ЛАКТОЗОВАНИЙ ВІДВАР: ОСНОВА, ПІДГОТОВКА ТА ЗАСТОСУВАННЯ - БІОЛОГІЯ - 2025

Бульйон лактози є засобом , НЕ - селективної середовища рідкої культури , використовуваним головним чином в якості більш попереднього збагачення в ізоляції штамів Salmonella від мікробіологічного аналізу в оброблені харчові продукти, молочні продукти або воду. Це рекомендує Міжнародна комісія з мікробіологічних специфікацій харчових продуктів (ICMPF).

Засіб містить ферментативний переварювач желатину, м'ясний екстракт і лактозу, речовини, необхідні для росту бактерій. Крім того, лактоза є ферментованим вуглеводом, тому деякі коліформи здатні руйнувати її при виробництві газу.

Відвари з відмороженням. Джерело: Фото зроблено автором MSc. Маріельса гіл

З цієї причини відвар з лактози рекомендується Американською асоціацією громадського здоров’я (APHA) для передбачуваного дослідження бактерій загальної та фекальної коліформ, кваліфікуючи це як відмінну альтернативу для заміни відвару триптози лаурилсульфатом у стандартній техніці найбільш вірогідного числа (MPN). ), що використовується для мікробіологічного аналізу проб харчових, молочних та поверхневих вод, підземних, рекреаційних, побутових та промислових відходів.

Основа

Для мікробіологічного аналізу деяких зразків важливим є попередній етап збагачення, щоб можна було відновити конкретний мікроорганізм, який може перебувати в дуже низькій кількості або в несприятливих умовах, які порушують або мінімізують його життєздатність.

Це стосується сушених та оброблених продуктів, можливо забруднених Salmonellas sp. У цих випадках, якщо бактерії є, вони зазнали фізичних та хімічних зловживань у процесі виробництва продукту.

Таким чином, що мікроорганізми піддаються впливу таких несприятливих факторів, як дегідратація, вплив інгібіторних або токсичних продуктів, а також перекриття, що виникає внаслідок присутності інших бактерій у більшій кількості, серед інших.

У цьому сенсі лактозна відвар має відновлюючу дію на пошкоджені структури мікроорганізму, викликаючи його відновлення та розмноження таким чином, щоб його можна було виявити.

Так само лактозна бульйон має здатність розбавляти інгібуючі речовини, що може впливати на його життєздатність, дозволяючи розвиватися. Крім того, харчовий склад лактозного бульйону є стратегічним для сприяння росту Salmonella sp порівняно з іншими мікроорганізмами.

Для остаточної ідентифікації його слід субкультурити іншим носіям остаточної культури.

З іншого боку, склад середовища також дозволяє виявити мікроорганізми, що ферментують лактозу, які виробляють газ.

Підготовка

Для приготування літра лактозного відвару 13 грамів зневодненого середовища необхідно зважити і розчинити в 1000 мл дистильованої води.

Щоб розчинити середовище у воді, розчин можна трохи нагріти, але не надто сильно.

Після отримання гомогенного розчину розчин готується наступним чином: якщо бульйон буде використовуватися для пошуку коліформ, готується стійка пробірки, в яку трубку для бродіння Дарема вставляють догори дном.

Трубка Дарема - дуже важлива деталь, оскільки вона дозволить виявити газоутворення, дані, що мають велике значення при пошуку коліформ.

Як тільки пробірки будуть готові, 10 мл лактозного відвару дозують в них, кількість, яка повинна бути достатньою для покриття всієї пробірки Дарема.

Якщо бульйон з лактозою слід використовувати як відвар для попереднього збагачення, не потрібно розміщувати пробірку для бродіння Дарема. У цьому випадку потрібна більша кількість середовища (225 мл), яку подаватимуть у флакони по 500 мл, з широким отвором та з термостійкою гвинтовою кришкою.

Згодом пробірки або колби автоклавують при 121 ° С протягом 15 хвилин.

Середовище повинно залишатися при кінцевому рН 6,9 ± 0,2 при 25 ° C.

Відвари зберігають у холодильнику до вживання.

Перед вживанням відвари необхідно довести до кімнатної температури.

З іншого боку, лактозний відвар також можна приготувати в подвійній концентрації.

Деякі лабораторії додають бромокрезол фіолетовий до бульйону з лактозою як показник рН, щоб показати пробірки, де лактоза ферментувала через зміну кольору. У цьому випадку відвар набуває фіолетовий колір, і якщо відбувається бродіння, він стає жовтим.

