ЛІКАР (ЛІЗИН ЗАЛІЗО) АГАР: ОСНОВА, ПІДГОТОВКА ТА ВИКОРИСТАННЯ - БІОЛОГІЯ - 2025

Агар LIA (Лізин залізо) біохімічний тест , який використовується для ідентифікації бактерій родини Enterobacteriaceae. Цей засіб було створено Едвардсом і Файфом за формулою Фалькова.

Спочатку цей тест представляв собою відвар, що містить пептони, дріжджовий екстракт, глюкозу, L-лізин, бромкрезол фіолетовий та дистильовану воду. Едвардс і Фіфі додали агар-агар, цитрат амонію заліза і тіосульфат натрію.

Позитивний та негативний тест на декарбоксилювання лізином. Джерело: Властивість фото та діаграм автора магістра. Маріельса гіл

Тест в основному складається з демонстрації присутності ферменту лізин-декарбоксилази, здатної реагувати з карбоксильною групою амінокислоти L-лізин. Дезамінація амінокислоти також може відбуватися через наявність ферменту лізиндезамінази.

Крім того, склад середовища демонструє здатність деяких бактеріальних родів виробляти сірководень. Нарешті, також можна спостерігати, як утворюється чи ні газ у середовищі.

Основа

Пептони та дріжджовий екстракт

Як і більшість культуральних середовищ, Лізин Залізний Агар містить компоненти, які забезпечують джерело поживних речовин, необхідних для росту бактерій. Ці компоненти представлені пептонами та екстрактом дріжджів.

Глюкоза

Так само цей агар містить глюкозу як ферментований вуглевод. Відомо, що всі бактерії родини Enterobacteriaceae ферментують глюкозу.

Цей крок має вирішальне значення, оскільки він буде відповідати за підкислення середовища, що є найважливішою умовою дії ферменту лізин-декарбоксилази, якщо вона присутня, на її субстрат.

У деяких бактеріальних родах може спостерігатися вироблення газу внаслідок бродіння глюкози.

Газ засвідчується при зміщенні агару в пробірці, залишаючи порожнє місце внизу пробірки або при руйнуванні середовища на дві або більше порцій.

L-лізин

Після декарбоксилювання лізину утворюються діамін (кадаверин) і вуглекислий газ.

Декарбоксилювання відбувається в присутності коферменту піридоксального фосфату. Ця реакція незворотна.

Індикатор PH (бромокрезол фіолетовий)

Всі зміни рН, які відбуваються в середовищі за допомогою різних реакцій, виявляються фіолетовим показником рН бромокрезолу.

У цьому сенсі, коли відбувається підкислення, середовище жовтіє, а при лугуванні середовище повертається до початкового пурпурного або фіолетового кольору.

Коли дезамінація лізином відбувається через наявність ферменту лізиндеамінази, на поверхні утворюється червонуватий колір, типовий для родів Proteus, Providencia та деяких видів Morganella.

Це пов’язано з тим, що в процесі дезамінування утворюється альфа-кето-вуглекисла кислота, яка реагує з цитратом амонію у присутності кисню, що викликає вищезазначене забарвлення.

Цитрат амонію залізо та тіосульфат натрію

З іншого боку, про бактерії, що виробляють сірководень, буде свідчити наявність тиосульфату натрію (джерела сірки) та цитрату амонію заліза, який є розробником H ₂ S.

Бактерії, які мають фермент тиосульфат редуктази, здатні діяти, зменшуючи присутнім тиосульфат натрію, утворюючи сульфіт та сірководень (H ₂ S).

Останній є безбарвним газом, але при взаємодії з сіллю заліза утворює сульфід чорного металу, який є нерозчинною сполукою (видимий чорний осад).

Однак здатність утворювати H ₂ S з цим середовищем не дуже надійна, оскільки деякі негативні бактерії лізин-декарбоксилази, здатні продукувати H ₂ S, не утворюватимуть чорний осад, оскільки заважає кислотність середовища. Тому рекомендується перевірити інші носії, які містять залізо.

