ФАРБУВАННЯ ГЕМАТОКСИЛІН-ЕОЗИНОМ: ХАРАКТЕРИСТИКИ, ВИКОРИСТАННЯ, МЕТОДИ - ХІМІЯ

Гематоксилін - еозин є метод фарбування з використанням комбінації барвників гематоксиліном і еозином. Ця пара барвників робить ідеальний дует, оскільки гематоксилін діє як основний барвник, а еозин - кислотний барвник.

Позначення основних або кислотних барвників не стосується рН, який вони отримують у розчині, а швидше говорить про переважну пропорцію щодо аніонних або катіонних зарядів, які вони мають, або місця розташування хромофорної групи.

Гематоксилін - еозиновий (ВІН) забарвлений ресничним стовпчастим епітелієм Джерело: Тодд Строс та Володимир Осипов

У цьому сенсі гематоксилін вважається основним (катіонним) барвником і тому має спорідненість до кислотних структур, таких як ядро клітин. У той час як еозин, будучи кислим (аніонним) барвником, має спорідненість до лужним або основним структурам, таким як клітинна цитоплазма.

З цієї причини ця комбінація барвників широко використовується для фарбування тканин, оскільки дозволяє чітко розрізнити ядра та цитоплазми. Ядра забарвлюються в темно-синій або фіолетовий колір, а цитоплазма рожева.

Фарбування гематоксилін-еозином є однією з найбільш широко використовуваних методів фарбування в області гістології та цитології, завдяки простому поводженню та низькій вартості. Він використовується для візуалізації клітин, товстих нервових волокон та наявності певних мікроорганізмів у тканинах, таких як: паразити, грибки та бактерії, серед інших.

характеристики

Гематоксилін

Гематоксилін - нейтральний барвник. Однак компонент, що забезпечує колір (хромофор), розташований у катіонному або базовому центрі молекули. Звідси його спорідненість до кислотних структур. Його хімічна формула - C ₁₆ H ₁₄ O _6, а її наукова назва - 7,11b-дигідроіндено хромен-3, 4,6a, 9,10 (6 H) -пентол.

В основному вона забарвлює ядра клітин, оскільки вони дуже багаті нуклеїновими кислотами. Він також може забарвити цитоплазматичні включення вірусного походження.

Для того, щоб гематоксилін забарвився, він повинен бути в окисленому стані і пов'язаний з металом. Останній буде служити фіксації до тканини, тобто виконуватиме роль мотанки.

Коли окислюється гематоксилін, його називають гематеїном. Окислення досягається впливом кисню (старіння) реагенту або речовин, що сприяють його окисленню (хімічному окисленню).

Еозин

Еозин - це барвник, який забарвлює червоний або рожевий колір. Він нерозчинний у воді, хоча існує водорозчинна версія. Як правило, еозин готують шляхом розчинення в спирті (95 ° етанол).

Він забарвлює цитоплазми, м’язові волокна, цитоплазматичні органели та колаген, але не забарвлює ядра клітин. Це тому, що він негативно заряджений, тому має спорідненість до позитивно заряджених структур.

Існує два типи еозину "Y" і "B". Еозин "Y" відомий як жовтий еозин. Його наукова назва - тетрабромоуресцеїн, а його хімічна формула - C ₂₀ H ₈ Br ₄ O ₅ .

З іншого боку, еозин "B" іноді називають синюватим еритрозином B. Його наукова назва - дибромодинітро-уресцеїн, а формула - C ₂₀ H ₈ Br ₂ N ₂ O ₉ . Обидва дуже схожі, і різниця між використанням того чи іншого насправді не помітна. Однак найпопулярнішим є еозин "Y".

Еозин має властивість розрізняти живу і мертву клітину, оскільки він здатний перетнути мембрану, щоб зафарбувати її цитоплазму, коли клітини мертві, залишаючи цитоплазму клітини безбарвною, якщо вона залишається живою.

Програми

Фарбування нервових волокон

Товсті нервові волокна можуть бути забарвлені і ідентифіковані гематоксилін-еозином. Однак він не корисний для фарбування тонких нервових волокон, оскільки для візуалізації останніх потрібне фарбування сріблом.

Гістологічні плями шкіри

У фарбуванні рогового шару шкіри барвник, який діє, є еозином, оскільки на цьому рівні клітини не мають ядра.

У зернистому шарі шкіри гематоксилін сильно забарвлює гранули кератогіаліну всередині клітин гранул. Навпаки, остистий шар шкіри слабко фарбується гематоксиліном, тоді як базальний або зародковий шар досить плямистий.

Еозин забарвлює цитоплазму всіх клітин і інтенсивність забарвлення може змінюватись від шару до шару.

Фарбування гематоксилін-еозином зразків калу

Гомес та ін., У 2005 році продемонстрували, що фарбування гематоксилін-еозином було більш ефективним у виявленні випадків амебіазу за рахунок Entamoeba histolytica та Entamoeba dispar, ніж метод свіжого візуалізації (фізіологічний розчин та луголь) у пацієнтів із гострим діарейним захворюванням.

Також було показано, що він дуже чутливий при виявленні еритрофагоцитозу (амеб, які поглинули еритроцити).

Фарбування гістологічних зрізів для діагностики інфекції

У 2004 році Walwyn та ін. Запропонували використовувати гістологічні плями для виявлення мікроорганізмів, що викликають інфекцію.

