ТЕТРАЦІОНАЛЬНИЙ БУЛЬЙОН: ОБГРУНТУВАННЯ, ПІДГОТОВКА ТА ВИКОРИСТАННЯ - БІОЛОГІЯ - 2025

Тетратионат бульйону або бульйону ТТ є селективний рідку культуральну середу для збагачення і вилучення штамів роду Salmonella. Він був створений Мюллером і згодом модифікований Кауффманом, тому є ті, хто називає його бульйоном Мюллера-Кауфмана.

Оригінальна середовище містила пептони протеози, карбонат кальцію та тіосульфат натрію. Кауфман додав до нього солі жовчі та створив ще одну модальність із яскраво-зеленим. Ці речовини гальмують ріст кишкової палички, залишаючи середовище вільним для розвитку хвороботворних бактерій, в даному випадку сальмонели.

Додавання йодного розчину йоду в тетратіонатний бульйон. Джерело: Мануель Альмагро Рівас

Модифікація була дуже успішною, оскільки значно підвищила чутливість середовища. З цієї причини в даний час корисно для пошуку сальмонел у будь-якому типі проби, але особливо для твердого або рідкого стільця та їжі.

Його підготовка складається з двох етапів; Комерційне середовище є основою для приготування тетратіонатного бульйону, а згодом, щоб можна було утворити тетратіонат, додавали йодований йодний розчин для заповнення середовища.

Американська асоціація громадського здоров’я (APHA) рекомендує використовувати відвар тетратіонату, доповнений яскраво-зеленим кольором для збагачення зразків для сальмонели, оскільки він є більш селективним, ніж бульйон тетратіонату та бульйон селеніту.

Взагалі тетратіонатний бульйон ідеальний, коли підозра на наявність бактерій роду Salmonella в невеликій кількості або при зловживанні ними шляхом впливу інгібіторних речовин або промислових процесів, що мінімізують їх життєздатність.

Основа

Присутні пептони відповідають дайджесту підшлункової залози казеїну та пестицидному засвоєнню тканини тварин. Вони забезпечують джерело вуглецю, азоту та загальних поживних речовин для росту бактерій.

Зі свого боку, тіосульфат натрію реагує з йодованим розчином, утворюючи тетратіонат. Це гальмує ріст коліформ і сприяє розвитку бактерій, що містять фермент тетратіонат-редуктазу, серед них - рід сальмонел, але і протей.

Жовчні солі також діють як гальмівна речовина для більшості грампозитивних та деяких грамнегативних бактерій (коліформ).

Карбонат кальцію поглинає токсичні речовини, що утворюються при розкладанні тетратіонату, який утворює сірчану кислоту. У цьому сенсі карбонат кальцію нейтралізує кислотність, зберігаючи рН середовища стабільним.

У випадку яскраво-зеленої модальності ця речовина підвищує селективну силу тетратіонатного бульйону за рахунок пригнічення мікроорганізмів, відмінних від роду сальмонел.

Підготовка

-Тетраціональний бульйон

Йодний розчин йоду

Зважити:

• 6 грам йоду.
• 5 г йодиду калію.

Йодид калію розчиняють приблизно в 5 мл стерильної дистильованої води, потім йод додають потроху, поки суміш нагрівається. Після його повного розчинення доведіть до мітки стерильною дистильованою водою до досягнення кінцевого об'єму 20 мл.

Основна середовище для тетратіонатного бульйону

Зважте 46 грам зневодненого середовища і суспендуйте в 1 літрі стерильної дистильованої води. Змішайте і нагрівайте до повного розчинення, це може довести до кипіння лише кілька хвилин. Не автоклавуйте. Основу середовища дають охолонути приблизно до 45 ° C і в цей час додають 20 мл йодованого розчину.

Після додавання йодованого розчину в середовище його слід негайно використовувати. Якщо ви не хочете використовувати всю суміш, поступайте так:

10 мл базового середовища розподіляється по пробірках, і тільки в ті, які слід прищепити зразками, додається 0,2 мл йодованого розчину.

Ті, які не збираються використовувати, все ще можна зберігати в холодильнику, проте, оскільки середовище не стерилізується, ідеальною є підготовка точної кількості, яка потрібна.