Інтерпретація тесту

Декарбоксилювання лізином

Пробірки слід зчитувати після 24 годин інкубації, інакше існує ризик неправильного трактування реакції, повідомлення про помилкові негативи.

Потрібно пам’ятати, що першою реакцією, яка відбудеться, буде бродіння глюкози, тому всі пробірки через 10-12 годин жовтіють.

Якщо наприкінці часу інкубації (24 години) спостерігається жовтий фон з фіолетовою або фіолетовою поверхнею, реакція негативна. Фіолетовий колір поверхні відповідає луганню середовища шляхом використання пептонів.

Позитивна реакція - така, коли дно і поверхня трубки повністю фіолетові, тобто повертаються до початкового кольору.

Тому, хто визначає позитивність тесту, це основа або фон середовища. Якщо ви сумніваєтесь у кольорі, його можна порівняти з неінокованою трубкою LIA.

Дезамінація лізину

Пробірка, що демонструє дезімінацію лізином, матиме червонувато-бордову поверхню та жовтий (кислотний) фон, або вся трубка червонуватого бордового кольору.

Ця реакція трактується як негативна для декарбоксилювання лізином, але позитивна для дезамінування лізином.

Цю реакцію визначають та інтерпретують на рамці.

Виробництво сірководню (Н

Позитивна реакція спостерігається появою чорного осаду у всій або частині середовища. Зазвичай між краєм скосу і основою.

Якщо осад трапляється по всій пробірці, він не виявить інших реакцій, що виникають в середині.

Запис результатів

При інтерпретації тесту результати записуються наступним чином:

Спочатку зчитується скос, потім дно або блок, потім видобуток H ₂ S і, нарешті, виробництво газу.

Приклад: K / A + (-). Це означає:

• K: Лужна оболонка (фіолетовий колір)
• A: Кислий фон (жовтий), тобто негативна реакція декарбоксилювання та негативне дезамінування.
• +: Виробництво сірководню
• (-): Без газу.

Підготовка

Зважте 35 г зневодненого заліза лізинного агару та розчиніть його в одному літрі дистильованої води.

Нагрівайте до повного розчинення агару, для цього дайте йому кипіти протягом хвилини, часто помішуючи. Розподіліть 4 мл середовища в пробірки 13/100 з бавовняними кришками.

Стерилізуйте в автоклаві при 121 ° С протягом 15 хвилин. Зніміть з автоклава і дайте постояти під кутом, щоб там була глибока основа і короткий скос.

Зберігати в холодильнику 2-8 ° C. Дайте прогрітися перед посівом штаму бактерій.

Колір зневодненого середовища - бежевий, а підготовлений засіб - червонувато-фіолетовий.

Кінцевий рН підготовленої середовища становить 6,7 ± 0,2

Середовище жовтіє при рН 5,2 або менше і фіолетово при рН 6,5 і вище.

Програми

Цей тест, поряд з іншими біохімічними тестами, використовується для ідентифікації бацил сімейства Enterobacteriaceae.

Середовище засівають прямою петлею або голкою, на дно трубки роблять один або два проколи, після чого поверхню середовища забивають зигзагом.

Інкубуйте протягом 24 годин при 35-37 ° С при аеробіозі. При необхідності його залишають інкубувати ще протягом 24 годин.

В основному корисно диференціювати лактозонегативні види Citrobacter від Salmonellas sp.

Джерело: Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Мікробіологічна діагностика. 5-е видання. Редакція Panamericana SA Аргентина.

Список літератури

1. Мак Фаддін Дж. (2003). Біохімічні тести для виявлення бактерій клінічного значення. 3-е вид. Редакція Panamericana. Буенос-Айрес. Аргентина.
2. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Мікробіологічна діагностика Бейлі та Скотта. 12 ред. Редакція Panamericana SA Аргентина.
3. Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Мікробіологічна діагностика. 5-е видання. Редакція Panamericana SA Аргентина.
4. Britannia Laboratories. Лізин залізовий агар. 2015. Доступний за адресою: britanialab.com
5. BD Laboratories. BBL Lysine залізні агари. 2007. Доступний за адресою: bd.com
6. Valtek Laboratories. Середній LIA 2009. Доступний за адресою: andinamedica.com