СОЄВИЙ БУЛЬЙОН ТРИПТИКАСЕЇНУ: ОСНОВА, ПІДГОТОВКА ТА ВИКОРИСТАННЯ - БІОЛОГІЯ - 2025

Соєвий бульйон триптон є рідиною культурального середовища, висока поживна цінність, неселективним. Завдяки великій універсальності, він є одним з найбільш широко використовуваних рідких культурних середовищ в лабораторії мікробіології.

Він також відомий за назвою триптичного соєвого бульйону або перетравленого казеїну-сої, абревіатура якого TSB за його абревіатурою англійською мовою Tryptic Soy бульйон або CST для його абревіатури іспанською мовою. Її використання дуже різноманітне за своїм складом. До його складу входять триптейн, сопний пептон, хлорид натрію, фосфат двоталію та глюкоза.

Соєвий бульйон триптикасеїну, посіяний штам Pseudomonas aeruginosa ATCC 27853, де спостерігається вироблення пігменту. Джерело: Фото зроблено автором MSc. Маріельса Гіл.

Він здатний розмножувати клінічно важливі патогенні бактерії, включаючи ті, що є харчовими вимогами та анаеробними бактеріями. Деякі опортуністичні та забруднюючі гриби також можуть розвиватися в цьому середовищі.

Завдяки високій поживній здатності він має високу чутливість до виявлення мікробного забруднення, з цієї причини його було обрано службою інспекції охорони здоров’я тварин і рослин USDA для проведення мікробіологічного аналізу вакцин.

Аналогічно, соєвий бульйон триптикасеїну відповідає вимогам різних фармакопеїв (Європейський ЕП, Японський ПП та Північноамериканський УСП) для мікробіологічного дослідження продуктів на промисловому рівні, таких як косметика та продукти харчування.

З іншого боку, варто зазначити, що, незважаючи на велику корисність, цей засіб є відносно недорогим, що робить його доступним для більшості лабораторій мікробіології. Готується також дуже просто.

Основа

Триптейн, пептон і глюкоза забезпечують необхідні харчові властивості, щоб зробити його ідеальним середовищем для швидкого росту мікробів.

Приблизно через 6 - 8 годин інкубації ріст вже спостерігається у більшості мікроорганізмів. Однак є повільно зростаючі штами, на які може вирости кілька днів.

Хлорид натрію та діокалій фосфат діють як осмотичний баланс і регулятор рН відповідно. Про наявність зростання свідчить поява помутніння в середовищі; якщо немає зростання, середовище залишається напівпрозорим.

Завдяки своєму світлому кольору можна спостерігати вироблення пігментів, таких, як показано на зображенні на початку статті, що відповідає пігменту, виробленому Pseudomonas aeruginosa.

Підготовка

-Триптісеїн соєвий бульйон

Для приготування трипсового соєвого бульйону 30 г зневодненого комерційного середовища необхідно зважити в цифровому масштабі. Потім його розчиняють в літрі дистильованої води, що міститься в колбі.

Суміш залишають відпочивати на 5 хвилин, після чого її відводять до джерела тепла, щоб допомогти розчинити середовище. Його слід часто перемішувати, киплячи протягом 1 хвилини.

Після розчинення вона розподіляється в пробірки відповідного розміру за потребою. Можна використовувати трубки з бавовняними пробками або з бакелітовими ковпачками. Згодом пробірки стерилізують із середовищем в автоклаві при 121 ° С протягом 15 хвилин.

РН середовища повинен залишатися на рівні 7,3 ± 0,2

Слід зазначити, що колір зневодненого культурального середовища світло-бежевий і його слід зберігати при температурі від 10 до 35 ° C у сухому місці. Поки підготовлений відвар має світло-бурштиновий колір і його слід зберігати в холодильнику (від 2 до 8 ° C).

-Варіанти триптікасеїнового соєвого бульйону

Соєвий бульйон триптикасеїну можна приготувати додаванням жовчних солей та новобіоцину, щоб зробити його селективним для виділення кишкової палички. Інший варіант з цією ж метою - приготувати соєвий відвар триптикази, доповнений ванкоміцином, цефіксимом і телуритом (2,5 мкг / мл).

З іншого боку, до триптиканого соєвого бульйону можна додати більше глюкози (0,25%), коли метою є стимулювання утворення біоплівки.

Використовуйте

Він досить поживний, щоб дозволити ріст в'язких або в'язких бактерій, таких як Streptococcus pneumoniae, Streptococcus sp і Brucella sp, без необхідності доповнювати кров'ю або сироваткою.

Так само в цьому бульйоні можуть розвиватися деякі гриби, такі як Candida albicans Complex, Aspergillus sp та Histoplasma capsulatum.

