БЕНГАЛЬСЬКА ТРОЯНДА: ОБГРУНТУВАННЯ, ПРОЦЕДУРА, КОНТРОЛЬ ЯКОСТІ - ЛІКИ - 2025

Роза Бенгалія - лабораторне дослідження, засноване на реакції антиген-антитіло для діагностики бруцельозу. Методика дозволяє виявити специфічні антитіла проти бактерії Brucella abortus у зразках сироватки людини. Про результат можна повідомити якісно або напівкількісно.

Якісна форма виражає, чи є пацієнт позитивним чи негативним для тесту, тобто чи є антитіла чи ні. Тим часом, напівкількісний звіт повідомляється в МО / мл та вказує на приблизну кількість антитіл. Слід зазначити, що антитіла виробляться лише в тому випадку, якщо пацієнт контактував з мікроорганізмом.

Реакція троянди Бенгалії в планшеті аглютинації. Джерело: взято з відео https://youtu.be/igAVQ-GiyGY

Завдяки своїй великій простоті, високій чутливості та специфічності, це одна із методик сероаглютинації, що найбільш часто застосовується в медицині як початковий тест для діагностики цього захворювання.

Деякі дослідники порівнювали ефективність тесту Роуз-Бенгалії з іншими методами, такими як сероаглютинація (фебрильні антигени) і зауважили, що, хоча існує хороша кореляція, вони побачили поодинокі випадки, коли тест на гарячковий антиген був негативним та Роуз де Позитивний спалах.

Отримана різниця була пов'язана з тим, що ці пацієнти мали підклас антитіл IgG проти Brucella abortus з кращою здатністю зв'язування при кислотному рН, тому вони могли реагувати з реагентом Роуз-Бенгалії, але не з фебрильними антигенами.

У цьому сенсі вони запропонували модифікувати реагенти методу фебрильного антигену до кислотного рН, щоб вони могли виявити випадок такого типу.

Основа

Бенгальський реагент троянди складається з антигенної суспензії. Він складається зі штаму S99 Brucella abortus, розведеного в кислому лактатному буфері (pH 3,6), а також фенолу та барвника з бензольської троянди.

Отже, у зразку, що шукається, є антитіла проти Brucella, якщо вони є, вони будуть реагувати з антигеном реагенту і буде спостерігатися макроскопічно помітна реакція аглютинації. Тест виявляє або антитіла до IgM, або антитіла до IgG.

Це означає, що він може виявити захворювання як в гострій стадії, де переважають антитіла до IgM, так і в хронічній стадії, де переважають антитіла IgG.

Це є перевагою, оскільки підвищує чутливість тесту, але в той же час є його недоліком, оскільки він не розрізняє одну стадію та іншу, оскільки реакція з антитілами IgM та IgG однакова.

Тест завжди повинен проводитися разом з негативним контролем і позитивним контролем. Негативний контроль містить сироватку тварин без антитіл, а позитивний контроль містить сироватку тваринного походження з 50 МО / мл анти-бруцеллових антитіл.

Використовуйте

Бруцельоз - серйозне захворювання, яке має тенденцію до хронічного та небезпечного характеру, тому дуже важливо діагностувати його на ранніх термінах. Це зооноз, і людина може заразитися шляхом прямого контакту із забрудненими матеріалами, найбільш вразливими людьми є ветеринари та доглядачі тварин.

Зараження також може відбутися вживання в їжу зараженого сирого м’яса, серед інших форм зараження.

Ця хвороба атакує місцево або системно. Системна форма є найбільш серйозною, оскільки можуть уражатися різні органи, включаючи ретикулум ендотеліальну систему (печінка, селезінка, кістковий мозок), шкіру (целюліт та лімфаденопатію), дихальну систему (пневмонія), опорно-руховий апарат (артрит, сакроїлітит і спондиліт), серед інших.

Тест Роуз-Бенгалії - дуже корисна методика для проведення початкового скринінгу, оскільки він дуже недорогий, простий у використанні та має велику специфіку та чутливість.

Випадки помилкових негативів та хибних спрацьовувань дуже рідкісні і можуть зустрічатися у людей з дуже низькими титрами антитіл (<25 МО / мл) або надзвичайно високими (> 1000 МО / мл) відповідно.

Процес

матеріали

-Розбірний бенгальський комплект

-Аглютинації пластини білий фон

-50 мкл піпетки

-Ротатор (необов’язково)

-Вортекс

Техніка (якісний метод)

Комерційні комплекти Rose Bengal поставляються з готовими до використання реагентами.

-Памперуйте реактиви перед тим, як почати працювати.

