СЕЛЕНІТОВИЙ БУЛЬЙОН: ОСНОВА, ПІДГОТОВКА ТА ВИКОРИСТАННЯ - БІОЛОГІЯ - 2025

Гіпс є селективної культуральної середовищем рідини. Він був розроблений Лейфсоном для збагачення зразків, де підозрюється наявність ентеропатогенних бактерій роду Salmonella.

Цей засіб відповідає вимогам Американської асоціації громадського здоров'я (APHA), а тому приймається для дослідження наявності сальмонели у зразках калу, сечі, рідкої або твердої їжі, води, серед інших.

Відвар селеніту. Джерело: Фото зроблено автором MSc. Маріельса гіл

Його хімічний склад сприяє відновленню цих мікроорганізмів і, в свою чергу, гальмує ріст інших. Він в першу чергу токсичний для більшості бактерій, що належать до родини Enterobacteriaceae. Однак це також дозволяє відновити штами шигел та не гальмує ріст синьогнійної та протеїнової тканини.

До його складу входить безводний селеніт натрію, безводний фосфат натрію, пептони та лактоза. Існує також варіант, до якого додають цистин, звідси і його назва селеніт-цистиновий відвар.

В даний час переважним є застосування селеніт-цистинового відвару, оскільки отримується більш високий відсоток відновлення сальмонели, еквівалентний тому, що спостерігається з іншими селективними середовищами для тієї ж мети, як бульйон тетратіонату натрію.

Основа

Пептони, що містяться в бульйоні, служать поживними речовинами для правильного розвитку мікроорганізмів. Сальмонельозні штами використовують пептони як джерело азоту, вітамінів та амінокислот.

Лактоза - це ферментований вуглевод, тоді як селеніт натрію - це гальмівна речовина, яка зупиняє ріст грампозитивних бактерій та більшості бактерій, що знаходяться у флорі кишечника, особливо сімейства Enterobacteriaceae. Фосфат натрію - це буфер, який стабілізує рН середовища.

У разі варіанту селенітового бульйону, що містить L-цистин, ця додаткова сполука є відновлювачем, що мінімізує токсичність селеніту, збільшуючи одужання сальмонели.

Підготовка

-Селенітовий відвар

Якщо у вас є компоненти суміші, ви можете зважити:

4 г безводного селеніту натрію.

10 г безводного фосфату натрію.

5 г пептонів.

4 грами лактози.

Розчинити сполуки в 1 літрі стерильної дистильованої води. Його можна трохи нагріти, щоб повністю розчинитися.

Деякі лабораторії виставляють середовище протягом 10 хвилин у рідку пару для стерилізації, оскільки воно не повинно бути автоклавоване. Якщо засіб стерилізується, його можна зберігати в холодильнику до використання.

Його також можна приготувати нестерильно і подавати по 10 - 15 мл в стерильні пробірки.

У цьому випадку його слід залишити для відпочинку і негайно використовувати. Оскільки засіб не є стерильним, його не можна зберігати в холодильнику для подальшого використання.

- Підготовка комерційного середовища

Якщо комерційне середовище доступне, зважте 23 г зневодненого середовища та розчиніть його в одному літрі стерильної дистильованої води. Нагрійте коротко, щоб закінчилося розчинення. Не автоклавуйте. Асептично подайте 10 або 15 мл у стерильні пробірки.

Кінцевий pH середовища повинен становити 7,0 ± 0,2.

Слід зазначити, що колір зневодненого середовища - бежевий, а препарат - світлий і напівпрозорий бурштин.

Варіант відвару селеніт-цистину

Він містить ті ж сполуки, що і відвар селеніту, але додається 10 мг цистину. Решта процедури точно така ж, як описана вище.

Програми

Цей засіб спеціальне для використання в епідеміологічних дослідженнях у випадках, коли захворювання не знаходиться в гострій стадії, безсимптомні пацієнти або здорові носії.

