ВІДВАР ТИОГЛІКОЛЯТУ: ОБГРУНТУВАННЯ, ПІДГОТОВКА ТА ЗАСТОСУВАННЯ - БІОЛОГІЯ - 2025

Тіогліколята бульйон є середовищі , збагаченої консистенції рідини. Він відомий акронімом FTM за його абревіатурою англійською мовою Fluid Thioglycollate Medium. Він був створений Brewer і модифікований у 1944 році Вірою, яка додала до нього казеїновий пептон.

Це середовище має низький потенціал відновлення окислення, тому не рекомендується для розвитку суворих аеробних бактерій, але воно ідеально підходить для відновлення факультативних аеробних, суворих анаеробних та невимогливих мікроаерофільних бактерій.

Відвар тиогліколят без показника. Показано виділення з піхви. Джерело: Bobjgalindo

Високі показники, що спостерігаються з цим середовищем при виділенні та відновленні широкого спектру мікроорганізмів, зробили його прийнятим Фармакопеєю США (USP), Офіційною асоціацією хіміків сільського господарства (AOAC) та Європейською фармакопеєю ( ЕП).

Ці організації рекомендують його для тестування контролю стерильності фармацевтичної продукції та для збагачення різних видів зразків.

Тіогліколят кадо складається з дріжджового екстракту, підшлункової залози казеїну, безводної декстрози, L-цистину, хлориду натрію, тіогліколяту натрію, резазурину та агару в невеликій кількості.

Існує кілька версій цього засобу, серед яких є: відвар тіогліколяту з індикатором, відвар тіогліколяту без індикатора, відвар тіогліколяту з індикатором, збагаченим геміном і вітаміном К _1, і відвар тіогліколяту з карбонатом кальцію.

Зокрема, варіант відвару з тіогліколяту, збагачений геміном та вітаміном К, сприяє росту швидкоплинних анаеробів, а варіант відвару тіогліколяту, що містить карбонат кальцію, корисний для протидії кислотам, що утворюються під час росту мікробів.

Основа

Відвар тіогліколяту вважається неселективним збагачувальним середовищем, оскільки дозволяє вирощувати більшість нестійких бактерій. Харчові потреби забезпечуються дріжджовим екстрактом, засвоєнням підшлункової залози та глюкозою.

З іншого боку, цей засіб, незважаючи на те, що є відваром, містить невелику кількість агару; Це означає, що він має низький окислювально-відновний потенціал, через те, що він уповільнює надходження кисню, таким чином, що кисень зменшується в міру заглиблення в трубку.

Ось чому це середовище ідеально підходить для розвитку факультативних аеробних, мікроаерофільних і суворих анаеробних бактерій, останні 2 без необхідності інкубувати в цих умовах. Це ж середовище регулює кількість кисню всередині середовища, відсутній на дні трубки і в достатній кількості на поверхні.

Так само тиогліколят і L-цистин діють як відновлюючі речовини, допомагаючи запобігти накопиченню речовин, шкідливих для розвитку бактерій, таких як пероксид. Крім того, ці сполуки містять сульфгідрильні групи (-SH-), нейтралізуючи інгібіторну дію похідних ртуті, миш'яку, серед інших важких металів.

Зі свого боку, резазурин є показником відновлення оксиду. Ця речовина безбарвна при зменшенні і рожева при окисленні. Існують варіанти індикаторного та неіндикаторного тиогліколятного відвару. Її використання буде залежати від типу зразка та переваг лабораторії.

Тим часом хлорид натрію підтримує осмотичний баланс відвару тіогліколяту, а вживання глюкози в безводній формі запобігає надлишковій волозі в зневодненому середовищі.

Підготовка

Відвар тиогліколяту з індикатором

Зважте 29,75 г зневодненого середовища і розчиніть в 1 л дистильованої води. Суміші дають настоятися приблизно 5 хвилин. Доведіть до джерела тепла і часто перемішуйте до повного розчинення.

Залийте середовище в пробірки і автоклавуйте при 121 ° С протягом 15 хвилин. Перед використанням залиште охолонути. Перевірте вкладиш комерційного будинку на його збереження. Одні рекомендують зберігати при кімнатній температурі в темному місці, а інші в холодильнику, захищеному від світла.

РН підготовленого середовища 7,1 ± 0,2.

Колір зневодненого середовища світло-бежевий, а підготовлене середовище - світло-бурштиновий з деякою опалесценцією.

Відвар тіогліколяту з індикатором, збагаченим геміном і вітаміном К

Існують комерційні носії, які вже містять гемін та вітамін К ₁ , особливо для вирощування анаеробів.

Якщо у вас немає збагаченого середовища для анаеробів, ви можете приготувати основний відвар для тіогліколяту. Для цього _{додають} 10 мг гідрохлориду геміну та 1 мг вітаміну К ₁ на кожен літр середовища. Однак якщо в відвар тіогліколяту додають кров або сироватку, додавання геміну або вітаміну К не потрібно.

