ОРЦЕЇН: ОСНОВА ТА ПІДГОТОВКА - ХІМІЯ - 2025

Orceína є природним фіолетовим кольором, витягнутий з різних лишайників як orchilla або леканора, кущистий лишайник Rocella фарбувальні і Lecanora Парелло головним чином. Роцелла тинкторія зустрічається на африканському та американському континенті, хоча її можна замінити іншими видами, розташованими в Європі.

Ця пляма широко використовується в цитогенетичних дослідженнях з давніх часів. У цьому сенсі препарат орцеїну, який включає оцтову кислоту, був введений LaCourt у 1941 році, саме тому його спочатку називали технікою LaCourt.

Хімічна структура орцеїну та розчину орцеїну. Джерело: Wikipedia.org/ Огентер на де.вікіпедії (д-р Гюнтер)

Так само, завдяки своїй простоті та низькій вартості, його використовували для виготовлення лакмусу (пляма, витягнутого з лишайників) та при гістологічних дослідженнях (фарбування клітин і тканин).

Кілька досліджень використовували це фарбування в поєднанні з іншими хімічними речовинами, такими як пірокармінат аміаку та оцтова кислота, для фарбування еластичних волокон та хромосом відповідно. В даний час орцеїн продовжує використовуватися в цитогенетичних дослідженнях тварин і рослин.

Останнім часом Silva та ін. 2017 рік успішно використовував цю пляму для спостереження за різними змінами, які відбуваються в еластичних волокнах шкіри великого пальця у чилійських людей старшого віку. Це дослідження показало, як волокна великого пальця змінюються зі старінням.

У цьому сенсі еластичні волокна спостерігалися коричнево-чорного кольору у осіб старше 80 років; тоді як у наймолодших (від 60 років) вони спостерігаються як червонувато-коричневі. Цитоплазма та інші клітинні структури стають жовтувато-зеленими.

Це дозволило підтвердити наявність і стан еластичних волокон з точки зору їх розміщення, кількості та цілісності. З іншого боку, також було зазначено, що орцеїн має велику допомогу у виявленні аневризми та діагностиці артеріїту, серед інших умов.

Основа

Орцеїн входить до групи оксазинових барвників, а фарбування засноване на його спорідненості до ДНК. Барвник зв’язується з негативним зарядом цієї молекули, представленої фосфатною групою. Ось чому хромосоми забарвлені фіолетовим кольором.

Однак решта структур клітини набувають іншого кольору. Зокрема, у випадку еластичних волокон вони забарвлені в червонувато-коричневий колір, ядра клітин від синього до темно-фіолетового кольору, поки колаген не забарвлюється.

З цієї причини орцеїн використовується для фарбування хроматину та диференціації статі у деяких видів мух. Так само можуть бути забарвлені ядра та деякі печінкові включення, що продукуються антигенами гепатиту В.

Розчини орцеїну мають специфічні функції в фарбуванні. Орцеїн А має функцію пом'якшення оболонок клітин, спричиняючи їх загибель і паралізуючи процес їх поділу. Тим часом орцеїн В відповідає за завершення фарбування шляхом його адгезії до хромосом.

Підготовка

Розчин ацето-орцеїну 1%

Для приготування 1% розчину ацето-орцеїну 2 грами орцеїну розчиняють у 45 мл льодовикової оцтової кислоти, переважно гарячої, і при кімнатній температурі додають 55 мл дистильованої води.

Потім його постійно перемішують для гомогенізації розчину, щоб потім дати йому відпочити, поки він не охолоне. Нарешті, він зберігається при 4 ° C у темних банках. Цей препарат був використаний Flores 2012 для спостереження за фазами дозрівання ооцитів корів.

У цьому випадку, наприклад, розчин ацето-орцеїну поміщають на тканину, попередньо закріплену в оцтово-кислотному етанолі, на 24 години. Цей процес фарбування проводиться протягом 30 хвилин, і тканина згодом знебарвлюється.

Так само його можна використовувати для ідентифікації органел у багатоклітинних тканинах. У цьому випадку мазок слизової щічки фарбується краплею розчину ацето-орцеїну, покрив кладеться на предметне скло і одразу може спостерігатися ядро ​​клітини з її підструктурами.

Лактопропоновий розчин орцеїну 1%

Крім того, орцеїн можна приготувати з іншими хімічними речовинами, такими як молочна кислота та пропіонова кислота. Для цього один грам орцеїну розчиняють у попередньо змішаному розчині при кімнатній температурі 23 мл молочної кислоти та 23 мл пропіонової кислоти; складання об'єму дистильованою водою до 100 мл.

