Агар ТХБА є засобом високої селективності і диференціальної твердої культури, використовуваним для виділення і культивування бактерій роду Vibrio, особливо холерного вібріон, В. parahaemolyticus і В. vulnificus в якості основних збудників такого роду.
TCBS в абревіатурі означає тиосульфат цитратної жовчної цукрози. Цей агар також відомий як селективне середовище для вібріосів. Оригінальна формула була створена Наканіші, а згодом модифікована Кобаяші.
Комерційна середовище TCBS та планшет агару TCBS, засіяні холери Vibrio. Джерело: фото 1: зроблено автором MSc. Маріельса Гіл / Фото 2: Microrao, JJMMC, Davangere, Карнатака, Індія
До його складу входять екстракт дріжджів, м'ясний пептон, трипштейн, цитрат натрію, тіосульфат натрію, жовчна жовч, сахароза, хлорид натрію, цитрат заліза, бромотимол синій, тимол блакитний та агар.
Цей склад дозволяє адекватно розвивати види Vibrio із зразків води, їжі та калу; за винятком Vibrio hollisae, який не росте на цьому середовищі. Крім того, середовище TCBS здатне пригнічувати ріст інших супутніх бактерій, особливо коліформ.
Через серйозні шлунково-кишкові та позакишкові проблеми, спричинені деякими видами роду Vibrio, його діагностика є дуже важливою. Люди заражаються в основному, вживаючи в їжу сиру або непріп’ячену їжу з моря або забруднених вод, але також через ранну інфекцію.
Через це клінічні лабораторії повинні включати агар TCBS у дослідження культури стільців зразків рідкого стільця, особливо з появою рисової води. Особливо, якщо пацієнт повідомляє, що контактував з морською водою або вживав молюсків або рибу.
Основа
Дріжджовий екстракт, м'ясні пептони та трипін - джерело живлення цього середовища. Однак агар TCBS є негостинним середовищем для більшості бактерій.
Її висока селективність надається додаванням цитрату натрію та жовчної жовчі; обидва є інгібіторними агентами, які також забезпечують лужний рН середовища, обмежуючи ріст супутньої флори та сприяючи зростанню V. cholerae, серед інших видів. Слід зазначити, що холер вібріо дуже чутливий до кислотності.
Зі свого боку хлорид натрію осмотично врівноважує середовище. Крім того, оскільки його концентрація висока, вона також діє як гальмівний засіб, сприяючи зростанню галофільних бактерій.
Сахароза - це ферментований цукор, який разом з показниками рН бромотимолу синього та тимолового синього надають середовищу його диференціальний характер. З цієї причини за допомогою цього середовища можна диференціювати штамми бродіння сахарози від неферментуючих.
Колонії штамів бродіння сахарози розвиваються жовтого кольору і перетворюватимуть середовище із зеленого на жовтий завдяки виробництву кислоти. Неферментери росте напівпрозорими, а середовище залишається первинним кольором (зеленим).
Так само це середовище містить тіосульфат натрію як джерело сірки та цитрат заліза як розвиваючий засіб. Обидва виявляють бактерії, здатні виробляти сірководень (безбарвний газ). H 2 S утворюється з тіосульфату і згодом при взаємодії з цитратом заліза утворюється видимий чорний осад.
Нарешті, агар - це те, що забезпечує тверду консистенцію середовища.
Підготовка
Зважте 89 г зневодненого середовища і розчиніть в одному літрі дистильованої води. Допоможе розчинення за допомогою нагрівання та частого перемішування. Суміш можна кип’ятити до 2 хвилин.
Цей засіб не є автоклавним. Після розчинення його подають безпосередньо на стерильних тарілках. Коли вони затвердіють, їх розташовують перевернутим на тромбоцити і зберігають у холодильнику (2-8 ° С) до використання.
Середовище після приготування повинно залишатися при pH 8,6 ± 0,2.
Колір зневодненого середовища світло-бежевий або зеленувато-бежевий, а колір середовища лісовий або синювато-зелений.
