XLD АГАР: ОБГРУНТУВАННЯ, ПІДГОТОВКА ТА ВИКОРИСТАННЯ - БІОЛОГІЯ - 2025

XLD агар або ксилоза Лізин дезоксихолевої агару середовища є селективним і диференціальної твердої культурою для ізоляції ентеропатогенну. Тейлор розробив формулу агару XL (Xylose, Lysine), щоб поліпшити ізоляцію роду Shigella.

Він зауважив, що цей рід гальмується в більшості середовищ, призначених для виділення ентеропатогенів. Згодом додавали дезоксихолат натрію, тіосульфат натрію та цитрат амонію заліза для підвищення його селективності. Ця формула виявилася корисною як для виділення шигели, так і сальмонели.

Відмінності колоній шигел, сальмонел та колоформ на агарі XLD. A. Shigella sp, B. Salmonella sp, C. Coliforms. Джерела: А. Автор: CDC / Amanda Moore, MT; Тодд Паркер, доктор наук; Одра Марш, надано: Бібліотека зображень громадського здоров'я B. https://upload.wikimedia.org/wikipedia/commons/1/1f/Salmonella_species_growing_on_XLD_agar_-_Showing_H2S_production_-_Detail.jpg C. Автор: CDC / Dr. Дж. Дж. Фермер, надано: бібліотека зображень громадського здоров'я

Агар XLD складається з дріжджового екстракту, дезоксихолату натрію, ксилози, лізину, лактози, сахарози, тіосульфату натрію, цитрату амонію заліза, хлориду натрію, фенолу червоного та агару. XDA агар і SS агар дует використовуються в більшості бактеріологічних лабораторій для дослідження фекальних зразків для шигел та сальмонел.

Інші лабораторії віддають перевагу комбінації CHROMagar Salmonella та XLD агару, серед інших доступних варіантів. Ці дуети можна приготувати в подвійних чашках Петрі. На одній стороні вони розміщують агар XLD, а на протилежному - інший обраний носій.

Основа

-Поживна сила

Агар XLD має екстракт дріжджів, який служить джерелом поживних речовин для мікроорганізмів, які ростуть на цьому агарі. Крім того, наявність вуглеводів (ксилози, сахарози та лактози) забезпечує енергією бактерій, які можуть їх бродити.

-Селективність середовища

Як інгібуюча речовина, він представляє дезоксихолат натрію; Це запобігає зростанню грампозитивних бактерій, надаючи середовищу селективний характер.

-Діференціальна потужність

Типові колонії шигел

Як вже було сказано, агар XLD містить ксилозу; Цей вуглевод ферментується усіма бактеріями, які ростуть у цьому середовищі, за винятком роду шигел.

Це одна з характеристик, що надає йому диференціальний характер, оскільки колонії шигел відрізняються від решти розвиваючими червоними колоніями, а інші бактерії утворюють жовті колонії.

Типові колонії сальмонели

Рід Salmonella також ферментує ксилозу, спочатку утворюючи жовті колонії. Однак після виснаження вуглеводної ксилози вона атакує лізин на свій фермент лізин-декарбоксилаза. Декарбоксилювання лізину породжує луги, які перетворюють колір колонії та навколишнього середовища на початковий червоний.

Таку поведінку здійснює лише сальмонела, оскільки колиформи, які декарбоксилюють лізин, не можуть алкалізувати середовище. Це тому, що коліформи також ферментують лактозу та сахарозу; тому вироблення кислот дуже високе, залишаючи жовту колонію у цих бактерій.

Слід зазначити, що рід сальмонел не ферментує сахарозу чи лактозу.

Виробництво Н

XL-агар також дозволяє виявити види сальмонел, що продукують H ₂ S; Для цього він покладається на джерело сірки, представлене тіосульфатом натрію, і розробник реакції, який представляє собою цитрат амонію заліза.

Останній реагує з H ₂ S (безбарвним газом) і утворює видимий нерозчинний чорний осад сульфату заліза. У цьому сенсі характеристики колоній сальмонели будуть червоними з чорним центром.

Слід зазначити, що для виникнення реакції утворення H ₂ S потрібен лужний pH. Ось чому інші ентеробактерії, що утворюють H ₂ S, не можуть цього робити або погано роблять це в цьому середовищі, оскільки висока кислотність, яка утворюється в результаті ферментації вуглеводів, пригнічує або стримує реакцію.

-Натрію хлорид, агар та фенол червоний

Нарешті, хлорид натрію підтримує осмотичний баланс; агар - затверджувач, а феноловий червоний виявляє зміни рН, перетворюючи колір колоній та середовища.

Підготовка

Зважте 55 г зневодненого середовища XLD і розчиніть в 1 літрі води. Нагрійте і перемішайте суміш до досягнення температури кипіння. Не перегрівайтесь, оскільки тепло пошкоджує середовище і створює осад, який змінює морфологію типових колоній.