Виділення роду Salmonella, як правило, важко, оскільки вони, як правило, лише погано забруднюють зразки. Перебуваючи в невеликій кількості, він легко перекривається зростанням інших бактеріальних родів, які знаходяться у більшій кількості.

З іншого боку, сировина, з якої виготовляються оброблені продукти, часто піддається впливу тепла, процесів зневоднення, використання дезінфікуючих засобів, радіації та консервантів.

Тому сальмонели, наявні в сировині, піддаються жорстокому поводженню, піддаючи продукт вищезазначеним промисловим процесам. Так само у випадку таких клінічних проб, як кал, штами можуть бути слабкими, якщо вони надходять від пацієнтів, які отримували лікування антибіотиками.

Тому будь-який зразок, в якому підозрюють наявність сальмонели, повинен бути попередньо збагачений лактозним бульйоном і згодом збагачений селенітовим бульйоном для оптимізації його відновлення у селективних середовищах, таких як SS агар, ксилозний агар, лізин-дезоксихолат (XLD ), ентеральний агарок Гектоена (ВІН) та яскраво-зелений агар, серед інших.

Посіяно

Для зразків стільця беруть 1 г проби і суспендують у пробірці з 10-15 мл бульйону селеніту. Якщо стілець рідкий, візьміть 1 мл і суспендуйте в відварі. Для ректальних тампонів вивантажте тампонний матеріал у бульйон.

У твердих харчових пробах беруть 1 гр і суспендують у селенітовому бульйоні.

У рідкій їжі змішують у рівних частинах з селенітовим бульйоном у подвійній концентрації.

Для зразків сечі центрифугуйте, відкиньте супернатант, візьміть весь осад і суспендуйте його в селенітовому бульйоні.

Відвари інкубують при 37 ° С протягом 24 годин інкубації. Про зростання бактерій свідчить каламутність. Додаткова пробірка на зразок також може бути включена для інкубації при 42 ° C. Згодом висівають вибіркові тверді середовища з бульйону селеніту.

QA

Для контролю стерильності відвар селеніту з кожної неінокульованої партії інкубують при 37 ° С протягом 24 годин. Очікується, що не спостерігається помутніння або зміна кольору середовища.

Відомі штами можна використовувати для контролю належного функціонування середовища, таких як:

Salmonella enteritidis ATCC 13076, Salmonella typhimurium ATCC 14028, Salmonella choleraesuis ATCC 12011, Escherichia coli ATCC 25922 та Proteus mirabilis ATCC 43071.

Очікувані результати:

• Для перших трьох бактеріальних штамів ріст повинен бути задовільним.
• Для кишкової палички часткове гальмування.
• Для протея помірний ріст.

Обмеження

Селенітовий відвар середовища токсичний для шкіри людини, тому слід уникати прямого контакту.

Список літератури

1. Flores-Abuxapqui J, Puc-Franco M, Heredia-Navarrete M, Vivas-Rosel M, Franco-Monsreal J. Порівняння між культуральними середовищами селеніту натрію та тетратіонату натрію, обидва інкубуються при 37 ° C та 42 ° C для виділення Salmonella spp з калу носіїв. Rev Biomed 2003; 14 (4): 215–220
2. Britannia Laboratories. Відвар Селеніто. 2015. Доступний за адресою: britanialab.com
3. Неогенні лабораторії. Відвар селеніту. Доступно за адресою: foodsafety.neogen.com
4. González -Pedraza J, Перейра -Sanandres N, Soto -Varela Z, Hernández -Aguirre E, Villarreal- Camacho J. Мікробіологічне виділення Salmonella spp. і молекулярні інструменти для його виявлення. Здоров’я, Barranquilla 2014; 30 (1): 73-94. Доступно за адресою: http://www.scielo.org.
5. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Мікробіологічна діагностика Бейлі та Скотта. 12 ред. Редакція Panamericana SA Аргентина.