Сульфит агар являє собою тверда середу селективний і диференціальна культура, спеціально розроблений для ізоляції сальмонела Ентерік підвид enterica серотип Typhi, серед інших видів Salmonella. Засіб відоме як агар BSA за його абревіатурою в англійському вісмутовому сульфітному агарі.
Оригінальна формула сульфітного агару вісмуту була створена в 1927 році Вілсоном та Блером (залізна середа глюкози вісмуту з сульфітом); він містив сульфіт натрію, глюкозу, розчин вісмуту, цитрат амонію, сульфат заліза і агар-агар.
Зростання 48 годин інкубації Salmonella sp на сульфітному агарі вісмуту. Джерело: Pixnio.com Автор: Доктор ВР Ервінг, USCDCP
Сьогодні існує модифікація вихідного середовища, що складається з м'ясного екстракту, м'ясних і казеїнових пептонів, індикатора сульфіту вісмуту, глюкози, динатрію фосфату, сульфату заліза, яскраво-зеленого та агар-агару.
Існує багато засобів для виділення видів сальмонел, але коли йдеться про відновлення серотипу Тіфі, агар вісмутового сульфіту має помітну перевагу перед ними, оскільки у більшості випадків відновлення цього мікроорганізму вкрай низьке або взагалі не виходить. .
Однак потрібно використовувати більше одного типу середовища при спробі виділення ентеропатогенів, оскільки сульфітний агар вісмуту менш ефективний для інших видів сальмонели та для роду Shigella, які гальмуються або розвиваються дуже погано. у цьому агарі.
Слід зазначити, що з усіх видів сальмонел, серотип тифу є одним з найважливіших ентеропатогенів у людини, це єдиний його резервуар. Цей серовар викликає черевний тиф, гастроентерит, бактеріємію та септицемію.
З цієї причини доцільно включати цей агар при аналізі води, калу чи проб їжі, де підозра на його наявність.
Основа
Як і більшість культурних середовищ, сульфітний агар вісмуту містить поживні речовини для сприяння росту бактерій, такі як пептони та екстракт м'яса. Так само глюкоза функціонує як джерело енергії та вуглецю.
Однак не всі бактерії будуть рости на цьому середовищі, оскільки сульфітний агар вісмуту є селективним середовищем. Він містить сполуки, які інгібують ріст грампозитивних мікроорганізмів та певних грамнегативних бактерій. Ці сполуки: індикатор сульфіту вісмуту та яскраво-зелений.
Зі свого боку, динатрієвий фосфат підтримує осмолярність та рН середовища.
Крім того, сульфітний агар вісмуту є диференційованим середовищем завдяки наявності сульфату заліза, який показує утворення H 2 S. H 2 S, що утворюється бактеріями, вступає в реакцію з сульфатом заліза і утворює добре видимий нерозчинний чорний осад.
Нарешті, агар-агар забезпечує тверду консистенцію середовища.
Підготовка
Зважте 52,3 г зневодненого середовища і розчиніть в одному літрі води. Нагрійте суміш до кипіння протягом 1 хвилини при частому помішуванні до повного розчинення. Не перегрівайте занадто сильно. Це середовище не є автоклавним, оскільки екстремальне тепло пошкоджує культуральне середовище.
Дайте охолонути до 45 ° C і струсіть перед подачею в стерильний посуд Петрі. Рекомендується робити плити з хорошою товщиною. Для цього в кожну тарілку потрібно налити 25 мл. Нехай твердне. Оскільки це засіб, яке не стерилізується, нормально запропонувати його негайне використання.
Однак дослідження, проведене Д'аустом у 1977 р., Показало, що краще відновлення тифімуріуму сальмонели та Salmonella enteritidis як середнього віку вісмутового сульфітного агару, що не впливає на показники сероварів Тифі та Паратифи Б.
Д'Ауст рекомендує використовувати тарілки на 4-й день охолодження, хоча попереджає, що в міру старіння селективність зменшується, а штами Proteus vulgaris розвиваються легше.
З цієї причини для сильно забруднених зразків, таких як кал, переважно використовувати свіжоприготовану середу. В іншому випадку вживайте на 4 день його приготування. Інші автори рекомендують використовувати тарілки на наступний день після їх приготування, що зберігаються в холодильнику.
Охолоджені тарілки перед використанням слід загартувати. РН середовища повинен бути 7,5 ± 0,2. Сире середовище бежеве, а підготовлене середовище - зеленувато-сіре опалесцентне.
Програми
Серед зразків, які можна посадити в цю середовище, є зразки фекалій, питної чи стічної води та їжі.
Для поліпшення ізолятів перед посівом на сульфітний агар вісмуту рекомендується провести попередню збагачення відваром лактози та після збагачення тетратіонатним відваром або цистиновим селенітовим відваром.
Пластинки інкубують при 35 ° С ± 0,2 протягом 24 - 48 годин, в аеробіозі.
Характеристика колоній на сульфітному агарі вісмуту
Колонії Salmonella Typhi типово помітні на цьому агарі протягом 24 годин із чорним центром та оточені яскраво-зеленим ореолом. Тоді як через 48 годин вони стають повністю чорними через утворення сірководню.
-Це середовище пригнічує більшість видів роду Shigella.
- S. Typhi та S. arizonae можуть давати дуже схожі колонії.
-Коліформи, які продукують H 2 S, такі як Proteus і Citrobacter, утворюють колонії, подібні до сальмонел, тому необхідно провести біохімічні тести на ідентифікацію.
-Добре добре провести удалення для отримання ізольованих колоній; Це єдиний спосіб спостереження за типовими характеристиками колоній роду Salmonella.
QA
Для контролю стерильності неінокульовану тарілку інкубують при 37 ° С, очікується, що не буде зростання чи зміни кольору.
Для контролю якості відомі штами, такі як:
Escherichia coli ATCC 25922, Salmonella enteritidis ATCC 13076, Salmonella Typhi ATCC 19430, Shigella flexneri ATCC 12022, Enterococcus faecalis ATCC 29212.
Очікується, що кишкова паличка та шигелла флекнері будуть частково пригнічені розвитком зеленувато-коричневих та коричневих колоній відповідно. Тоді як обидва сальмонели повинні мати чудовий розвиток з чорними колоніями з металевим блиском, і нарешті Enterococcus faecalis повинен бути повністю пригнічений.
Список літератури
- Wilson, W. та EM McV. Блер. Використання сульфітового заліза із сульфіту глюкози для виділення B. typhosus та B. proteus. Журнал гігієни, 1927; 26 (4), 374-391. Отримано з .jstor.org
- D'aoust JY. Вплив умов зберігання продуктивності агару сульфіту вісмуту. J Clin Microbiol. 1977; 5 (2): 122–124. Доступно у: ncbi.nlm.nih.gov
- IVD Лабораторії. Вісмуто-сульфітний агар згідно WILSON-BLAIR. 2009. Доступний за адресою: BismuthSulfitagar_span_Jan_2009% 20 (2) .pdf
- Мультимедійні лабораторії. Сульфітовий агар вісмуту. 2017. Доступний за адресою: himedialabs.com
- Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Мікробіологічна діагностика Бейлі та Скотта. 12 ред. Редакція Panamericana SA Аргентина.
- Morales R, de la Cruz D, Leyva G та Ybarra M. Бактеріологічна якість сировинного козячого молока, виробленого в м. Міравалль, Пуебла. Rev Mex de Ing Quím 2012; 11 (1): 45–54