Колір середовища перед додаванням йодованого розчину йоду молочно-білий з осадом білого кольору, а після додавання - коричневий з густим осадом. Спостережуваний осад є нормальним і відповідає карбонату кальцію, який не розчиняється. Кінцевий рН середовища 8,4 ± 0,2.

-Тетраціональний варіант бульйону з яскраво-зеленим

Для приготування яскраво-зеленого тетратіонатного бульйону проводяться всі описані вище етапи, але додатково до суміші додадуть 10 мл яскраво-зеленого розчину, приготованого на 0,1%.

Сяючий зелений

Цей розчин готується наступним чином:

Відважте 0,1 г яскраво-зеленого кольору і суспендуйте в 100 мл дистильованої води. Нагрівають до кипіння для досягнення повного розчинення. Зберігати в бурштиновій пляшці.

Використовуйте

Для зразків стільця (культура стільця) протокол такий:

Інокулюйте 1 г твердого стільця або 1 мл рідкого стільця в пробірку з 10 мл готового до вживання тетратіонату бульйону. Енергійно струшуйте та інкубуйте аеробно при 43 ° С протягом 6-24 годин.

Згодом візьміть 10–20 мкл аликвоти бульйону та субкультури у селективній середовищі для сальмонели, такому як агар SS, агар XLD, яскраво-зелений агар, гектоен ентеральний агар, серед інших.

Паралельно селективні середовища для сальмонели повинні бути прищеплені прямим зразком (калом) без збагачення. Для ректальних зразків тампонів вивантажте зібраний матеріал у пробірку і продовжуйте, як описано вище.

Для зразків їжі зважте 10 г твердої їжі або 10 мл рідкої їжі і прищепте пляшку 100 мл готового до вживання тетратіонату бульйону. Поступайте так, як описано вище, але інкубуйте при 37 ° C.

Як видно, співвідношення між зразком і бульйоном завжди буде 1:10.

QA

Відомі контрольні штами можуть бути використані для тестування культурального середовища. Найбільш широко використовуються штами, сертифіковані ATCC.

Використовувані штами - Salmonella typhimurium ATCC 14028, Salmonella abony DSM 4224, Salmonella enteritidis ATCC 13076, Escherichia coli ATCC 25922, Enterococcus faecalis ATCC 19433 та Staphylococcus aureus ATCC 25923.

Відмінний ріст очікується для штамів сальмонели, тоді як кишкова паличка може мати слабкий або регулярний ріст, а грампозитивні штами (ентерокок та стафілокок) частково або повністю гальмуються.

рекомендації

-Так як це середовище не пригнічує ріст протею, деякі лабораторії використовують 40 мг / л новобіоцину для запобігання розвитку цього мікробного штаму. Антибіотик потрібно додати перед розчином йоду.

-Песля приготування середовища, включаючи йодний розчин йоду, щеплення не повинно зайняти більше 2 годин.

-При розподілі середовища в пробірках суміш повинна бути постійно гомогенізована, щоб ресуспендувати утворився осад.

-У менш забруднених зразках тетратіонатний бульйон інкубують при температурі 35-37 ° С, а у сильно забруднених зразках рекомендується інкубація при 43 ° С.

Список літератури

1. Conda Pronadisa Laboratory. 2010. Тетраціональна база бульйону за Мюллером-Кауффманом. Доступно в:
2. BD Laboratories. 2003. База бульйонів на тетратіонаті. Доступно в:
3. Britannia Laboratories. 2015. Основний бульйон тетранате. Доступно в:
4. BBL Media. 2005. Підготовлено в пробірках для культури виду сальмонел.
5. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Мікробіологічна діагностика Бейлі та Скотта. 12 ред. Редакція Panamericana SA Аргентина.
6. Flores-Abuxapqui J, Puc-Franco M, Heredia-Navarrete M, Vivas-Rosel M, Franco-Monsreal J. Порівняння між культуральними середовищами селеніту натрію та тетратіонату натрію, обидва інкубуються при 37 ° C та 42 ° C для виділення Salmonella spp з калу носіїв. Rev Biomed 2003; 14 (4): 215–220