THAYER MARTIN AGAR: ОСНОВА, ПІДГОТОВКА ТА ВИКОРИСТАННЯ - БІОЛОГІЯ - 2025

Агар Thayer Мартіна це дуже живильна і тверда селективна середовище для виділення менінгококів і гонококів; обидва відомі як патогенні або клінічно важливі нейссерії.

Однією з найважливіших особливих характеристик Thayer Martin Agar є його високий вміст харчових добавок. Ця властивість є важливою, оскільки нейссерії є дуже вимогливими мікроорганізмами з поживної точки зору і тому не ростуть у загальних середовищах.

Thayer Martin / Agar Thayer Martin середовище бізнесу. Зображення джерела 1: Зроблено автором MSc. Маріельса Гіл, зображення 2. Pixinio.com бактерії, колонізовані, модифіковані, Thayer, Martin, агар.

З іншого боку, оскільки ці мікроорганізми зазвичай знаходяться в нестерильних районах, додавання інгібіторів необхідно для запобігання росту супутньої флори, не впливаючи на розвиток роду Neisseria.

Цей агар складається з базового агару GC, гемоглобіну, додаткових харчових добавок та комплексу інгібіторних речовин (антибіотиків та протигрибкових препаратів). Комерційні будинки продають кожну добавку окремо.

Зразок, який буде висіяти в цьому середовищі, буде залежати від мікроорганізму, який шукають. Для Neisseria gonorrhoeae ідеальними зразками є вагінальний та уретральний секрети. У той час як для Neisseria meningitidis найбільш використовувані зразки - це CSF, глотковий та носоглотковий ексудат.

Основа

Нейсерії - це мікроорганізми, які класифікуються як дратівливі, і тому їх виділення утруднене. Тому Thayer Martín є складним середовищем, і кожен з його компонентів виконує функцію, пояснену нижче:

GC-агар

Агар GC містить протеозовий пептон, кукурудзяний крохмаль, натрію хлорид, двоталій фосфат, монокалієвий фосфат та агар-агар. Його компоненти забезпечують основні поживні речовини для розвитку мікробів, нейтралізують токсичні жирні кислоти, допомагають підтримувати осмотичний баланс, визначають рН і надають твердій консистенції середовища.

Гемоглобін

Гемоглобін забезпечує фактори V та X (нікотинамід-аденінудинуклеотид НАД та гемін відповідно). З цієї причини в цьому середовищі також ростуть види гемофілу. Гемоглобін можна отримувати комерційно у зневодненій формі або до середовища додавати свіжу дефібриновану бичачу кров.

Доповнення для збагачення

З іншого боку, добавку для збагачення необхідно також додавати в середовище Таєра-Мартіна, оскільки поживні речовини, що містяться в базовому агарі, недостатньо для потреб роду Neisseria.

Найпоширеніша добавка для збагачення називається ізовіталекс. Він містить глютамін, аденін, НАД, кокарбоксилазу, гуанін, нітрат заліза, р-амінобензойну кислоту, вітамін В12, тіамін та глюкозу. Всі ці сполуки необхідні для правильного розвитку хвороботворних Нейссерій.

Інгібітори

Оскільки це дуже живильне середовище, слід застосовувати інгібітори, які перешкоджають зростанню мікроорганізмів зі звичної флори місцевості та, таким чином, сприяють виділенню роду Neisseria.

Інгібіторний комплекс складається з ванкоміцину, колістину та ністатину. Ванкоміцин пригнічує ріст грампозитивних бактерій, колістин перешкоджає зростанню грамнегативних бактерій, таких як псевдомонас та деякі сапрофітні нейссерії, а ністатин діє на дріжджі, такі як Candida albicans.

Однак пізніше модифікували Таєра Мартіна Агара; зміни полягали у додаванні триметоприму, збільшенні кількості агару та додаванні зайвої глюкози. Ці зміни значно покращили відновлення видів Neisseria gonorrhoeae.

Слід зазначити, що триметоприм гальмує ріст роду Proteus та його послідовне утворення рою. У цьому сенсі саме антибіотики надають селективний характер середовищу Thayer Martin.

Підготовка

Оригінальний агар Thayer Martin

-GC агар

Зважують 8,2 г зневодненого середовища GC і суспендують у 100 мл. Змішайте і кип’ятіть 1 хвилину при частому помішуванні, щоб повністю розчинитися. Стерилізуйте суміш в автоклаві при 121 ° С протягом 15 хвилин.

