ВОДА PEPTONE: ОБГРУНТУВАННЯ, ПІДГОТОВКА ТА ВИКОРИСТАННЯ - БІОЛОГІЯ - 2025

Пептона вода є рідке середовище збагачення, неселективний, головним чином , використовують в якості розчинника зразків харчових продуктів або інших матеріалів. Це середовище з хімічної точки зору дуже просте, воно містить м'ясо пептон, хлорид натрію та воду.

Він має певну харчову цінність, що дозволяє збагатити зразок. Якщо є зловживання бактеріями, цей засіб має силу відновити життєздатність. Він особливо корисний для відновлення бактерій, що належать до сімейства Enterobacteriaceae.

Вода Peptone у пляшках. Джерело: MSc Маріельса гіл

У випадку відновлення сальмонел рекомендується використовувати варіант з водою з пептоном, що в’янеться; Це служить середовищем для попереднього збагачення зразка, в цьому випадку він містить інші елементи, такі як динатрію фосфат і двоталій фосфат.

Зазвичай пептонну воду готують при нейтральному рН, однак існують і інші варіанти, коли pH повинен бути 8,5 ± 0,2 (лужний), оскільки бактерії, які потрібно виділити, є лужними, такими як Вірус холер.

Крім того, це середовище може бути використане в якості базового середовища для тестів на ферментацію вуглеводів.

Основа

Пептони забезпечують поживні речовини, необхідні для росту бактерій, особливо азот та коротколанцюгові амінокислоти, тоді як хлорид натрію підтримує осмотичний баланс.

Крім того, середовище дозволяє розсіювати, гомогенізувати та відновлювати бактеріальні клітини, пошкоджені промисловими процесами.

Як розчинник ідеально підходить, ефективно замінюючи фізіологічний розчин (SSF) або розчин фосфатного буфера (PBS).

Зростання бактерій видно, спостерігаючи його помутніння.

Підготовка

Домашня підготовка (не комерційна)

Зважте 1 г пептону і 8,5 г натрію хлориду, розчиніть в 1 літрі дистильованої води. РН слід відрегулювати до 7,0. Для цього можна використовувати 1N хлорид натрію.

Приготування з використанням комерційного середовища

Зважте 15 г зневодненого середовища і розчиніть в літрі дистильованої води. Гомогенізувати суміш. При необхідності суміш кип'ятять протягом 1 хвилини, щоб сприяти загальному розчиненню. Подавайте в 100 мл пляшках або 10 мл тубах за потребою. Автоклавуйте при 121 ° С протягом 15 хвилин.

Остудіть і використовуйте або зберігайте в холодильнику. Кінцевий pH середовища 7,2 ± 0,2.

Колір зневодненого середовища світло-бежевий, а підготовлене - світло-бурштиновий.

Підготовка до тестів на бродіння

До попереднього препарату - перед стерилізацією - вуглевод повинен бути доданий до кінцевої концентрації 1%, плюс показник Андраде (кислотний фуксин) або феноловий червоний (0,018 г / л). Трубки повинні бути оснащені дзвоном Дарем, щоб спостерігати газоутворення.

Інші варіанти води з пептоном

Буферна або буферна пептонова вода

Він містить ферментативний гідролізат казеїну, хлорид натрію, дигідрогенфосфат калію та додекагідрат натрію гідрофосфат. Кінцевий pH становить 7,0 ± 0,2.

Для його приготування зважте 20 г зневодненого середовища і розчиніть в 1 літрі дистильованої води. Дайте йому відпочити приблизно 5 хвилин. Нагрівайте протягом 1 хвилини до повного розчинення.

Налийте у потрібні банки за потребою. Стерилізують за допомогою автоклава при 121 ° С протягом 15 хвилин.

-Щелочна пептонова вода

Зважте 25 г зневодненого середовища і розчиніть в 1 літрі води. Продовжуйте, як описано вище. Значення рН становить від 8,3 до 8,7.

Використовуйте

Інокулум проводиться шляхом розміщення проби безпосередньо.

Застосовується для розведення зразків, особливо при підозрі на наявність пошкоджених бактерій. Зазвичай розведення становлять 1:10 і 1: 100.

