ОГОЛОШЕНИЙ АГАР: ОБГРУНТУВАННЯ, ВИКОРИСТАННЯ ТА ПІДГОТОВКА - БІОЛОГІЯ - 2025

CLED агар (цистин-Лактоза-Електроліт-Дефектний) являє собою твердий культуральне середовище диференціал, який використовується для діагностики інфекцій сечових шляхів. Склад культурального середовища розроблений для хорошого росту сечових патогенів і ідеально підходить для кількісного визначення одиниць, що утворюють колонії (CFU).

Середовище культури CLED неселективне, оскільки в ньому можуть рости грамнегативні та грампозитивні мікроорганізми. Але це не проблема, оскільки більшість ІПС спричинені лише одним типом мікроорганізмів.

CLAR агар

У разі полімікробних інфекцій можна отримати 2 або 3 різних бактерії, але це дуже рідко і більшість часу це заражені зразки.

Серед грамнегативних бактерій, які можуть рости в цьому середовищі, є бацили, що належать до сімейства Enterobacteriaceae, та інші ентеробактерії, серед яких найчастіше виділяються уропатогени у зразках сечі: Escherichia coli, Klebsiella pneumoniae, Proteus mirabilis, Morganella morganii, Pseudomonas aeruginosa, серед інших.

Так само серед грампозитивних бактерій, які можуть рости в цьому середовищі, є Staphylococcus aureus, Staphylococcus saprophyticus, Enterococcus faecalis, Streptococcus agalactiae, Corynebacterium sp, Lactobacillus sp і навіть дріжджі, такі як комплекс Candida albicans.

Однак завдяки хімічному складу середовища він не дозволяє наростити деяких вимогливих сечостатевих збудників, таких як Neisseria gonorrhoeae, Gardnerella vaginalis, серед інших.

Обґрунтування агарів CLED

Середовище культури CLED має в якості джерела енергії м'ясний екстракт, панкреатичний гідролізат казеїну та гідролізат желатину. Вони забезпечують поживні речовини для розвитку невибагливих бактерій.

Він також містить цистин, амінокислоту, яка дозволяє вирощувати коліформи, що відрізняються їх невеликими розмірами.

Так само він містить лактозу як ферментований вуглевод, тому ця середовище є диференційованою; здатність відрізнити ферментуючі бактерії від нелактозного бродіння.

Заквашувальні бактерії викликають зміну pH середовища при виробництві кислот, розвиваються жовті колонії, тоді як неферментуючі бактерії не утворюють змін у середовищі, тому вони набувають колір початкового агару, зелений.

Реакція бродіння виявляється завдяки наявності показника рН, який у цьому середовищі бромтимоловий синій.

З іншого боку, низька концентрація електроліту середовища гальмує типовий інвазивний ріст роду Proteus, що називається ефектом рою. Це створює перевагу перед іншими засобами масової інформації, оскільки дозволяє здійснювати підрахунок CFU, у тому числі за наявності роду Proteus.

Однак низька концентрація електролітів гальмує ріст деяких видів роду Shigella, що є недоліком порівняно з іншими середовищами.

Обґрунтування CLAR-агару (Бевіс)

Існує варіант або модифікація цього середовища, виготовленого Бевісом, який включив кислотний фуксин (показник Андраде) в початковий склад. Він працює в поєднанні з бромотимоловим синім, щоб диференціювати бродіння від неферментуючих бактерій.

Різниця між звичайним та модифікованим середовищем полягає у кольорі, який набувають колонії. Що стосується бактерій, що ферментують лактозою, колонії стають червонувато-оранжевими з рожевим або червоним ореолом, тоді як неферментуючі - синювато-сірі.

Програми

CLED-агар використовується виключно для висівання проб сечі. Застосування цього засобу особливо часто зустрічається в європейських лабораторіях, тоді як в Америці воно менше використовується.

Збір зразків повинен відповідати певним параметрам для отримання надійних результатів, включаючи:

• Не приймайте антибіотики перед відбором проб.
• Переважно брати сечу спочатку вранці, оскільки вона є більш концентрованою, коли неможливо взяти пробу інвазивними методами.
• Перед тим, як взяти пробу, добре вимийте геніталії.
• Відмовтеся від першого потоку сечовипускання, а потім поставте ємність.
• Зберіть 25 - 30 мл сечі у добре маркованій стерильній ємності.
• Відвезти негайно до лабораторії, оточеної льодом.
• Її слід обробляти протягом 2 годин після видачі або зберігати в холодильнику при 4 ° C протягом не більше 24 годин.