За допомогою фарбування гематоксилін-еозином вони змогли візуалізувати інфекції, спричинені Clostridium, Actinomyces, spirillae або Candida. Вони також змогли спостерігати наявність паразита Sarcoptes escabiei в ділянках шкіри та вірусних включень цитомегаловірусом та герпесом у відділах різних тканин.

Техніки

Для гістологічних зразків

Фарбування гістологічного розрізу проходить через ряд етапів. Перше - отримати гістологічний зріз. Це потрібно воском, щоб пізніше отримати надрізи (надтонкі) мікротомом. Методика складається з наступних етапів:

1-Усунення зайвого парафіну : для цього можна використовувати ксилол або Heme-D, занурюючи на 3-5 хвилин.

2-Регідратація зразка: це досягається зануренням зразка в різні концентрації спиртів (етанол) у порядку спадання (100 °, 90 °, 70 °). У всіх випадках протягом 7 хвилин.

3-Усунення зайвого алкоголю: для цього його занурюють у воду на 7 хвилин.

4-Фарбування гематоксиліном: зразок занурюють на 6-10 хвилин у лоток, що містить гематоксилін. Час витримки залежить від розміру та товщини зразка.

5-Ліквідація надлишку гематоксиліну: його промивають водою протягом 5 хвилин, а потім здійснюють швидкий прохід (10-20 секунд) через кислотний спирт. Пізніше його знову промивають водою протягом 5 хвилин. Потім його занурюють в етанол при 96 ° С протягом 1 хвилини.

6-фарбування еозином: для цього зразок занурюють на 5 хвилин у лоток з еозином.

7-Зневоднення зразка : для цього його знову пропускають через лотки для спирту (етанол), але цього разу у порядку зростання. (70 °, 90 °, 100 °). (За 5 секунд, 5 секунд, 1 хвилину відповідно).

8-Уточнення зразка : для цього його піддають дії ксилолу протягом 5-10 хвилин і сушать для постійного ущільнення канадським бальзамом або іншим подібним матеріалом.

Для зразків табуретки шукаємо

Мазок робиться на слайді зі стільцем пацієнта і фіксується 80% спиртом протягом 5 хвилин. Лист занурюють у гематоксилін на 5 хвилин і негайно промивають водою.

Згодом її швидко занурюють у кислий спирт, а потім у аміачну воду. Його промивають водою. Він забарвлюється протягом 5 хвилин в еозині. Зразок зневоднюють, як пояснено в рівні техніки, і остаточно промивають ксилолом.

Приготування реагентів

- Гематоксилін

В одному літрі дистильованої води розчиняють 50 грам сульфату алюмінію калію або амонію. Повністю розчинившись, додайте 1 грам кристалізованого гематоксиліну. При повному розчиненні додають 1 г лимонної кислоти разом з 50 г хлоратгідрату та 0,2 г йодату натрію.

Суміш кип'ятять 5 хвилин, потім дають охолонути і фільтрують, щоб видалити залишки твердих частинок. Приготований таким чином реагент можна негайно використовувати.

- Еосін

Його можна приготувати з алкогольною основою або з водою.

Алкогольний еозин

У 100 мл етанолу при 95 ° З розчиняють 0,5 г еозину "Y". Потім додайте кілька крапель льодовикової оцтової кислоти.

2% водний еозин

У 1250 мл дистильованої води розчиняють 25 грам водорозчинного еозину "Y". Потім додайте кілька крапель льодовикової оцтової кислоти.

Кислий спирт

Відміряйте 0,5 мл концентрованої соляної кислоти і доведіть до 100 мл абсолютного спирту.

Аміачна вода

Відміряйте 0,5 мл концентрованого аміаку і долийте до 100 мл дистильованою водою.

Список літератури

Наваррете, Г. Гістологія шкіри. Rev Fac Med UNAM 2003; 46 (4): 130-133. Доступний за адресою: medigraphic.com
Гомес-Рівера N, Моліна А, Гарсія М, Кастільо Дж, Кастільо Дж, Гарсія Р, Фонсека I, Валенсуела О.
Ідентифікація Entamoeba histolytica / Е. Диспартуйте за методом свіжої амеби та її фарбуванням гематоксиліном-еозином при гострій діареї. Rev Mex Pediatr 2005; 72 (3); 109-112. Доступний за адресою: medigraphic.com
Walwyn V, Iglesias M, Almarales M, Acosta N, Mera A, Cabrejas M. Корисність гістологічних методів діагностики інфекції в анатомічних зразках. Rev Cub Med Mil, 2004; 33 (2). Доступно за адресою: scielo.sld
Реагенти ITW PanReac AppliChem. Гематоксилін-еозинова пляма. 2017, Іспанія. Доступний за адресою: itwreagents.com
Еозин. Вікіпедія, Вільна енциклопедія. 7 листопада 2018, 08:18 UTC. 4 серпня 2019, 22:13 en.wikipedia.org
"Гематоксилін". Вікіпедія, Вільна енциклопедія. 3 травня 2019 р., 11:23 UTC. 4 серпня 2019, 22:48 wikipedia.org

ФАРБУВАННЯ ГЕМАТОКСИЛІН-ЕОЗИНОМ: ХАРАКТЕРИСТИКИ, ВИКОРИСТАННЯ, МЕТОДИ - ХІМІЯ - 2025