АГАР КРОВІ: ОБГРУНТУВАННЯ, ВИКОРИСТАННЯ ТА ПІДГОТОВКА - БІОЛОГІЯ - 2025

Кров'яний агар є твердою культурального середовища , збагачений диференціальної , але неселективний. Його використовують для відновлення та росту великої кількості різноманітних мікроорганізмів із клінічних проб або для субкультур.

Класичний кров’яний агар повинен бути включений для висівання більшості клінічних проб, отриманих в лабораторії; за винятком зразків калу, де це не корисно, якщо тільки вони не готуються з певними модифікаціями.

Пластина з агаром крові

Це культуральне середовище в основному складається з збагаченого базового агару та 5% крові. Основа агару може змінюватись залежно від потреб, але в основному він буде складатися з пептонів, амінокислот, вітамінів, м'ясного екстракту, хлориду натрію, агару, серед інших.

Що стосується крові, то для отримання крові від тварин, наприклад овець, кролика або коня, зазвичай потрібно контактувати з віварієм. Однак це не завжди можливо, і іноді використовується кров людини.

Засіб для агару крові можна приготувати в лабораторії або придбати готове у спеціалізованих компаній. Приготування цього засобу є одним з найтонших, будь-яка необережність при його приготуванні призведе до забрудненої партії.

Ось чому необхідно вжити всіх можливих запобіжних заходів, і в кінці потрібно здійснити контроль якості шляхом інкубації при 37 ° С 1 тарілки на кожні 100 підготовлених.

Основа

Staphylococcus aureus культивують на кров'яному агарі. Nathan Reading on Flickr Nathan R. у Twitter через Wikimedia Commons Вже згадувалося, що кров’яний агар має властивість бути збагаченим, диференційованим та неселективним середовищем. Основа кожної з цих властивостей пояснюється нижче.

Агар крові є збагаченим середовищем, оскільки він містить 5-10% крові на основі агару як основної добавки. Обидві сполуки містять багато поживних речовин, і ця властивість дозволяє більшості вирощуваних бактерій рости в ньому.

Це зростання відбувається без обмежень; з цієї причини він неселективний. Однак якщо до цього середовища додаються сполуки, які перешкоджають зростанню одних мікроорганізмів та надають перевагу іншим, воно стає вибірковим. Це так, якщо додаються певні типи антибіотиків або протигрибкових препаратів.

Так само кров’яний агар є диференційованим середовищем, оскільки дозволяє виділити 3 типи бактерій: бета-гемолітичні, альфа-гемолітичні та гамма-гемолітичні.

Бета-гемолітики - це ті, які мають здатність повністю лізирувати або розщеплювати еритроцити, утворюючи чіткий ореол навколо колоній, тому вони виробляють ß або ß -гемоліз, і мікроорганізми називають ß-гемолітичними.

Прикладами ß-гемолітичних бактерій є Streptococcus pyogenes і Streptococcus agalactiae.

Альфа-гемолітики - це ті, що проводять частковий гемоліз, де гемоглобін окислюється до метгемоглобіну, утворюючи навколо колоній зеленувату забарвлення. Це явище відоме як α або α -гемоліз і бактерії класифікуються як α - гемолітичні.

Прикладами α-гемолітичних бактерій є Streptococcus pneumoniae та Streptococcus групи viridans.

Нарешті, є так звані гамма-гемолітичні або негемолітичні бактерії. Вони ростуть на агарі, не утворюючи на ньому змін, ефект, відомий як γ -гемоліз, а мікроорганізми є γ -гемолітичними.

Приклад γ-гемолітичних бактерій: деякі штами стрептокока групи D (Streptococcus bovis і Enterococcus faecalis).

Програми

Середовище культури агару крові є одним з найбільш часто використовуваних в лабораторії мікробіології.

Серед мікроорганізмів, здатних рости в середовищі агару крові, є: строгі аеробні, факультативні, мікроаерофільні, анаеробні, грампозитивні або грамнегативні бактерії, швидкозростаючі або повільно зростаючі бактерії.

Зростають також деякі харчові вимогливі або вибагливі бактерії, а також гриби та дріжджі. Так само це корисно для субкультурації або реактивації штамів, метаболічно дуже слабких.

Однак вибір групи крові та базового агару буде змінюватися залежно від ймовірного мікроорганізму, який підозрюється в одужанні, та від використання, до якого слід використовувати пластинку (культура або антибіограма).

