КАМЕРА НОЙБАУЕРА: ІСТОРІЯ, ХАРАКТЕРИСТИКИ, ВИКОРИСТАННЯ - БІОЛОГІЯ - 2025

Камера Нойбауера , гематометр або гемоцитометр - це лабораторний прилад, що складається із спеціальної товстої скляної пластини. Ця камера використовується для підрахунку деяких типів клітин, таких як еритроцити, лейкоцити та тромбоцити, хоча її можна використовувати для підрахунку спор, сперми, паразитів тощо.

У ньому представлені деякі дуже своєрідні характеристики, оскільки він складається з 3 зон, центральної для підрахунку та двох опорних зон. Кожна камера має дві зони підрахунку чи перехрестя, одну вгорі та одну внизу.

Камера Нойбауера. Джерело: SantiBadia. Відредаговане зображення.

Вони мають кілька підрозділів у вигляді сітки. Площі підрахунку - середні квадрати, знайдені в 4 кутах обох решіток плюс центральна площа.

Збірка камери повинна виконуватися дуже обережно, оскільки будь-яка деталь впливає на кількість комірок. Є багато помилок, які можуть бути допущені, але якщо будь-яка з них трапиться, камеру потрібно розібрати, очистити та знову зібрати. Основні помилки включають наступне:

Переповнення камери або недосипання, даючи камері висохнути, спроба видалити зайву рідину марлею, нахилити камеру при транспортуванні, наповнити брудну або мокру камеру, не змішуючи розрідження або пробу, серед інших. Усі ці помилки призведуть до нереального значення.

Історія

Камера Neubauer - це точний прилад, і процес виготовлення проходить суворий контроль якості. Він був створений для точного підрахунку частинок або утворених елементів на мм ³ , таких як клітини в різних рідинах. Його делікатна графіка вирізана алмазним олівцем.

Характеристики камери Нойбауера

Вся камера має розмір звичайного слайда, щоб його можна було розмістити на сцені мікроскопа.

Камера складається з трьох центральних прямокутних поверхонь (a, b, c). У зоні «b» розташована зона R або лічильна зона, яка також називається сіткою. По одному з боків камери, розділеному зоною "d".

Графічна схема палати Нойбауера. Джерело: Практичний посібник з гематології. Школа біоаналізу Університету Карабобо, Венесуела.

Кожна сітка - це відполірована область, яка містить гравіровану площу рахунку. Він складається з квадрата площею 9 мм ² і внутрішньо розділений на 9 квадратів з площею 1 мм ² кожна. Чотири кутових квадрати поділено на 16 менших квадратів (площею 0,0625 мм ² ).

Ці сітки утворені низкою міліметрових ліній, які перетинаються одна з одною, складаючи ідеально схоплені сітки, визначені для визначених вимірювань. Ці лінії були вигравіровані алмазним наконечником.

Покращений ретикулум Нойбауера. Джерело: Практичний посібник з гематології Школи біоаналізу Університету Карабобо, Венесуела.

Чотири сторони відповідають площі підрахунку. Саме з цих боків або кутів підраховується більшість клітин (еритроцити та лейкоцити), а тромбоцити - в центральній області.

Центральна зона має більше поділів, вона складається з 1 мм ² квадрата, розділеного на 25 квадратів, що мають площу поверхні 0,04 мм ^{2 у} кожному. Вони в свою чергу діляться на 16 сіток площею 0,0025 мм ² .

Опис вдосконаленого ретикулума Нойбауера. а) площа кутів, б) центральна площа, в) серединна площа центральної площі. Джерело: Практичний посібник з гематології Школи біоаналізу Університету Карабобо, Венесуела.

Зони "a" і "c" служать підтримкою для розміщення спеціального об'єкта покриття, який називається гематометричним покриттям або гематиметром.

Висота між фольгою та лічильною поверхнею - 0,1 мм. Вимірювання поверхні поверхні ящиків, а також висоти камери та розведення зразка - це дані, необхідні для проведення остаточних розрахунків.

Програми

Він використовується для підрахунку клітин. Це особливо корисно в області гематології, оскільки дозволяє підрахувати 3 серії клітин крові; тобто еритроцити, лейкоцити та тромбоцити.

Однак його можна використовувати і в інших областях, наприклад, для підрахунку сперми, спор, бактерій або інших важливих предметів залежно від типу зразка.