Інкубують протягом 24 годин при аеробіозі при 35-37 ° C.

Зразки табуретів

Для зразків стільця для сальмонели рекомендується використовувати буферну або буферизовану воду в якості попереднього збагачення.

Для цього дійте так:

Якщо стілець утворився, візьміть 1 г проби. Якщо вони рідкі, візьміть 1 мл калу і суспендуйте в пробірці з 10 мл води з пептоном. Що стосується ректальних тампонів, вивантажте матеріал, що міститься в тампоні, в трубку з буферизованою водою пептон.

У всіх випадках дуже добре перемішайте і гомогенізуйте зразок.

Інкубуйте при 37 ° С протягом 18 - 24 годин. Згодом субкультура в бульйоні для збагачення, такому як відвар селеніту цистину або тетратіонатний бульйон при 37 ° С протягом 18-24 годин більше. Нарешті, культивують у селективних середовищах для сальмонели, таких як SS-агар, XLD-агар, Hektoen-агар, серед інших.

Зразки їжі

Вода Peptone використовується як середовище для збагачення або як простий розріджувач, але якщо шукають види сальмонели, вона використовується як середовище для попереднього збагачення, як уже було описано.

У їжі діють так:

Для твердих продуктів важать 25 г проби, а для рідких - 25 мл. Помістіть вказану порцію в колби, що містять 225 мл пептонної води. Перемішують і гомогенізують зразок.

Якщо підозра на високу мікробну навантаження є великою, можна зробити послідовне чи десяткове розведення, щоб полегшити підрахунок одиниць, що утворюють колонію (CFU).

Кількість розведень залежатиме від типу зразка та досвіду аналітика.

Якщо, з іншого боку, мікробне навантаження, як підозрюється, дуже низьке, розрідження не потрібно. Згодом субкультура на вибіркових носіях.

Що стосується їжі з моря, наприклад, молюсків, риб, серед інших, для пошуку холер Vibrio або інших видів Vibrio слід використовувати пептонну воду, доведену до рН 8,5 (лужна пептонова вода).

QA

Від кожної підготовленої партії потрібно інкубувати одну-дві пробірки без щеплення протягом 24 годин при аеробіозі при 37 ° С. Після закінчення часу не повинно спостерігатися каламутність або зміна кольору.

Відомі контрольні штами також можна використовувати для оцінки їх ефективності:

Для цього можуть бути використані наступні бактеріальні штами: Escherichia coli ATCC 25922, Escherichia coli ATCC 8927, Staphylococcus aureus ATCC 6538, Pseudomonas aeruginosa ATCC 9027, Salmonella typhimurium ATCC 1428, Salmonella enteritidis ATCC 13076.

У всіх випадках очікується задовільний розвиток мікробів, що спостерігається помутнінням середовища.

Обмеження

-Забезводнене середовище дуже гігроскопічне, тому його потрібно тримати подалі від вологи.

-Засіб не слід використовувати, якщо спостерігається будь-який тип погіршення.

-Зневодне культуральне середовище слід зберігати при температурі від 10 до 35 ° C

-Підготовлену середу потрібно зберігати в холодильнику (2-8 ° C).

Список літератури

1. Camacho A, Giles M, Ortegón A, Palao M, Serrano B і Velázquez O. Методи мікробіологічного аналізу харчових продуктів. 2009 р., 2-е видання. Хімічний факультет, УНАН. Мексика. Версія для адміністратора посібників та документів (AMyD) хімічного факультету, UNAM 1. Доступно за посиланням: http://depa.fquim.unam.mx
2. Britannia Laboratories. Вода з пептоном. 2015. Доступний за адресою: britanialab.com
3. Неогенні лабораторії. Вода Пептон. Доступно за адресою: foodsafety.neogen.com
4. Britannia Laboratories. Вода Пептон. 2015. Доступний за адресою: britanialab.com
5. Merck Laboratories. Буферна пептонова вода. Доступний за адресою: merckmillipore.com
6. Conda Pronadisa Laboratories. Лужна вода пептон. Доступний за адресою: condalab.com
7. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Мікробіологічна діагностика Бейлі та Скотта. 12 ред. Редакція Panamericana SA Аргентина.