Посів проб сечі

Зразок сечі слід розвести 1:50.

Для розведення помістіть 0,5 мл сечі пацієнта і розведіть 24,5 мл стерильного фізіологічного розчину.

Відміряйте 0,1 мл розведеної сечі та поверхневого розповсюдження за допомогою дригальського шпателя на середовищі CLED. Це найкращий спосіб посіву для підрахунку колоній. З цієї причини його використовують у зразках сечі, оскільки результати повинні бути виражені у КОЕ / мл.

Для кількісного визначення отриманих колоній, поступіть так: підрахуйте колонії на тарілці та помножте на 10, а потім на 50. Це дає вам кількість КУО / мл сечі.

Інтерпретація

Кількість вище 100 000 КУО / мл-Вказує на сечову інфекцію

Кількість нижче 1000 КУО / мл- Без зараження

Налічує від 1000-10 000 КУО / мл - Сумнівні, можливі забруднення, повторний відбір проб.

Посвідчення особи

Колонії, вирощені на CLAR-агарі, повинні мати грам і залежно від морфоторіальних характеристик мікроорганізму здійснюється певна субкультура.

Наприклад, якщо це грамнегативна паличка, вона буде висіватися на агар MacConkey, де підтверджено бродіння лактози чи ні. Крім того, для проведення тесту на оксидазу приєднують поживний агар.

У випадку, якщо в Грам виявляються грампозитивні кокки, його можна субкультивировать на солоному манітольному агарі та на поживному агарі. В останньому проводиться випробування на каталазу. Нарешті, якщо спостерігатимуть дріжджі, його буде висівати на агар Сабуро.

Багато лабораторій уникають використання середовища CLED і вважають за краще використовувати лише агар крові, МакКонкі та поживний агар для зразків сечі.

Підготовка

У колбі з літром дистильованої води розчиняють 36,2 г порошку CLAR-агару. Після 5 хвилин стояння нагрійте ресуспендований агар, постійно перемішуючи до кипіння протягом 1 хвилини.

Потім стерилізують при 121 ° С протягом 15 хвилин в автоклаві. Після закінчення часу його виймають з автоклава і дають йому охолонути до температури 45 ° C. Згодом подається 15-20 мл у кожну стерильну чашку Петрі.

Процедуру подачі тарілки необхідно проводити всередині ламінарної витяжки або перед пальником Bunsen, щоб уникнути забруднення.

Плити, що подаються, залишають для затвердіння, розташовують у перевернутій стійці і зберігають у холодильнику (2-8 ° C) до використання.

Кінцевий рН підготовленої середовища повинен бути 7,3 ± 0,2.

Список літератури

1. Рекомендації щодо мікробіологічної діагностики сечової інфекції. чил. інфектол. 2001 р .; 18 (1): 57-63. Доступно за адресою: scielo.org.
2. Панчі Дж. Ідентифікація мікробного агента, що викликає інфекції сечовивідних шляхів у стаціонарів, які проходять катетеризацію сечового міхура. 2016. Бакалаврська робота для отримання ступеня бакалавра клінічної лабораторії. Технічний університет Амбато. Еквадор.
3. Britannia Laboratories. CLED-середовище. Доступно за адресою: britanialab.com.
4. Renylab Laboratories. Інструкція по застосуванню, CLED Agar. 2013 Доступно за адресою: es.renylab.ind.br.
5. Культимовані лабораторії. Основний посібник з мікробіології. Доступно за адресою: ictsl.net.
6. Muñoz P, Cercenado E, Rodríguez-Créixems M, Díaz MD, Vicente T, Bouza E. Варіант CLAR-агару в режимі культивування сечі. Перспективна та порівняльна оцінка. Діагнійний мікробіол, інфікований дис. 1992; 15 (4): 287-90.
7. García P, Paredes F, Fernández del Barrio M. (1994). Практична клінічна мікробіологія. Кадізький університет, 2-е видання. Служба публікацій UCA.