EC БУЛЬЙОН: ОСНОВА, ПІДГОТОВКА ТА ВИКОРИСТАННЯ - БІОЛОГІЯ - 2025

ЄС бульйону або бульйону кишкової палички є селективним культурального середовища рідини. Цей засіб рекомендовано Стандартними методами для підрахунку загальної та фекальної коліформ, за найбільш ймовірною методикою числення (MPN) у зразках води та їжі, де головним агентом є Escherichia coli.

EC бульйон складається з триптеїну, лактози, жовчних солей, дикальфосфату, монокалію фосфату, хлориду натрію та води. Його формула стратегічно розроблена для сприяння зростанню загальної та фекальної коліформи та запобігання розвитку інших супутніх мікроорганізмів.

Образне зображення препарату ЕС бульйону. Джерело: Pixabay.com

Бактерія Escherichia coli - головна калова коліформа, присутня як забруднювач у воді та харчових джерелах, є причиною важливих шлунково-кишкових розладів.

Слід зазначити, що існує багато серотипів кишкової палички; Серед них можна відзначити ентерогеморагічний (EHEC), ентероінвазивний (EIEC), ентеопатогенний (EPEC), ентеротоксигенний (ETEC) та ентероагрегативний (EAEC).

Цей засіб має можливість дозволяти розвивати їх усі, але не маючи можливості їх відрізняти один від одного. Для цього потрібно додаткове тестування.

Мікробіологічне дослідження води та їжі за найбільш ймовірною кількістю (MPN) для пошуку загальної та фекальної коліформи - це протокол, що складається з декількох фаз; передбачувана фаза, фаза підтвердження та фаза завершення. Відвар ЄС застосовують у фазі підтвердження.

Основа

EC бульйон

Середовище ЕК засноване на забезпеченні поживними елементами, необхідними для оптимального розвитку тотальної та фекальної коліформи, куди входять бактерії кишкової палички.

Ці харчові елементи забезпечуються триптеїном, будучи прекрасним джерелом пептидів та амінокислот. Крім того, він також містить лактозу - ферментований вуглевод, який забезпечує енергію і дозволяє показати, чи бактерії виробляють газ.

З іншого боку, середовище містить солі жовчі, які надають селективний характер, оскільки пригнічує ріст грампозитивних мікроорганізмів, які можуть бути присутніми в пробі.

Так само діфосфат фосфату і монокалію фосфат діють як система збалансування рН. Ця система необхідна, оскільки лактоза, яка міститься у бульйоні, має тенденцію до підкислення середовища, коли вона бродить мікроорганізмами, але це компенсується фосфатними солями.

Тому ці елементи є важливими, оскільки неконтрольована кислотність може впливати на правильний розвиток шуканих мікроорганізмів.

Зі свого боку хлорид натрію стабілізує середовище осмотично, тоді як вода є розчинником для присутніх розчинних речовин і надає рідкій консистенції середовищі.

Новобіоцин модифікований бульйон EC

Окренд і Роза створили різноманітний бульйон з ЄС, який називають новобіоциновим модифікованим відваром ЄС. Модифікація полягала у зменшенні концентрації жовчних солей та додаванні 20 мг / дл новобіоцину.

Ця модифікація сприяє відновленню ентерогеморагічних штамів Escherichia coli (O157: H7).

Цей бактеріальний серотип викликає важкий геморагічний коліт, який може призвести до гемолітичного уремічного синдрому (HUS); що в свою чергу може породжувати гостру ниркову недостатність, з високим рівнем смертності, який може досягати до 50% у літніх людей.

Через щорічну захворюваність та смертність, спричинену цією бактерією внаслідок споживання забрудненої їжі, Міністерство сільського господарства США (USDA) настійно рекомендує використовувати цей засіб.

Підготовка

EC бульйон

Зважте 37,4 г зневодненого середовища і розчиніть в 1 літрі дистильованої води. Суміш потрібно дати постояти 5 хвилин. Згодом у джерелі тепла він закінчується розчиненням, часто перемішуючи.