Вибір групи крові

Кров може бути бараниною, кроликом, конем або людиною.

Найбільш рекомендованою є кров ягняти, за деякими винятками. Наприклад, виділити види гемофілу, де рекомендованою кров’ю є кров коня чи кролика, оскільки в крові ягняти є ферменти, що інгібують фактор V.

Найменш рекомендований людський, однак він найбільш використовуваний, можливо, тому, що його найлегше отримати.

Кров повинна бути дефібринована, отримана без будь-якого типу добавки та від здорових тварин. Для вживання людської крові необхідно враховувати кілька факторів:

Якщо кров надходить від осіб, які перенесли бактеріальні інфекції, у них будуть специфічні антитіла. За цих умов зростання деяких бактерій, ймовірно, буде гальмуватися.

Якщо його отримують з банку крові, він містить цитрат і певні бактерії можуть не рости в його присутності. З іншого боку, якщо кров надходить від пацієнтів, які приймають антибіотики, зростання сприйнятливих бактерій може гальмуватися.

І якщо кров від людини, яка страждає діабетом, надлишок глюкози заважає правильному розвитку структур гемолізу.

Вибір базового типу агару

Базовий агар, який використовується для приготування агару крові, може бути дуже широким. Серед них: поживний агар, агар для інфузії мозку серця, соєвий агар триптикази, агар Мюллера Хінтона, агар Таєра Мартіна, агар Колумбія, агар Бруцелла, агар кампілобактер тощо.

Використання агару крові відповідно до базового середовища, що використовується для його приготування

Живильний агар

Ця основа найменше використовується, оскільки в основному вирощуватимуть такі вимогливі бактерії, як кишкові бацили, Pseudomonas sp, S. aureus, Bacillus sp. Не рекомендується виділяти стрептокок.

Мозковий інфузійний агар (BHI)

Він є одним з найбільш широко використовуваних як основа для агару крові, оскільки містить необхідні поживні речовини для росту більшості бактерій, включаючи Streptococcus sp та інші вимогливі бактерії. Хоча спостерігати за закономірностями гемолізу недоцільно.

Кров ягняти зазвичай використовується з цією основою.

Також можуть бути приготовані варіанти кров'яного агару, куди для ізоляції певних мікроорганізмів додають інші сполуки. Наприклад, для виділення Francisella tularensis може використовуватися інфаркт мозку з агаром, доповненим кров’ю кролика, цистином та глюкозою.

Тоді як цистиновий телурит корисний для виділення Corynebacterium diphteriae. Може використовуватися кров людини або ягня.

З першим бета-гемоліз буде сприйматися як вузький ореол, тоді як з другим ореол буде набагато ширшим.

Аналогічно, ця основа разом з бацитрацином, кукурудзяним крохмалем, кров’ю коня та іншими добавками для збагачення (IsoVitaleX) використовується для виділення роду Haemophilus sp з респіраторних проб.

Крім того, якщо до комбінації антибіотиків хлорамфеніколу - гентаміцину або пеніциліну - стрептоміцину з кінською кров’ю, він ідеально підходить для виділення вимогливих патогенних грибів, навіть з більшим урожаєм, ніж агар глюкози Сабуро. Він особливо корисний при виділенні Histoplasma capsulatum.

Триптикази соєвого агару

Ця основа є найбільш рекомендованою для кращого спостереження за схемою гемолізу та для проведення діагностичних тестів, таких як таксони на оптохін та бацитрацин. Це класичний кров’яний агар, який використовується звичайно.

За допомогою цієї основи ви також можете приготувати спеціальний агар крові для Corynebacterium diphteriae з цистиновим телуритом та ягнячою кров’ю .

Так само поєднання цього агару з ягнячою кров’ю, плюс канаміцин-ванкоміцин ідеально підходить для росту анаеробів, особливо Bacteroides sp.

Мюллер Хінтон-агар

Ця база, доповнена кров'ю, використовується для проведення антибіограми в'язких мікроорганізмів, таких як Streptococcus sp.

Він також корисний для виділення таких бактерій, як Legionella pneumophila.

Таєр Мартін Агар

Це середовище ідеально підходить як основа для агару крові при підозрі на рід Neisseria, особливо Neisseria meningitidis, оскільки N. gonorrhoeae не росте на агарі крові.

Він також використовується для перевірки чутливості до Neisseria meningitidis.