За допомогою цього лакто-пропіонового орцеїнового розчину можна спостерігати різні фази мейотичного поділу рослинних клітин. У цьому випадку попередньо закріплений і гідролізований зразок поміщають на 15 хвилин у розчин лакто-пропіонового орцеїну, після чого тканину розкладають на слайди мікроскопа.

У дослідженні Дюка 2016 року щодо полігенних хромосом він використав препарат з 2 грам орцеїну, розведеного в оцтовій кислоті та 85% молочної кислоти, розбавляючи 65% розчином оцтової кислоти. Нарешті, він подивився на хромосоми в слинних залозах Drosophila melanogaster.

Орцеїн А і Орцеїн В

Важливо зазначити, що залежно від вибірки та того, що підлягає оцінці, готується відповідний розчин орцеїну. Так, наприклад, 1N соляну кислоту додають до розчину орцеїну А для спостереження діючих клітин.

При цьому розчин орцеїну В розчиняється в 45% оцтовій кислоті. Ця методика є скороченим методом фарбування і зазвичай використовується як доповнення до фарбування хромосомних структур.

Заключні думки

З минулих століть лишайники, такі як Леканора, Пармелія та Умбілікарія, можна зустріти в таких країнах американського континенту, як Аргентина, які є чудовими джерелами оркеїну. Також європейські райони, такі як Канарські острови, були в той час великими виробниками орхіллі.

Його експортували в інші міста цього самого континенту, такі як Генуя, та такі країни, як Англія, в той час як Голландія монополізувала виробництво лакмусу з орхіли. Тому цей лишай згодом зменшувався, поки не збирався вимерти.

Це призвело до того, що орхіллу замінили інші рослини, що мають властивості барвника. Однак поява синтетичних барвників сприяло припиненню торгівлі цим лишайником-джерелом оркеїну.

Це стало можливим завдяки Кокку, який у 1812 р. Описав синтез орцеїну, знаючи тоді, що він синтезується фенольною сполукою під назвою орцинол. Однак, незважаючи на це, природний орцеїн все ще є кращим на сьогодні.

Це може бути пов’язано з тим, що орцинол є дуже сильним запахом, і його тривале опромінення може спричинити небезпеку для здоров'я, наприклад втрату здатності виявляти запахи. Ці пошкодження гіпофіза можуть переходити від тимчасового до постійного, тим більше вплив.

Список літератури

1. Ortega L, García R, Morales C. «Застосування лакка, виготовленого грибами, для деградації мікробіологічних барвників (орцеїну та фіолетового кристала)». Молодь в науці 2. 2015; 633-637. Доступно за адресою: jovenesenlaciencia.ugto.mx.
2. Barcat J. Orceína і еластичні волокна. Медицина (Буенос-Айрес) 2003; 63: 453-456. Доступний за адресою: Medicinabuenosaires.com.
3. Silva J, Rojas M, Araya C, Villagra F. Гістологічна характеристика літаючої шкіри обличчя великого пальця у чилійських осіб з в’яненням дактилограми. Дж. Морфол. 2017 рік; 35 (3): 1107-1113. Доступний за адресою: scielo.conicyt.
4. Оррілло М, Мерід Б. "Репродуктивна біологія та цитогенетика картоплі". Міжнародний центр картоплі (CIP). Технічний посібник. Доступно за адресою: research.cip.cgiar.org/
5. Флорес Ф. «Збір, культура та дозрівання in vitro коров'ячих ооцитів (bos taurus) у болівійському нагір'ї». . Національний університет Альтіплано, Пуно-Перу; 2012. Доступний за адресою: repositorio.unap.edu.pe.
6. Duque C. Політенові хромосоми: погляд на явище ендоредуплікації. Національний університет Колумбії, Медельїн; 2016. Доступно за адресою: edu.
7. Камарена Ф. Клітинна та молекулярна біологія. Посібник з практики. Автономний університет Баха, Каліфорнія. 2017. Доступний за адресою: pez.ens.uabc.mx.
8. ФАО / МАГАТЕ. 2018. Посібник з розмежування диких та розведених мух Anastrepha ludens (Loew) від нормального штаму («двостатевого») та генетично статевого штаму (Tapachula-7), опроміненого та неопроміненого. Гіллен Агілар, Спілка Лопес Муньос Л, Лопес Вілалобос Е.Ф. і Сото Гарсія Д.Н. Продовольча та сільськогосподарська організація Організації Об'єднаних Націй. Рим, Італія, 95 с.
9. Орцеїн. (2018 р., 30 листопада). Вікіпедія, Вільна енциклопедія. Дата консультації: 03:38, 31 липня 2019 року es.wikipedia.org.
10. Мерк Мілліпор. (2018 р., 16 липня). Орцеїнова мікроскопія для мікроскопії Сертистана. Доступний за адресою: merckmillipore.com