ЯСКРАВО-ЗЕЛЕНИЙ АГАР: ОБГРУНТУВАННЯ, ПІДГОТОВКА ТА ВИКОРИСТАННЯ - БІОЛОГІЯ - 2025

Діамантовий зелений агар є твердою культурального середовища з високим ступенем селективності. Він використовується виключно для виділення штамів роду Salmonella, однак є деякі винятки, наприклад, тифи та паратифи, які не ростуть на цьому середовищі.

Пошуки роду Salmonella часті у зразках стільця, води чи їжі. У цьому сенсі цей засіб може бути дуже корисним. Цей агар був створений у 1925 році Крістенсеном, Лестером та Юргенсом, пізніше його модифікував Кауфманн.

Яскраво-зелений агар. Колонії бродіння і ферментації відповідно. Джерело: Виставка MJ Richardson / Невидимі світи - 2012geograph.org.uk/photo/2815842 Ліцензія Creative Commons.

До його складу входять плюрипептони з пептичного дайджесту тканини тваринного походження та підшлункова залоза казеїну, він також містить дріжджовий екстракт, хлорид натрію, лактозу, сахарозу, фенол червоний, яскраво-зелений та агар-агар.

Він характеризується тим, що для більшості бактерій є досить негостинним середовищем, що сприяє зростанню сальмонели, однак деякі коліформи здатні в ньому існувати, розвиваючись слабко.

Важливо зауважити, що рід шигел не росте на цьому середовищі, а також Salmonella typhimurium, ні сальмонели паратифи. Тому, якщо ви хочете виділити ці мікроорганізми, слід застосовувати інші середовища, наприклад агар XLD, серед інших.

Основа

Яскраво-зелений агар

Кожен з компонентів, що входять до складу середовища, виконує певну функцію, яка визначає характеристики та властивості агару.

Плурипептони та дріжджовий екстракт є джерелом поживних речовин, з яких мікроорганізми беруть необхідний для їх розвитку азот та мінерали. Лактоза та сахароза є джерелами енергії для мікроорганізмів, які здатні їх бродити.

Яскраво-зелений колір - це гальмівна речовина, яка перешкоджає росту грампозитивних бактерій та великої кількості грамнегативних мікроорганізмів.

Хлорид натрію забезпечує осмотичну стабільність середовища. Хоча фенол червоний - показник рН, він виявляється кольоровим при виявленні виробництва кислоти з вуглеводного бродіння.

На цьому середовищі ростуть неферментуючі колонії лактози та сахарози рожевого або прозорого білого кольору, на червоному тлі. Наприклад, бактерії роду Salmonella.

У той час як бактерії, що ферментують лактозу або сахарозу, здатні рости на цьому середовищі, розвиваються жовто-зелені або жовто-зелені колонії на зеленувато-жовтому тлі. Наприклад, кишкова паличка та Klebsiella pneumoniae.

Варіанти яскраво-зеленого агару (BGA)

Є й інші варіанти яскраво-зеленого агару; Новобіоцин Блискучий зелений глюкоза (NBG) Агар та Novobiocin Блискучий зелений гліцерин лактоза (NBGL) Агар.

Новобіоцин Яскравий зелений глюкозний агар

Містить триптиказа соєвий агар, цитрат амонію залізо, пентагідрат тіосульфату натрію, фенол червоний, глюкозу, яскраво-зелену, новобіоцин та дистильовану воду.

Застосовується для виділення колоній сальмонел із зразків калу.

У цьому випадку яскраво-зелений та новобіоцин є гальмівними речовинами, що перешкоджають росту грампозитивних бактерій та деяких грамнегативних мікроорганізмів.

Тиосульфат натрію є джерелом сульфіду, а цитрат заліза - джерело заліза, необхідне для виявлення виробництва сірководню через утворення осаду чорного сульфіду заліза.

Глюкоза - це ферментований вуглевод, а фенол червоний - показник рН.