Колумбійський агар

Ця база є чудовою для висіву зразків біопсії шлунка для Helicobacter pylori.

Засіб готують додаванням 7% крові ягняти, дефібринованої антибіотиками (ванкоміцин, триметоприм, амфотерицин В і цефсулодин) для обмеження росту інших видів бактерій, які можуть бути присутніми.

Ця ж основа, доповнена кров’ю людини або ягняти, налідиксиновою кислотою та колістином корисна для виділення Gardnerella vaginalis. Він також ідеально підходить для оцінки чутливості до антимікробних препаратів до антибіотиків того ж мікроорганізму.

Крім того, його використовують для приготування агару крові для вирощування анаеробів, додаючи аміноглікозиди та ванкоміцин.

Ця база дозволяє правильно спостерігати за схемами гемолізу.

Бруцелловий агар

Цей засіб, що використовується як основа для агару крові разом з додаванням вітаміну К, ідеально підходить для вирощування анаеробних бактерій. У цьому випадку рекомендується вживання ягнячої крові.

Кампілобактерний агар

Кампілобактерний агар, доповнений 5% овечої крові та 5 антибіотиків (цефалотин, амфотерицин В, триметоприм, поліміксин В та ванкоміцин), є середовищем, яке використовується для виділення кампілобактер єджуні у зразках калу.

Підготовка

Кожен комерційний будинок містить вказівки підготувати літр культурального середовища на звороті контейнера. Відповідні розрахунки можуть бути зроблені для підготовки бажаної кількості, залежно від обраного базового агару.

Зважте і розведіть

Базовий агар зневоднюється (порошок), тому його необхідно розчиняти в дистильованій воді з доведенням до 7,3 рН.

Кількість, вказану вибраним базовим агаром, зважують і розчиняють у відповідній кількості води в колбі, потім нагрівають на помірному вогні і перемішують обертовими рухами, поки весь порошок не розчиняється.

Стерилізувати

Після розчинення стерилізуйте в автоклаві при 121 ° С протягом 20 хвилин.

Збір крові

Виходячи з автоклава, колбу дають охолонути до тих пір, поки температура не буде в межах від 40 до 50 ° C; Це температура, яку підтримує шкіра людини, і в той же час агар ще не затвердів.

Для цього флакон торкається рукою, і якщо тепло переноситься, ідеальною є температура для додання відповідної кількості дефібринованої крові (50 мл на кожен літр агару). Акуратно перемішайте до гомогенізації.

Проходження агрегації крові має вирішальне значення, оскільки якщо це зробити, коли середовище дуже гаряче, еритроцити розпадуться, а середовище не буде використовуватися для спостереження за гемолізом.

Якщо його додати занадто холодно, він згорнеться, і поверхня середовища не буде гладкою, що дозволить правильно забити.

Налийте в чашки Петрі

Подавайте в стерильний посуд Петрі відразу після гомогенізації крові. Приблизно 20 мл наливають у кожну чашку Петрі. Цю процедуру роблять у витяжній шафі або біля пальника.

Під час подачі агару крові у чашках Петрі на поверхні тарілки не повинно залишатися бульбашок повітря. Якщо це станеться, полум'я конфорки Бунзена швидко пропускається по плиті для їх усунення.

Пластини дозволяють затвердіти і зберігати в холодильнику (2-8 ° C), перевернутий до використання. Перш ніж використовувати пластини з агаром крові, їх потрібно загартувати (дозволити досягти кімнатної температури), щоб можна було посіяти їх.

Підготовлені тарілки тривають приблизно 1 тиждень.

Список літератури

1. Байона М. Мікробіологічні умови для культури Helicobacter pylori. Rev Col Gastroenterol 2013; 28 (2): 94-99
2. García P, Paredes F, Fernández del Barrio M. (1994). Практична клінічна мікробіологія. Кадізький університет, 2-е видання. Служба публікацій UCA.
3. "Агар крові". Вікіпедія, Вільна енциклопедія. 10 грудня 2018, 14:55 UTC. 27 грудня 2018, 01:49 en.wikipedia.org.
4. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Мікробіологічна діагностика Бейлі та Скотта. 12 ред. Аргентина. Редакція Panamericana SA
5. CEDIVET Лабораторний ветеринарний діагностичний центр. Гватемала. Доступний за адресою: trensa.com.
6. Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Мікробіологічна діагностика. (5-е видання). Аргентина, редакція Panamericana SA