КОАГУЛАЗНИЙ ТЕСТ: ОБГРУНТУВАННЯ, ПРОЦЕДУРА ТА ВИКОРИСТАННЯ - БІОЛОГІЯ - 2025

Тест на коагулазу - це лабораторна методика, яка використовується для виявлення наявності ферменту коагулази. Цей фермент має властивість згортати плазму. Лоб у 1903 р. Першим описав цей фермент.

Цей тест проводиться на грампозитивних, каталаз-позитивних коках, що дозволяє відрізнити штами золотистого стафілокока від решти стафілококів, оскільки це єдиний мікроорганізм клінічного значення, який його продукує.

Обидва зображення виявляють позитивний тест на коагулазу. Джерело: Зліва зліва: Philippinjl. Правильне зображення: Фото зроблено автором MSc. Маріельса Гіл.

У цьому сенсі члени родини Staphylococaceae, які виявляють негативний аналіз, часто називають коагулаз-негативним стафілококом.

Існують деякі штами, крім S. aureus, які можуть продукувати коагулазу, такі як Staphylococcus schleiferi spp coagulans, S. hyicus, S. intermedius та S. delphini.

Однак перші три мають клінічне значення на ветеринарному рівні і їх дуже рідко можна зустріти як збудника інфекцій у людей, тоді як S. delphini зустрічається лише у морських середовищах.

Крім того, їх легко диференціювати, оскільки S. hyicus і S. intermedius не ферментують манітол, а S. schleiferi spp coagulans не ферментує мальтозу або трегалозу, тоді як S. aureus ферментує ці вуглеводи.

Наявність ферменту коагулази пов'язане з вірулентністю штамів. Однак ця теорія розпадається, оскільки спостерігаються інші вірулентні коагулазонегативні види, здатні викликати значні інфекції.

Основа

Інтерпретація

Аглютинація протягом 5-20 сек (сильний позитивний тест).

Змінна аглютинація, що відбувається між 20 секундами і однією хвилиною (затримка позитивного тесту).

Певна ступінь аглютинації через одну хвилину (сумнівні докази). Рекомендується повторити тест або підтвердити трубовим методом.

Аглютинації немає (негативний тест).

Результат із SSF. Він завжди повинен дати негатив, якщо він автоматично дає позитивний результат, результат тесту буде визнаний недійсним.

-Випробування на коагулазу YouTube

матеріали

-Стерильна пробірка

-Плазма

-Баня Марії при 37 ° С.

Техніка

Піпетку 0,5 мл плазми в пробірку розміром 12 х 75 стерильною піпеткою Завантажте платинову петлю з 2 до 4 чистими колоніями для вивчення з твердої культури протягом 18 - 24 годин і розчинення в плазмі. ретельно перемішують і інкубують при 37 ° С протягом 4 годин.

Огляньте трубку в перші години, не струшуючи її, просто акуратно нахиліть її. Якщо згусток все ще не помічений, його можна спостерігати кожні 30 хвилин, поки не закінчиться 4 години. Якщо через 4 години він все ще негативний, його можна залишити до 24 годин, але при кімнатній температурі. Поспостерігайте і повідомляйте про результат.

Виходячи з досвіду, деякі мікробіологи рекомендують використовувати 500 мкл бактеріальної суспензії з 18-годинної культури в рідкій середовищі для проведення тесту.

Здається, вони пропонують швидші та надійніші результати, ніж при емульгуванні колоній з твердих середовищ, особливо якщо використовували людську плазму, отриману з банку крові.

Застосування штамів з відвару дозволяє розбавити можливу присутність антистафілококових антитіл людини в плазмі крові, які можуть пригнічувати дію коагулази.

Інтерпретація

Якщо виявляється згусток, який охоплює всю рідину (повне згортання) або згусток, що не має нічого в решті рідини (часткове згортання), це слід вважати позитивним тестом.

Якщо не утворюється згусток, тобто суспензія залишається однорідною, тест негативний.

-Коагулазний тест з використанням фібриногену

Фібриноген використовується так само, як плазма, і використовується як для пробірок, так і для пробірок. Дійте так, як описано для плазми, і інтерпретуйте так само.

Використовуйте

Застосовується для диференціації золотистого стафілокока від коагулазних стафілококів.

QA

Доступні свіжі культури штаму S. aureus, які можна використовувати як позитивний контроль. Штам S. epidermidis також доступний як негативний контроль.

Обмеження

-Позитивний тест не слід залишати в інкубації протягом 24 годин, оскільки S. aureus виробляє фібринолізин, який розчиняє згусток.

-Для надійного тесту слід використовувати свіжу або знову відновлену плазму, а також важливо використовувати свіжі бактеріальні культури (від 18 до 24 год). Це дозволяє уникнути помилкових негативів.

-Тест повинен бути виконаний разом з негативним та позитивним контролем.

- Деякі тверді середовища можуть втручатися в тест на коагулазу. Не рекомендується використовувати колонії з солоного манітолового агару.

-Якщо використовується цитризована плазма, рекомендується помістити 5 одиниць гепарину на мл плазми, щоб уникнути помилкових позитивних результатів. Це тому, що деякі мікроорганізми, крім S. aureus, можуть розщеплювати цитрат і викликати згортання плазми. У цьому випадку доцільно зробити тест на грам та каталазу.

-Важливо, в тесті з пробіркою стежити за реакцією кожні 30 хвилин, оскільки є штами S. aureus, які виробляють високі концентрації фібринолізину і швидко розріджують новоутворений згусток. Уникайте помилкових негативів.

-Коли стежити за тестом, уникайте різкого струшування пробірки, це може зруйнувати ініціацію утворення згустку, яка не буде відновлена ​​згодом, спричинивши помилкові негативи.

Список літератури

1. Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Мікробіологічна діагностика. 5-е видання. Редакція Panamericana SA Аргентина.
2. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Мікробіологічна діагностика Бейлі та Скотта. 12 ред. Редакція Panamericana SA Аргентина.
3. Мак Фаддін Дж. (2003). Біохімічні тести для виявлення бактерій клінічного значення. 3-е вид. Редакція Panamericana. Буенос-Айрес. Аргентина.
4. Pro-Lab Laboratories. Кролик згортає плазму. Доступно за адресою: pro-lab.com
5. "Коагулаза". Вікіпедія, Вільна енциклопедія. 12 лютого 2019, 04:23 UTC. 22 квітня 2019, 15:50 wikipedia.org.