На цьому середовищі колонії сальмонели розвиваються великими з чорним центром, оточеним червонуватим ореолом, а потім чітко видимою областю. Деякі штами Citrobacter freundii утворюють колонії, ідентичні сорту Salmonella.

Новобіоцин Блискучий зелений гліцерин-лактоза-агар (NBGL)

Це середовище містить соєвий агар триптикази, цитрат амонію заліза, тіосульфат натрію, лактозу, гліцерин, яскраво-зелений, новобіоцин та дистильовану воду.

Відмінність цього середовища від попереднього полягає в тому, що глюкоза заміщена лактозою, а гліцерин і фенол червоний не використовуються.

Середовище також використовується для виділення видів сальмонел, колонії розвиваються чорними, завдяки виробництву сірководню.

Тільки колонії, які не виробляють кислоту з гліцерину або лактози, досягають достатньої продукції H ₂ S, оскільки низький рівень pH перешкоджає утворенню H ₂ S. Це призводить до безбарвних колоній для більшості видів Протей і Цитробактер.

Підготовка

-Взважте 58 грам комерційно отриманого зневодненого середовища. Додайте його в літр води, що перекидається. Перемішайте, дайте настоятися кілька хвилин і поставте суміш на джерело тепла до повного розчинення.

-Автоклав при 121 ° С протягом 15 хвилин, не перевищуйте час стерилізації.

-Дайте йому відпочити і подавайте, поки гаряче, в стерильному чашках Петрі. Кінцевий pH повинен бути 6,9 ± 0,2.

-Дайте затвердіти і зберігайте в холодильнику до використання. Перед посівом тарілки слід прийняти кімнатну температуру.

-Порошкове середовище має зелений колір і підготовлений колір приймає оранжево-коричневий або червонувато-зелений колір, залежно від рН та комерційної компанії. Дуже коричневий колір свідчить про те, що агар був перегрітий.

-Після затвердіння агару його не рекомендується переробляти, оскільки середовище погіршується.

Використання / застосування

Цей засіб використовується для пошуку штамів роду Salmonella із зразків калу та молочної їжі.

Оскільки це досить негостинне середовище, доцільно посіяти рясний прищеп, якщо використовується прямий зразок. В іншому випадку перед посівом у це середовище слід здійснити попереднє збагачення та збагачення зразків.

Оскільки деякі штами сальмонели гальмуються або ростуть з труднощами, доцільно супроводжувати це середовище іншим селективним агаром для сальмонели.

Кожна колонія з типовою характеристикою сальмонели повинна бути піддана біохімічним тестам для її остаточної ідентифікації.

QA

Щоб перевірити хороші показники яскраво-зеленого агарового середовища, штами АТСС можна використовувати для спостереження за їх розвитком на ньому.

Найчастішими штамами, які використовуються для контролю якості, є: Salmonella enteritidis ATCC 13076, Salmonella typhimurium ATCC 14028, Proteus mirabilis ATCC 43071, Klebsiella pneumoniae ATCC 700603, Escherichia coli ATCC 25922, Shigella flexneri ATCC 12022, Staphylococcus aureus ATCC 12022.

Перші 3 повинні давати рожеві або прозорі білі колонії на червоному тлі. Сальмонела з хорошим розвитком і протей з невеликим або регулярним зростанням.

Для Klebsiella та Escherichia очікуються жовто-зелені колонії з жовтим фоном, а у випадку шигел та стафілококів їх слід гальмувати.

Зневоднене середовище необхідно зберігати при кімнатній температурі, в сухому місці, оскільки середовище дуже гігроскопічне.

Список літератури

1. Laboratorio Difco Francisco Soria Melguizo SA Блискучий зелений агар. 2009 рік
2. Британія. Яскравий зелений агар. 2015 рік.
3. BD Лабораторія. BD Блискучий зелений агар. 2013 рік.
4. Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Мікробіологічна діагностика. (5-е видання). Аргентина, редакція Panamericana SA
5. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. 2009. Мікробіологічна діагностика Бейлі та Скотта. 12 ред. Аргентина. Редакція Panamericana SA