, приготованих за допомогою триптікасеїну соєвого агару, рекомендується зробити наступне: з кожної підготовленої партії 1 або 2 неінокульованих пластини або пробірки слід інкубувати при 37 ° С протягом 24 годин, щоб продемонструвати їх стерильність. У всіх випадках він повинен залишатися без зростання.

Якщо забруднення виявлено, всю партію потрібно викинути.

Контроль росту

Наступні бактеріальні штами можуть бути використані для вивчення правильної роботи триптикасеїнового соєвого агару: Escherichia coli ATCC 8739, Staphylococcus aureus ATCC 6538, Pseudomonas aerugiosa ATCC 9027 та Enterococcus faecalis ATCC 29212.

Штам висівають і інкубують аеробним шляхом при 37 ° С протягом 24 годин.

У всіх випадках зростання повинен бути задовільним.

Також можна використовувати такі гриби, як Candida albicans Complex ATCC 10231 та Aspergillus niger ATCC 16404. Гарне зростання очікується для обох штамів.

Контроль росту та гемоліз схеми триптікасеїнового соєвого агару з кров'ю

Для перевірки правильного функціонування агару крові, приготованого на цій основі, можна використовувати такі штами: Streptococcus pyogenes ATCC 19615, Streptococcus pneumoniae ATCC 6305 та Streptococcus pneumoniae ATCC 49619.

Їх висівають і інкубують при 37 ° С в мікроаерофільності протягом 24 годин.

У всіх випадках зростання повинен бути задовільним, беручи до уваги, що бета-гемоліз (легкий ореол навколо колонії) слід спостерігати при S. pyogenes, а альфа-гемоліз (зеленуватий ореол навколо колонії) слід спостерігати в обох штамах S. pneumoniae. колонії).

Список літератури

1. Автори Вікіпедії Триптиказа Я агар. Вікіпедія, Вільна енциклопедія. 17 грудня 2018 р., 15:47 UTC. Доступно за адресою: https://en.wikipedia.org
2. Britannia Laboratories. Трипін соєвий агар. 2015. Доступний за адресою: britanialab.com
3. Неогенні лабораторії. Соєвий агар триптичний. Доступно за адресою: foodsafety.neogen.com
4. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Мікробіологічна діагностика Бейлі та Скотта. 12 ред. Аргентина. Редакція Panamericana SA
5. BD Laboratories. Триптиказа Я Агар. 2014. Доступний за адресою: .bd.com