Цей носій не повинен автоклавуватися. При розчиненні його потрібно передати на водяну баню при 50 ° С. При охолодженні його слід подавати безпосередньо на стерильний чашки Петрі. Їх можна розлити в одинарні та подвійні тарілки. Їх залишають затвердіти і зберігають у холодильнику до використання.

Загартовуйте перед використанням. Оскільки це нестерильний засіб, рекомендується готувати його близько до дати використання.

Кінцевий рН середовища повинен бути 7,4 ± 0,2. Колір підготовленого середовища оранжево-червоний, напівпрозорий, без осаду.

Якщо у вас є базовий агар Xylose Lysine (XL), ви можете додати дезоксихолат натрію, тіосульфат натрію та цитрат амонію заліза. Таким чином виходить формула агару XLD.

Програми

Агар XLD використовується для відновлення ентеропатогенів, головним чином, роду Shigella та вдруге з роду Salmonella. Це корисно для оцінки зразків стільця, води та їжі.

Види зразків

Кал

Зразки стільців можна висівати безпосередньо на агар XLD, що забезпечує хороший розподіл матеріалу для отримання ізольованих колоній.

Щоб покращити відновлення сальмонели, агар XLD можна очистити від середовища збагачення сальмонели.

Їжа

Що стосується їжі, можна використовувати відвари для збагачення сальмонели та шигел. Для сальмонели можна застосовувати селенітовий цистиновий відвар, яскраво-зелений тетратіонатний відвар, серед інших.

У випадку з шигеллою її можна збагатити відваром шигели 0,5 мкг / мл новобіоцину, інкубувати при 42 ° ± 1 ° С протягом 16-20 годин.

Вода

У аналізі води рекомендується застосовувати техніку мембранної фільтрації та використання агару XLD.

Умови посадки та ідентифікації

Посіяне середовище інкубують аеробним шляхом при 35 ° С протягом 24 - 48 годин.

Спостерігаються типові колонії кожного роду, підозрілі колонії повинні пройти біохімічні тести для їх ідентифікації.

QA

Для оцінки контролю якості середовища можуть бути використані такі бактеріальні штами: Salmonella typhimurium ATCC 14028, Salmonella enteritidis ATCC 13076, Salmonella enteritidis ATCC 13076, Salmonella abony DSM 4224, Shigella flexneri ATCC 12022, Shigella sonnei ATCC 25931, Escherichia coli ATCC 25922, Proteus mirabilis 4 , Klebsiella pneumoniae ATCC 33495.

Для роду Salmonella характерно представлення червоних колоній з чорним центром або повністю чорними колоніями на цьому середовищі. Тоді як у роду Shigella колонії повинні бути червоними, тобто кольором середовища.

У випадку з кишковою паличкою очікується, що вона буде повністю або частково пригнічена; якщо вона росте, колонії жовті. Для Proteus mirabilis очікується слабке зростання з рожевими колоніями з чорним центром або без нього. Врешті-решт рід Klebsiella виросте як жовті колонії.

Заключні думки

Агар XLD широко застосовується в бактеріологічних лабораторіях для його високої ефективності для відновлення шигел, а також має гарне відновлення роду Salmonella.

Rall et al. (2005) у своїй роботі під назвою "Оцінка трьох бульйонів для збагачення та п’яти твердих середовищ для виявлення сальмонели у птиці" продемонстрували, що з 3-х перевірених класичних середовищ (яскраво-зелений агар, SS-агар та XLD-агар) , Найвищий показник відновлення отримав агар XLD.

Відновлення відновлення були такі: 13,8% для яскраво-зеленого агару, 27,6% для SS та 34,5% для XLD. Агар Рамбаха з відновленням 48% та CHROMagar з 79,3% був перевершений лише хромогенними середовищами.

Список літератури

1. Харчові хвороби. Шигельоз. Доступно за адресою: anmat.gov.ar
2. "Агар XLD." Вікіпедія, Вільна енциклопедія. 9 лютого 2019, 11:46 UTC. 10 квітня 2019, 19:25 wikipedia.org
3. BBL Laboratories. CHROMagar Salmonella / BD XLD Agar (biplate). 2013 Доступно за адресою: bd.com
4. Лабораторія. XLD агар. Доступний за адресою: foodsafety.neogen
5. Лабораторія Франциско Сорія Мельгуїзо. XLD Agar. Доступно за адресою: http://f-soria.es/Inform
6. Rall L, Rall R, Aragon C, Silva M. Оцінка трьох бульйонів для збагачення та п’яти середовищ для посіву для виявлення сальмонели у птиці. Браз. J. Microbiol. 2005 р .; 36 (2): 147-150. Доступно з: scielo.br
7. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Мікробіологічна діагностика Бейлі та Скотта. 12 ред. Редакція Panamericana SA Аргентина.