АГАР ФОГЕЛЯ-ДЖОНСОНА: ОБГРУНТУВАННЯ, ПІДГОТОВКА ТА ВИКОРИСТАННЯ - БІОЛОГІЯ - 2025

Агар-Vogel Джонсон є твердою середовищем селективної і диференціальна культурою, спеціально розробленої для виділення золотистого стафілокока. Цей засіб було створено Вогелем та Джонсоном у 1960 році з модифікації теларитового гліцинового агару, сформульованої у 1955 році Зебовіцем, Евансом та Нівеном.

Модифікація полягала у збільшенні концентрації манітолу, присутнього в середовищі, та включенні показника рН. Поточна формула складається з триптеїну, екстракту дріжджів, маніту, фосфату калію, хлориду літію, гліцину, фенолу червоного, агару, 1% розчину телуриту калію та води.

Джерело: Pixinio.com/Laboratorio de la Clínica ProcreaTec. Flickr.

Слід зазначити, що існують і інші засоби, які, як і агар Фогеля-Джонсона, є виборчими для виділення S. aureus, такі як солоний манітоловий агар та агар Бейрд Паркер. У цьому сенсі можна сказати, що основою агару Фогеля-Джонсона є суміш між солоним манітоловим агаром та агаром Бейрда Паркера.

По-перше, колонії S. aureus розрізняють заквашуванням маніту та перетворенням показника pH на жовтий. З іншого боку, у другому для S. aureus характерно відновлення телуриту до телуру і формування сірих до чорних колоній. Обидві властивості спостерігаються в агарі Вогеля-Джонсона.

Цей засіб, як і його аналоги, корисний для виявлення золотистого стафілокока в пробах їжі, санітарному контролі промислової продукції та в клінічних зразках.

Основа

Поставка поживних речовин

Середовище Фогеля-Джонсона містить екстракт триптеїну та дріжджів; Обидві речовини забезпечують довголанцюгові амінокислоти, які служать джерелами вуглецю та азоту, необхідних для росту бактерій. Бактерії, здатні рости в цьому середовищі, будуть брати поживні речовини з цих речовин.

Вибіркова сила

Агар Фогеля-Джонсона здатний пригнічувати ріст грамнегативних бактерій і навіть деяких грампозитивних бактерій, сприяючи розвитку коагулаз-позитивних стафілококів. Інгібуючими речовинами є телурит калію, хлорид літію та гліцин.

Диференціальна потужність

Речовини, що утворюють це диференційоване середовище, - манітол та телурит калію. Манітол - це вуглевод, і при його ферментації утворюються кислоти, які роблять середовище перетворюватися з червоного в жовтий, що відбувається завдяки наявності показника pH червоного фенолу.

Тоді як безбарвний телурит, коли він зводиться до вільного металевого телуру, приймає темно-сірий до чорного кольору.

Staphylococcus aureus бродить манітол і знижує телурит до телуру. З цієї причини типові колонії S. aureus у цьому середовищі сірі або чорні, оточені жовтим середовищем.

Бактерії, що ростуть у цій середовищі і не зменшують телурит або ферментований манітол, утворять прозорі колонії, оточені середовищем червоного кольору, ще більш інтенсивним, ніж вихідний колір, через лугання середовища за допомогою пептонів.

З іншого боку, бактерії, які знижують телурит, але не ферментують манітол, будуть рости як сірі або чорні колонії, оточені глибоким червоним середовищем.

Якби середовище готували без додавання телуриту калію, колонії S. aureus розвивалися б як жовті колонії, оточені жовтим середовищем, як у солоному манітольному агарі.

Осмотичний баланс і затверджувач

Фосфат двоталію підтримує осмотичний баланс середовища та регулює рН до нейтралітету 7,2. Тоді як агар надає тверду консистенцію культуральному середовищу.

Підготовка

Розчин телуриту калію 1% мас. / Об

Цей розчин не входить до зневодненого середовища, оскільки його не можна стерилізувати в автоклаві. З цієї причини його готують окремо і додають до вже стерилізованого середовища.

Деякі комерційні будинки продають готовий до вживання 1% розчин телуриту калію. Якщо ви хочете підготуватися в лабораторії, дійте так:

Відважте 1,0 г телуриту калію і відміряйте 100 мл дистильованої води. Розчиніть телурит калію в частині води, а потім доведіть кількість води до досягнення 100 мл. Стерилізувати розчин методом фільтрації.

Середня агарна база Вогеля-Джонсона

Зважте 60 г зневодненого середовища і розчиніть в 1 літрі дистильованої води. Суміш нагрівають до кипіння для повного розчинення. Під час процесу розчинення середовище часто перемішують.

Стерилізуйте в автоклаві при тиску 15 фунтів і 121 ° C протягом 15 хвилин. Вийміть з автоклава і дайте йому відпочити, поки середовище не досягне температури приблизно 45 - 50 ° C. Додайте 20 мл попередньо приготованого 1% розчину телуриту калію.

Змішайте і перелийте в стерильний посуд Петрі. Дайте затвердіти і замовляйте перевернуті на держателях тарілки, щоб згодом зберігати в холодильнику до використання.

Кінцевий рН підготовленого середовища повинен бути 7,2 ± 0,2.

Перш ніж висівати зразок, дочекайтеся, коли плита досягне кімнатної температури.

Колір підготовленого середовища червоний.

Використовуйте

Хоча його можна використовувати для виділення S. aureus у будь-яких типах зразків, він здебільшого використовується для мікробіологічного аналізу фармацевтичних продуктів, косметики та продуктів харчування.

Рекомендується, щоб прищепка була щільною. Висівання насіння може здійснюватися за допомогою скотування платиновою ручкою або поверхні за допомогою шпателя Дригальського.

Пластинки інкубують при 35-37 ° С протягом 24 - 48 годин при аеробіозі.

QA

Для контролю якості на середовищі Vogel-Johnson можна використовувати такі штами контролю:

Staphylococcus aureus ATCC 25923, Staphylococcus aureus ATCC 6538, Staphylococcus epidermidis ATCC 12228, Escherichia coli ATCC 25922 або Proteus mirabilis ATCC 43071.

Очікуваний результат такий: для штамів S. aureus задовільний ріст чорних колоній, оточених жовтим середовищем. Для S. epidermidis регулярне зростання з напівпрозорими або чорними колоніями, оточеними червоним середовищем.

Так само очікується повне гальмування кишкової палички та часткове або повне гальмування для Proteus mirabilis; якщо вона зростає, це зробить це щадно, а колонії будуть чорними в оточенні червоного кольору.

Список літератури

1. BD Laboratories. VJ (Фогель та Джонсон Агар). 2006. Доступний за адресою: bd.com
2. Britannia Laboratories. Фогель - Джонсон Агар. 2015. Доступний за адресою: britanialab.com
3. Britannia Laboratories. Телуріт калію. 2015. Доступний за адресою: britania.com
4. Мультимедійна лабораторія. Вогар-Джонсон агар середній. 2018. Доступний за адресою: himedialabs.com/TD/MU023.pdf
5. Агар База Фогеля - Джонсона. Посібник з мікробіології Merck. 12-е видання, стор 502-503. Доступно за адресою: Користувачі / Команда / Завантаження
6. Автори Вікіпедії, "Агар Фогель Джонсон", Вікіпедія та енциклопедія безкоштовно, доступні за адресою: wikipedia.org.
7. Венесуельський стандартний Ковенін 1292-89. (1989). Продукти харчування. Виділення та перерахування золотистого стафілокока. Доступний за адресою: sencamer.gob.ve