Крім того, це середовище в анаеробних умовах ідеально підходить для відновлення бактерій, що належать до роду Clostridium, а також неспортульованих анаеробних бактерій, що мають клінічне значення.

Якщо додати 6,5% хлориду натрію, його можна використовувати для росту ентерококу та інших стрептококів групи D.

На дослідницькому рівні це було дуже корисно в різних протоколах, особливо при вивченні біоплівки або бактерій, що утворюють біоплівку. Він також використовується для приготування 0,5% бактеріальної суспензії Mac Farland, необхідної для виконання антибіограми методом Кірбі та Бауера.

У цьому випадку беруть 3–5 колоній подібного вигляду та емульгують у 4-5 мл соєвого бульйону триптикасеїну. Потім його інкубують протягом 2 - 6 годин при 35-37 ° С і згодом доводять до потрібної концентрації, використовуючи стерильний фізіологічний розчин. Соєві бульйони триптикасеїну не слід застосовувати з 18 до 24 години інкубації.

Посіяно

Зразок можна висіяти безпосередньо або чисті колонії, взяті з селективних середовищ, можна субкультивировать. Інокулум повинен бути невеликим, щоб не помутніти середовище перед інкубацією.

Зазвичай він інкубується при 37 ° С в аеробіозі протягом 24 годин, але ці умови можуть змінюватися залежно від мікроорганізму, який шукають. При необхідності його також можна інкубувати в анаеробних умовах при 37 ° С протягом декількох днів. Наприклад, швидкозростаючі або в'язкі мікроорганізми можна інкубувати до 7 днів.

У мікробіологічному аналізі фармацевтичних речовин - таких як вакцини - протоколи суворіші. У цих випадках відвар без росту не викидають, поки не досягнуть 14 днів безперервної інкубації.

QA

З кожної підготовленої партії слід інкубувати 1 або 2 неінокульованих пробірки для демонстрації їх стерильності. Він повинен залишатися незмінним.

Відомі штами також можна посадити для оцінки їх поведінки. Серед штамів, які можна використовувати:

Aspergillus brasiliensis ATCC 1604, Candida albicans ATCC 10231, Bacillus subtilis ATCC 6633, Staphylococcus aureus ATCC 6538 або 25923, Escherichia coli ATCC 8739;

У всіх випадках зростання повинен бути задовільним у відповідних атмосферних та температурних умовах для кожного мікроорганізму.

Обмеження

-Ферментація глюкози викликає зниження рН середовища завдяки виробництву кислот. Це може бути несприятливим для виживання деяких мікроорганізмів, чутливих до кислотності.

-Не рекомендується підтримувати штами, оскільки крім кислотності, бактерії виснажують поживні речовини через кілька днів з подальшим накопиченням токсичних речовин, які роблять навколишнє середовище негостиною.

-Ви повинні працювати, доглядаючи всі протоколи стерильності, оскільки бульйони легко забруднюються.

-Песля приготування соєвих бульйонів триптикасеїну не слід намагатися перенести бульйон в іншу стерильну пробірку, оскільки цей тип маневру дуже вразливий до забруднення.

Список літератури

1. Кона Е. Умови для хорошого дослідження чутливості за допомогою тесту на дифузію агару. Преподобний чил. інфектол. 2002; 19 (2): 77-81. Доступно за адресою: scielo.org
2. Британія. Соєвий бульйон триптейн. 2015. Доступний за адресою: britanialab.com
3. Лабораторія МХД. Соєвий бульйон триптикасеїну. Доступний за адресою: electronic-systems.com
4. Неогенна лабораторія. Соєвий бульйон триптиху. Доступно за адресою: foodsafety.neogen.com
5. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Мікробіологічна діагностика Бейлі та Скотта. 12 ред. Редакція Panamericana SA Аргентина.
6. Rojas T, Vásquez Y, Reyes D, Martínez C, Medina L. Оцінка методики магнітної імуносепарації для відновлення кишкової палички O157: H7 в молочних вершках. АЛАН. 2006 р .; 56 (3): 257-264. Доступно за адресою: scielo.org.ve
7. Gil M, Merchán K, Quevedo G, Sánchez A, Nicita G, Rojas T, Sánchez J, Finol M. Формування біоплівки в ізолятах золотистого стафілокока відповідно до чутливості до антимікробних препаратів та клінічного походження. Життя 2015 рік; 62 (1): 1-8. Доступно за адресою: saber.ucv.ve
8. Narváez-Bravo C, Carruyo-Núñez G, Moreno M, Rodas-González A, Hoet A, Wittum T. Ізоляція кишкової палички O157: H7 в зразках двократного призначення фекалій великої рогатої худоби з Міранди, штат Зулія, Венесуела. Преподобний Сент. (Маракайбо), 2007; 17 (3): 239-245. Доступно за адресою: scielo.org