Після розчинення він розподіляється в попередньо обумовлені пробірки з трубкою Дарема всередині. Стерилізуйте в автоклаві при 121 ° С протягом 15 хвилин.

РН середовища повинен бути 6,9 ± 0,2. Колір зневодненого середовища - бежевий, а підготовлене середовище - світло-бурштиновий.

Відвари зберігають у холодильнику до вживання. На час використання відвари повинні бути кімнатної температури.

З іншого боку, бульйон з ЕС також можна готувати в подвійній концентрації.

Новобіоцин модифікований бульйон EC

Зважте 36,7 г зневодненого середовища і розчиніть в 1 літрі води. Решта препарату така ж, як описана вище.

Використовуйте

Тотальний і фекальний коліформний аналіз

EC бульйон ідеально підходить для підтверджуючої фази дослідження коліформ за методом NMP, як у пробах води, так і у фармацевтичних продуктах та продуктах харчування.

Мутні, газопродуктивні відвари лактози, отримані в передбачуваній фазі, слід повторно висівати в 2% яскраво-зелені відвари жовчі та відвар ЄС.

Для загальних кольорових форм бульйони ЄС інкубують аеробно протягом 24 - 48 годин при температурі 37 ° C, а для каліформних коліформ - інкубують аеробно протягом 24 - 48 годин при 44 ° C.

В обох випадках це трактується так: мутні труби з видобутком газу вважаються позитивними. Якщо видобуток газу не відбувається протягом 24 годин, інкубація триває до 48 годин.

Відвари, сприятливі до ЕК, переходять у повну підтверджуючу фазу, яка складається з повторного висіву на селективні середовища, такі як агар Mac Conkey, агар EMB або Endo агар.

Якщо відвар застосовується на основі новобіоцину, EC, позитивні пробірки рекомендується пересаджувати на агар Mac Conkey сорбітом.

QA

Кожна партія підготовленого середовища повинна контролюватися якістю. По-перше, слід оцінити стерильність середовища. У цьому сенсі один або два відвари інкубують без щеплення в аеробіозі протягом 24 годин при 37 ° С. Очікуваний результат - прозорий відвар, без помутніння або зміни кольору.

По-друге, слід оцінити зростання відомих штамів, для цього можна використовувати такі бактерії: Escherichia coli, ATCC 8739, Escherichia coli ATCC 25922, Salmonella typhimurium ATCC 14028.

У всіх випадках очікується задовільний розвиток мікробів, спостерігаючи похмурий бульйон з виробленням газу для кишкової палички та відсутність газу для сальмонели.

Інші штами, які можуть бути включені до контролю: Staphylococcus aureus ATCC 25923, Enterococcus faecalis ATCC 29212. Ці штами повинні бути повністю пригнічені.

рекомендації

-Розміщення труб Дарема має важливе значення для дослідження коліформ.

-Розподіліть середовище в пробірках перед стерилізацією, ніколи не після.

-Не застосовувати, якщо засобу більше 3 місяців.

-Не застосовувати, якщо спостерігаються якісь зміни звичних характеристик середовища.

Список літератури

1. Britannia Laboratories. Середня ЄС. 2015. Доступний за адресою: britanialab.com
2. Ентерогеморагічна кишкова паличка. Центр продовольчої безпеки та охорони здоров'я. 2010. Доступний за адресою: cfsph.iastate.edu
3. Корпорація Neogen. Середовище ЄС. Доступно за адресою: foodsafety.neogen.com
4. Неоген. Новобіоцин модифікований середовищем ЕС. Доступно за адресою: foodsafety.neogen.com
5. Jure M, Condorí S, Leotta G, Chinen I, Miliwebsky E, Allori C, Aulet O, de Castillo M. Виявлення, виділення та характеристика кишкової палички, яка виробляє токсин шиги зі свіжого меленого м'яса у м. Консепсьйон, провінція з Тукумана. Microbiol Rev Arg; 2010, 42 (4): 284-287. Доступно за адресою: www.scielo.org.