Важливо дати дозволити прогріватися пластинам перед висіванням зразків.
Використовуйте
Найпоширенішим зразком для виділення вібріосу є діарейний стілець.
Зразки табуретів, якщо їх не можна негайно висіяти на селективний носій, слід транспортувати на середовищі Кері Блера.
Для підвищення чутливості культури фекалії можна пропускати через пептонну воду при рН 8,4 як середовище для збагачення протягом максимум 8 годин, звідти її культивують на середовище TCBS.
Слід також враховувати, що деякі штами вібріонів можуть викликати септицемію у хворих на імуносупресію, тому їх можна виділити з культур крові. Так само зразки води та їжі з моря можуть бути проаналізовані, коли є епідемічні спалахи захворювання на холеру.
Посіяно
Інокулянт досліджуваного зразка повинен бути видатним, посів проводиться методом відшарування шляхом виснаження. Пластинки інкубують при температурі 37 ° С протягом 24 годин при аеробіозі.
Припущенні колонії холер вібріо середнього розміру, гладкі, непрозорі, з тонкими бордюрами та жовтого кольору за рахунок бродіння сахарози.
Подібним чином ростуть види V. alginolyticus, V. fluvialis, V. hareyi, V. cincinnatiensis, V. furnissii, V. metschnikovii та деякі V. vulnificus. Інші клінічно важливі види вібріонів, такі як V. parahaemolyticus, не ферментують сахарозу, розвиваючись як оливково-зелені колонії.
Пластинка агару TCBS, засіяна Vibrio parahaemolyticus. Джерело: isis325 Flickr
З іншого боку, слід враховувати, що деякі штами аеромонасів та плесімомонасів, які є оксидазою (+), можуть рости в цьому середовищі, розвиваючи жовті колонії, що можуть збити з пантелику клініциста. У той час як деякі штами Pseudomonas також оксидази (+) ростуть як зелені колонії, як V. parahaemolyticus.
Обмеження
Тест на оксидазу, який є позитивним для роду Vibrio, ніколи не повинен проводитися з колоній, отриманих з агару TCBS, оскільки отриманий результат буде помилковим негативом. З'єднання в середині сильно заважають цьому тесту. Тому його потрібно виготовляти з субкультур на агарі крові.
QA
Щоб довести, що середовище знаходиться в належному стані, доцільно посіяти відомі або сертифіковані контрольні штами та спостерігати, чи зростання відповідає очікуваним характеристикам.
Для цього можна використовувати штами:
-Вібріо-холери - задовільний ріст (жовті колонії, напівпрозорі межі).
-Vibrio parahaemolyticus - - задовільний ріст (колонія із зеленим центром та напівпрозорою межею).
-Vibrio alginolyticus ATCC 17749 - задовільний ріст (жовті колонії з ореолами одного кольору навколо колонії).
-Enterococcus faecalis ATCC 29212 - повне або часткове гальмування (невеликі жовті або напівпрозорі колонії).
-Pseudomonas aeruginosa ATCC 27853- - часткове або повне гальмування (сині колонії).
-Escherichia coli ATCC 25922 - повністю гальмується.
-Proteus mirabilis ATCC 43071 -– Повне або часткове гальмування. (Маленькі колонії зеленого напівпрозорого кордону)
Інкубація неінокульованого середовища повинна бути незмінною.
Список літератури
- Лабораторії Difco Francisco Soria Melguizo. TCBS агар. 2009. Доступний за адресою: f-soria.es
- BD Лабораторія. BD. TCBS Agar 2003. Доступний за адресою: bd.com
- Britannia Laboratories. TCBS середній. 2015. Доступний за адресою: britanialab.com
- Лабораторії акумедії. TCBS Agar. 2016. Доступний за адресою: foodsafety.neogen.com
- Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Мікробіологічна діагностика Бейлі та Скотта. 12 ред. Редакція Panamericana SA Аргентина.
- Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Мікробіологічна діагностика. 5-е видання. Редакція Panamericana SA Аргентина.