- 2% гемоглобіну

Суспендуйте 2 г зневодненого гемоглобіну в 2 або 3 мл гарячої дистильованої води до утворення рівномірної суміші. Додайте потроху води, щоб добути об’єм 100 мл. Суспензія перед стерилізацією повинна бути однорідною.

Стерилізуйте в автоклаві протягом 15 хвилин.

-Добавка на збагачення

Розмістіть комерційний флакон розріджувачем, наданим тією ж комерційною компанією. Добре перемішайте. Кількість використовуваного розчинника буде вказана в інструкції до комплекту.

- добавка для інгібування VCN (ванкоміцин, колістин, ністатин)

Розтворіть флакон з розріджувачем, який надає комерційна компанія. Добре перемішайте. Кількість використовуваного розчинника буде вказана в інструкції до комплекту.

-Підготовлено

На кожні 100 мл агарину GC діють наступним чином:

Коли агар GC покине автоклав, дайте йому охолонути до температури приблизно 50 ° C і додайте 2 мл приготованого розчину гемоглобіну, 2 мл добавки для збагачення (ізобіталекс або бриталекс) та 2 мл добавки для інгібування. Змішайте і подайте в стерильний чашки Петрі.

Дайте твердіти і зберігайте в холодильнику до використання.

Колір підготовленого середовища - вишнево-червоний. Кінцевий pH середовища 7,2 ± 0,2

Модифікований агар Thayer Martin

Зважують 8,2 г зневодненого середовища GC і суспендують у 100 мл. Додайте 1 г агар-агару і додайте 0,3 г глюкози. Змішайте і кип’ятіть 1 хвилину при частому помішуванні, щоб повністю розчинитися. Стерилізуйте суміш в автоклаві при 121 ° С протягом 15 хвилин.

Приготуйте добавку для збагачення гемоглобіну та збагачення, як описано раніше.

Використовується супресивна добавка - ВКНТ (ванкоміцин, колістин, ністатин, триметоприм).

-Підготовлено

Пройдіть так, як описано для оригінального агару Thayer Martin.

Використовуйте

Таєру Мартіну Агару слід дати прогрітися до того, як зразки будуть прокреслені. Найчастіше використовуються зразки глотки, тампони для носа, виділення з піхви, уретри та / або прямої кишки та ССЗ.

Використовуйте свіжі зразки і робіть сильні прищепи на агарі. Зразки висівають безпосередньо шляхом викиду матеріалу, а потім виснаження наноситься на поверхню.

Пластини інкубують при 35-37 ° С протягом 24 - 48 годин у мікроаерофільній банці (5% CO ₂ ). Після закінчення часу інкубації планшети досліджують на невеликі, сірі та інколи мукоїдні на вигляд колонії.

Виконують грам та підтверджуючі біохімічні тести на підозрілих колоніях.

QA

Наступні мікробні штами можуть бути використані для контролю якості Thayer Martin Agar.

Neisseria gonorrhoeae ATCC 49226 та Neisseria meningitidis ATCC 13090; очікується задовільний розвиток обох штамів.

Слід також включити такі штами: Staphylococcus epidermidis ATCC 14990, Escherichia coli ATCC 25922, Proteus mirabilis ATCC 43071 та Candida albicans ATCC 10231. У всіх них очікується повне або часткове гальмування в цьому середовищі.

Обмеження

-Ми повинні мати на увазі, що бактерії, стійкі до застосовуваних інгібіторів, можуть рости в середовищі.

-Є штами Neisseria gonorrhoeae, які можуть бути чутливими до концентрації використовуваного ванкоміцину. З цієї причини рекомендується використовувати шоколадний агар, доповнений ізовіталекс, але без інгібіторів.

-Є резистентні до ністатину штами дріжджів, які можуть рости в цьому середовищі і перешкоджати виділенню патогенних нейссерій, особливо гонококів.

Список літератури

1. Діагностичні лабораторії Valtek. Thayer-Martin Agar. 2016. Доступний за адресою: ком
2. Britannia Laboratories. Thayer Martin Середній модифікований. 2010. Доступний за адресою: britanialab.com
3. Автори Вікіпедії Тагар-Мартін-агар. Вікіпедія, Вільна енциклопедія. 26 жовтня 2017 р., 16:33 UTC. Доступно за адресою: wikipedia.org 4. Доступно 28 лютого 2019 року.
4. Britannia Laboratories. GC агар. 2010. Доступний за адресою: britanialab.com.
5. Лабораторії BBL ™ середнього збагачення для чутливих мікроорганізмів. 1999. Доступно на: bd.com
6. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Мікробіологічна діагностика Бейлі та Скотта. 12 ред. Редакція Panamericana SA Аргентина.