Відвар тіогліколяту з карбонатом кальцію

Він продається комерційно і готується, дотримуючись інструкцій на вкладиші.

Відвар тиогліколят без показника

У цьому ж складі є основний тиогліколят, але не містить резазурину.

Зважте 30 г зневодненого середовища і розчиніть в літрі дистильованої води. Решта препарату така ж, як описана в тіогліколятному бульйоні з індикатором.

Використовуйте

Відвар тіогліколяту корисний для збагачення клінічних проб, особливо з стерильних ділянок. Він також корисний для неклінічних зразків, таких як косметика, ліки тощо.

Для інокуляції рідких зразків (таких як CSF, синовіальна рідина, серед інших) зразки спочатку центрифугують, а потім 2 краплі осаду відбирають і поміщають у відвар тіогліколяту. Інкубуйте при 35 ° С протягом 24 годин. Якщо за цей час не спостерігається зростання (помутніння), його інкубують до 7 днів.

Якщо пробу беруть тампоном, культуральне середовище спочатку інокулюють у тарілки і, нарешті, тампон вводять у бульйон, виступаючу частину розщеплюють і пробірку закривають, залишаючи тампон всередині. Інкубуйте при 35 ° С протягом 24 годин, максимум 7 днів.

Для твердих зразків гомогенізують у фізіологічному сольовому розчині (SSF), а потім щепляють відвар тіогліколяту 2 краплями суспензії.

Іноді його можна використовувати як транспортне середовище для зразків, у яких підозрюються суворі анаероби, або як резервний відвар для збагачення.

Варіант відвару з тіогліколяту з карбонатом кальцію використовується для більш тривалого утримання контрольних штамів, оскільки він має здатність нейтралізувати кислоти, що утворюються в результаті використання глюкози; Ці кислоти токсичні для певних бактерій.

Зростання тіогліколятного бульйону спостерігатиметься за помутнінням середовища. Рекомендується проводити пляму по Граму та згодом субкультуру в неселективних та селективних середовищах, залежно від типу зразка та підозрюваних мікроорганізмів.

QA

Для контролю стерильності рекомендується інкубувати один-два відвари без щеплення. Очікуваний результат - прозорий відвар, без зміни кольору, хоча нормально бачити на поверхні трубки легкий рожевий колір.

Для контролю якості слід прищеплювати від 10 до 100 КУО сертифікованих контрольних штамів, таких як Staphylococcus aureus ATCC 6538, Micrococcus luteus ATCC 9341, Bacillus subtilis ATCC 6633, Pseudomonas aeruginosa ATCC 9027, Clostridium sporgegenes ATCC 19404, Clostridium 11437 proxy Bacteroides vulgatus ATCC 8482.

Інкубують при 30-35 ° С в аеробіозі протягом 24 годин до максимум 3 днів, оскільки ці мікроорганізми швидко ростуть.

Гарного розвитку очікують у всіх випадках, крім Micrococcus luteus та Bacillus subtilis, де може бути помірний розвиток.

Для контролю якості відвару з тіогліколяту, збагаченого геміном та вітаміном K ₁ , можна використовувати контрольні штами Bacteroides vulgatus ATCC 8482, Clostridium perfringens ATCC 13124 та Bacteroides fragilis ATCC 25285. Очікуваний результат - задовільний ріст.

рекомендації

-Іноді можна помітити, що поверхня відвару тіогліколяту з індикатором стає рожевою; Це пов’язано з окисненням середовища. Якщо рожевий колір покриває 30% або більше від загального відвару, його можна нагріти на водяній бані протягом 5 хвилин, знову охолодити і використовувати.

Це призведе до видалення поглиненого кисню, повернення середовища до початкового кольору. Цю процедуру можна зробити лише один раз.

-Щоб покращити ріст аеробних бактерій, інкубуйте з кришкою трохи розпущеною. Однак бажано використовувати для цієї мети відвар для інфузії мозку серця або соєвий бульйон триптикази для правильної розробки суворих аеробів.

-Слід уникати замерзання середовища або перегрівання, оскільки обидва умови пошкоджують середовище.

-Пряме світло пошкоджує культуральне середовище, воно повинно зберігатися захищеним від світла.

Список літератури

1. Britannia Laboratories. Тіогліколят USP з індикатором. 2015. Доступний за адресою: labBritania.com.
2. Хіос Сас Лабораторії. 2019. Відвар тиогліколят. Доступно за адресою: quios.com.co
3. Лабораторії BD Рідина з тиогліколятом BD (FTM). 2003. Доступний за адресою: bd.com/Europe
4. Носії BBL, приготовані в пробірках для вирощування анаеробних мікроорганізмів. Тіогліколят. 2013. Доступний за адресою: bd.com
5. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Мікробіологічна діагностика Бейлі та Скотта. 12 ред. Редакція Panamericana SA Аргентина.