Програми

У лабораторіях з мікробіології широко застосовують лактозний відвар, оскільки він є відносно недорогим середовищем, яке дає надійні та швидкі результати (24-48 годин).

Його можна використовувати для аналізу загальної та фекальної коліформи в їжі та воді або як відвар для збагачення сальмонели.

Попереднє збагачення

Попереднє збагачення є етапом до збагачення зразків, що значно покращує відновлення бактерій роду Salmonella в оброблених продуктах.

Для цього зразок твердої їжі (25 грам) або рідку (25 мл) висівають у 225 мл лактозного відвару, витримуючи протягом 24 - 48 годин. Згодом він буде культивуватися в збагаченому середовищі, такому як селенітовий цистиновий бульйон або тетратіонатний бульйон. Потім перейдіть до селективних носіїв XLD та SS.

Тотальний і фекальний коліформний аналіз

Це прекрасне середовище як показник забруднення калу.

З цієї причини бульйон з лактозою ідеально підходить для передбачуваної фази дослідження коліформ методом Найбільш ймовірного числа.

Для зразків, у яких підозрюється велика кількість коліформ, буде прищеплена менша його кількість (1мл), тоді як для зразків, у яких підозрюється менша кількість кольорових форм, буде прищеплено більший об’єм зразків (10 мл).

Для аналізу проводять розведення 10 ^-1 , 10 ^-2 , 10 ^-3 , утворюючи батарею з 3-5 пробірок для кожної використовуваної концентрації.

Від кожного розведення однаковий об’єм висівають у бульйони з лактозою.

Пробірки інкубують протягом 24 годин. Негативні відвари інкубують ще протягом 24 годин.

Інтерпретація результатів проводиться шляхом дотримання двох характеристик: перша - це наявність або відсутність помутніння, і оскільки ця середовище не містить показника pH, зміни кольору не відбудуться.

Друге - це видобуток газу чи ні. Газ легко засвідчується в трубці Дарема появою одного або декількох бульбашок повітря всередині нього.

Він вважається позитивним, якщо дотримуються обидві характеристики, тобто помутніння при виробництві газу. Позитивні пробірки слід повторно висівати в підтверджуючі середовища (2% відвару зеленого жовчного бульйону і відвар ЄС).

Контроль якості середовища

- Готуючи засіб, важливо не забувати розміщувати пробірки Дурхам, якщо мета цього ж - вивчити коліформи.

- Не перегрівайте засіб перед стерилізацією.

- Розподіліть у пробірках перед стерилізацією, ніколи не після.

- Не використовуйте, якщо засобу більше 3 місяців.

- Не використовуйте, якщо ви спостерігаєте будь-які зміни звичних характеристик середовища.

- Готуючи партію лактозного бульйону, перевіряйте його якість, висіваючи відомі штами, такі як Escherichia coli, Enterobacter aerogenes, Citrobacter freundii та Klebsiella pneumoniae. Вони ростуть дуже добре, при виробництві газу (позитивний контроль).

- Він також може включати Pseudomonas aeruginosa, Salmonella typhimurium або Enterococcus faecalis, які добре ростуть, але без вироблення газу (негативний контроль).

- Слід зазначити, що початковий колір зневодненого середовища - бежевий, а підготовлений засіб - дуже світлий і прозорий жовтий. Якщо спостерігається зміна кольору або зовнішнього вигляду, воно може погіршитися.

Список літератури

1. Acevedo R, Severiche C, Castillo M. Екологічна біологія та мікробіологія. (2013) 1-е видання. Університет Картахени, Колумбія.
2. Camacho A, Giles M, Ortegón A, Palao M, Serrano B та Velázquez O. (2009). Методи мікробіологічного аналізу харчових продуктів. 2-е вид. Хімічний факультет, УНАН. Мексика.
3. Conda Pronadisa Laboratories. 2017. Відвар лактози подвійної концентрації (European Pharm.)
4. Fernández-Rendón C, Barrera-Escorcia G. Порівняння методик вилучення коліформних бактерій з осаду озера Xochimilco, Мексика. Преподобний аргент. мікробіол. 2013 рік; 45 (3): 180–184. Доступно за адресою: scielo.org.
5. Sotomayor F, Villagra V, Cristaldo G, Silva L, Ibáñez L. Визначення мікробіологічної якості артезіанських вод свердловин в районах Центрального, Кордильєрського та Столичного муніципалітетів. Пам. Наука. Здоров’я 2013; 11 (1): 5-14. Доступно з: scielo.iics.