-На пластинах аглютинації є намальовані кола, кожна для іншого зразка. Використовуйте 3 кола, перше для негативного контролю, друге для вибірки і третє для позитивного контролю.

-Помістіть краплю або 50 мкл контрольних елементів і зразок у відповідне коло.

-Змішуйте реагент Бенгальської троянди, використовуючи вихор. Помістіть краплю поруч із раніше розміщеними.

-Міксуйте з дерев'яними зубочистками (використовуйте по одній для кожного зразка або контрольної). Зробіть кругові рухи і розкладіть так, щоб ви покривали все коло.

Джерело: зображення, зняті з Відео: https://youtu.be/igAVQ-GiyGY. Відредагований макет зображення.

-Встановити тарілку на автоматичний обертач при 80-100 об / хв або обертати вручну протягом 4 хвилин. Прочитайте доказ наприкінці цього часу.

-Перевірте, що контролі подавали, як очікувалося. Порівняйте реакцію тестового зразка з контрольними. Повідомте як позитивне, якщо спостерігається аглютинація, і як негативне, якщо аглютинації немає.

Позитивний тест вказує на те, що у пацієнта є кількість, що дорівнює або перевищує 25 МО / мл анти-бруцеллових антитіл.

Інтерпретація позитивної (при аглютинації) та негативної (без аглютинації) реакції. Джерело: Цитрулін. Відредаговане зображення.

Техніка (напівкількісна)

Якщо в якісній реакції зразок сильно позитивний, він може бути напівкількісний. Для цього проводять серійні подвійні розведення зразка фізіологічним сольовим розчином. Описана раніше процедура проводиться з кожним розведенням.

Це також трактується, спостерігаючи макроскопічно аглютинацію. Результатом буде титр найвищого розведення, в якому спостерігався позитивний результат.

Для обчислення приблизного значення антитіл до Brucella використовується наступна формула:

25 МО / мл х титр реакції = МО / мл

Наприклад, якщо у напівкількості тестування пацієнт позитивний при розведенні ½, ¼ та 1/8 і починає бути негативним від розведення 1/16 далі, це означає, що у пацієнта титр 8 .

Застосування формули:

25 МО / мл х 8 = 200 МО / мл

QA

-У комплектів є термін придатності, і його потрібно дотримуватися. Не слід використовувати, якщо термін дії реагенту закінчився.

-Під час використання переконайтесь, що реагент не містить твердих частинок, оскільки це ознака зносу.

-Дотримуйтесь від 2 до 8 ° C.

-Не замерзайте, цей акт негайно пошкоджує реагент.

- Завжди проводите тест разом із негативним та позитивним контролем.

-Техніка переносить зразки сироватки крові з певним ступенем ліпемії та гемолізу, проте не рекомендується використовувати надмірно ліпемічні та гемолізовані сироватки, обидва умови змінюють результати тесту.

- Перед початком аналізу завжди доведіть реагенти до кімнатної температури.

-Не інтерпретуйте реакції, що займають більше часу, ніж рекомендований час, оскільки це створює повідомлення про помилкові позитиви, оскільки через певний час реагент осаджується, імітуючи позитивну реакцію.

-Техніка на 100% чутлива і має специфіку 98%.

-Після напів кількісного визначення 1000 МО / мл є можливість спостерігати прозоновий ефект (хибний негативний вплив через надлишок антитіла порівняно з кількістю антигенів).

Список літератури

1. Рубіо М, Барріо Б і Діаз Р. Значення тестів Роза де Бенгала, Кумбса та протиімунноелектрофорезу для діагностики випадків бруцельозу людини, при якому аглютинація сироватки негативна. Кафедра мікробіології. Клінічна служба мікробіології. Університетська клініка. Університет Наварри. 406-407. Доступно за адресою: elsevier.es/es-revista-enfermedades-infecciosas
2. "Бруцельоз". Вікіпедія, Вільна енциклопедія. 6 грудня 2019, 14:37 UTC. 18 грудня 2019, 18:09 en.wikipedia.org.
3. Monlab Laboratories. Монлаб Бенгальська троянда - тест. 2016. Доступний за адресою: monlab.es/
4. Carrillo C, Gotuzzo E. Brucellosis. Преподобний Перу. Мед. Громадське здоров'я 1997; 14 (1): 63-66. Доступно за адресою: scielo.org
5. Моралес-Гарсія R, Гарсія-Мендес N, Регаладо-Джакобо Д, Лопес-Мерино А, Контрерас-Родрігес А. Клінічна, серологічна та полімеразна ланцюгова реакція у сімействі з бруцельозом. Преподобний чил. Інфектол. 2014 рік; 31 (4): 425-433. Доступний за адресою: scielo.conicyt.