Як використовувати?

Підготовка зразків

Для виконання підрахунку клітин, як правило, починають з попереднього розведення. Приклад: для підрахунку лейкоцитів готують розведення 1:20 з рідиною Турка. Розведення добре перемішують перед завантаженням піпетки та монтажем камери Нойбауера.

Бувають випадки, коли розведення 1:20 недостатньо для підрахунку. Наприклад, у пацієнтів, які страждають певними видами хронічного лейкозу. У цих випадках слід робити більш високі розведення, такі як 1: 100.

Якщо, з іншого боку, кількість дуже низька, як при важких лейкопеніях, для концентрації проби можна зробити менші розведення. Приклад: можна зробити розведення 1:10.

Зміни, що вносяться, впливають на розрахунки.

Монтаж камери Neubauer

Камера Нойбауера збирається, розміщуючи гематометричну гірку в центральній області. Обидва повинні бути дуже чистими і сухими. Для розміщення ламелі її беруть за краї і акуратно опускають на камеру.

Це заповнюється, розміщуючи наконечник автоматичної піпетки або піпетки Thoma під кутом 35 ° на межі зони завантаження. Рідина відводиться плавно, а область завантаження заповнюється капілярністю. Це робиться з обох сторін для завантаження двох перехрестя.

Сітки не повинні перевантажуватись, і їм також не слід відмовлятись у рідини. Навантаження має бути точним. Важливо, щоб начинка робилася однорідно, тобто не повинно бути бульбашок.

Після того як камера збирається, її залишають відпочивати на 2 хвилини, щоб клітини осіли на дно, а їх візуалізація та підрахунок легші.

Після закінчення часу його встановлюють на сцену світлового мікроскопа для спостереження. Спочатку він орієнтований на 10-кратну ціль, а при необхідності потім переходить до 40X.

Для поліпшення його візуалізації зменшується проходження світла з мікроскопа. Для цього конденсатор опускають і діафрагму трохи закривають.

Підрахунок

Для підрахунку лейкоцитів або лейкоцитів необхідно підрахувати всю поверхню чотирьох середніх кутових квадратів та центральну площу кожного ретикулума.

Відлік починається з квадрата у верхньому лівому куті. Ви починаєте з першого квадрата першого ряду, тобто зліва направо, поки не досягнете протилежного кінця.

Там ви спускаєтесь і оглядаєтесь праворуч ліворуч, поки не досягнете іншого кінця і так далі, комірки в межах кожної сітки рахуються зигзагоподібно. Обчислюється 16 сіток кожного середнього квадрата.

Щоб уникнути підрахунку комірки двічі, існують правила щодо комірок, які розташовані на граничних лініях кожної сітки. Клітини в лівій і верхній рядках підраховуються, а комірки в правій і нижній лінії ігноруються.

Має бути доступний ручний лічильник комірок, щоб оператор натискав клавішу пристрою стільки разів, скільки спостерігається комірок. За допомогою лічильника оператор може рахувати, не відриваючись від мікроскопічного поля. Наприкінці підрахунку ви побачите загальну кількість підрахованих комірок.

Розрахунки

Для розрахунків можна приступити декількома способами. Один решітка може бути підрахована або обидва можуть бути підраховані, і обидва - усереднені. У цих двох ситуаціях підраховані комірки повинні бути помножені на коефіцієнт, який у цьому випадку буде 40. І таким чином виходить загальна кількість на мм ³ .

Але якщо дві сітки підраховані, а середня кількість не взята, її треба помножити на інший коефіцієнт, в даному випадку на 20.

-Коефіцієнт множення

Ось як обчислюється коефіцієнт множення.

Для розрахунків враховуються різні дані, включаючи титр розведення, висоту камери та відлічену площу.

Розведення

Стандартне розведення, що використовується, становить 1:20 для кількості лейкоцитів.

Висота камери

Висота між камерою та аркушем клітин крові становить 0,1 мм.

Розрахована площа

Якщо рахувати 5 квадратів площею 1 мм ² , це означає, що загальна площа підрахунку дорівнює 5 мм ² . Ці дані необхідно помножити на висоту камери, щоб отримати загальний підрахований об'єм. Тобто 5 мм ² х 0,1 мм = 0,5 мм ³ .

Формули та розрахунки

З даних, які ми маємо, сказано:

Якщо в 0,5 мм ³ - немає --- кількість комірок підраховується

В 1 мм ³ --- буде - X n ° осередків

X № клітин = (кількість комірок, що рахуються х 1) / 0,5 мм ³

Але також слід враховувати розведення. Тому формула така:

(кількість комірок, що підраховуються х 1) х 20 / 0,5 мм ³

Нарешті, підсумовуючи, кількість підрахованих клітин можна помножити на 40. Таким чином, ^{отримується} значення лейкоцитів на мм ³ .

Якщо підрахувати дві сітки, то дані для відліченої площі змінюються, що в цьому випадку складе 10 квадратів, тобто 10 мм ² . І загальний відлічений обсяг 1 мм3. Формула буде такою:

(кількість комірок, підрахована х 1) х 20/1 мм ³

Тому в цьому випадку коефіцієнт множення був би 20.

Помилки

-Якщо при завантаженні камери вона перевищена або перевищена рідиною, висота камери буде змінюватися. Це призводить до того, що кількість рахунків перевищує реальну річ. Якщо ви спробуєте видалити надлишки за допомогою марлі або бавовни, це величезна помилка. Ця дія змусить клітини зосереджуватися, збільшуючи кількість.

-Якщо він завантажений погано, кількість буде нижчою за реальну.

-Якщо камера встановлена ​​та дана висохнути, її більше неможливо порахувати, оскільки вона дасть неправильні результати.

-Якщо розведення зразка не буде добре перемішане перед завантаженням камери, існує ризик помилки в зчитуванні, оскільки клітини не будуть однорідно розподілені. Тому буде нижча або більша концентрація клітин, залежно від того, відбирають пробу з поверхні рідини або з дна пробірки відповідно.

-Наявність бульбашок зменшує кількість рідини, яка повинна потрапити в ретикулум, перешкоджаючи правильній візуалізації та розподілу клітин. Все це суттєво впливає на результати.

-Під час підрахунку не дивіться вгору з мікроскопа, поки кожен великий квадрат не буде заповнений, щоб не загубитися.

-Однією причиною помилки є нахил камери після монтажу. З цієї причини ступінь мікроскопа необхідно ретельно підняти.

Рекомендація

Якщо з якоїсь причини ви виявите ненормальність в наповненні камери, рекомендується розібрати цей препарат, очистити камеру і зібрати з нуля.

Будьте обережні при чищенні камери, щоб не подряпати поперечні волоски. З іншого боку, майте на увазі, що гематометричний слайд делікатний і тендітний. Неправильне поводження може зламати це.

Перш ніж почати рахувати, переконайтеся, що клітини добре розподілені. Нерівномірний розподіл клітин відбувається внаслідок поганого змішування або розведення зразків. Якщо це станеться, збірку необхідно повторити.

Один із способів дізнатися, чи добре розподіляються клітини, це порівняння підрахунку кожного великого квадрата, кількість комірок, що рахуються для кожного квадрата, не повинна перебільшено відрізнятися від однієї до іншої.

-Якщо кількість лейкоцитів вище 50 000 мм ^3, доцільно повторити підрахунок, зробивши більше розведення.

-Якщо ви змінюєте розведення, ви повинні перерахувати коефіцієнт множення, оскільки це впливає на формулу.

Список літератури

1. Cardona-Maya W, Berdugo J, Cadavid A. Порівняння концентрації сперми за допомогою камери Маклера та камери Нойбауера. Actas Urol Esp 2008; 32 (4): 443-445. Доступно на: scielo.
2. Камера Нойбауера. (2018 р., 27 березня). Вікіпедія, Вільна енциклопедія. Дата консультації: 04:10, 23 червня 2019 від es.wikipedia.org
3. Менези A, Rojas L, Sifontes S. Застосування альтернативного методу підрахунку палати Нойбауера для визначення концентрації Trichomonas vaginalis. Преподобний Cub Med Trop 2001; 53 (3): 180–8. Доступно за адресою: researchgate.net
4. Гомес-Перес Роальд Е. Аналіз спермограми. Преподобний Венеція. Ендокринол. Метаб. 2007 р .; 5 (2): 19-20. Доступно на: ve.scielo
5. Практичний посібник з гематології Школи біоаналізу Університету Карабобо. Венесуела, 1998