САФРАНИН: ХАРАКТЕРИСТИКИ, ВИКОРИСТАННЯ, МЕТОДИ, ТОКСИЧНІСТЬ - ХІМІЯ - 2025

Сафраніну є meriquinoide барвником, названий за своєю хімічною структурою , що має два бензольних кільця і з 2 -х кілець хіноїдному, причому останні ті , які забезпечують червоний колір.

Його також називають диметил-сафранином або основним червоним 2 у своїй короткій формі, оскільки його наукова назва - 3,7-діаміно-2,8-диметил-5-феніл-феназініумхлор-диметил-сафранин, а хімічна формула - C ₂₀ H ₁₉ N ₄ Кл.

Хімічна структура сафранину, що вказує на бензоїнові та хіноїдні кільця / Водний розчин сафранину. Джерело: NEUROtiker під редакцією магістра. Маріельса Гіл / LHcheM

Існує варіант, який називається триметил-сафранін, але суттєвої різниці між цими двома речовинами немає.

Сафранін - це монохроматичний барвник і, залежно від характеристик хімічної формули, є позитивно зарядженою речовиною. Тому він має спорідненість до негативно заряджених структур. Ці споруди будуть забарвлені червоним кольором.

Ця властивість надає їй застосовність у багатьох гістологічних методах для фарбування різних клітинних структур, як еукаріотичних, так і прокаріотичних організмів.

Сафранін використовується як контрастний барвник у важливих і добре відомих методиках для рутинного використання в бактеріології. Такими методами є: пляма Грам-Хакера, пляма Шеффера Фултона для спор або фарбування бактеріальних капсул, серед інших.

характеристики

Колір шафрану (спеція, отримана із стигм квітки Crocus sativus) була натхненником назви цього барвника. Від терміна шафран походить назва шафран. Це пов’язано з великою подібністю між кольором шафрану і забарвленням, яке надає цей барвник.

Сафранін випускається у вигляді кристалів або порошку, обидва презентації розчинні у воді. Барвник сафранін не має запаху. Плямисті структури червоні. Структури, які приваблюють барвник сафранину, називають сафранофілами.

Структурно сафранін складний, він має два бензоїдні кільця на кінцях, а в центрі розташовані два хіноїдні кільця, де знаходиться катіон N ⁺ . Центром структури є система, що відповідає за надання кольору. Завдяки цій характеристиці цей барвник класифікується до II категорії.

Використовуйте

Сафранін використовується для фарбування різних конструкцій. Особливо виділяються клітини Кульчицького, присутні в шлунково-кишковому тракті, які також називають клітинами ентерохромафіну.

Він здатний фарбувати мікроорганізми, що належать до родини Rickettsiaceae. Так само його застосовують у різних техніках, таких як метод Костера, модифікований, що застосовується для фарбування бактерій роду Brucella.

З іншого боку, сафранін використовується в техніці фарбування спорами Шеффера Фултона і в фарбуванні по Граму-Хакеру. В обох методах сафранин працює як контрастний барвник.

По-перше, спори набувають забарвлення малахіто-зеленого кольору, а решта структур червоний від сафранину. По-друге, грамнегативні бактерії втрачають колір фіолетового кристала на стадії знебарвлення, тому сафранін - той, який забарвлює негативні бактерії по Граму червоним кольором.

Крім того, сафранин використовується в бактеріології для приготування агару Brucella з розведенням сафранину 1: 5000. Це середовище служить для диференціації видів Brucella suis від решти видів. На цій середовищі ростуть Brucella melitensis і Brucella abortus, але B. suis пригнічується.

В агропромисловому полі сафранін був використаний на 2,25% та розведений 1:10 для фарбування стовбурових зразків із рослини цукрового очерету.

Ця рослина зазвичай уражена бактеріями Leifsonia xyli subsp. ксилі, який пошкоджує ксилему рослини. Пофарбовані стебла оцінюють для визначення функції судин ксилеми.

Методики в області бактеріології

Пляма Castañeda для фарбування r

Мазок крові або тканини поміщають у буферний розчин (фосфатний буфер pH 7,6). Дайте спокійно висохнути, а потім накрийте метиленовим синім протягом 3 хвилин і протирайте сафранину. Рикетсії кольорові сині, контрастні з червоним фоном.

Пляма Костер модифікована для

Робиться мазок і спалахується в запальничці для фіксації. Згодом його накривають сумішшю 2 частин насиченого водного сафранину з 3 частинами 1 моль / л розчину KOH протягом 1 хвилини. Промивання проводять дистильованою водою і протирають 1% карболовим метиленовим синім.

Якщо в зразку містяться бактерії роду Brucella, вони з’являться помаранчевим на синьому тлі.

Фарбування бактеріальної капсули

Суміш бактеріальної суспензії виготовляють із чорнилом Індії та додають сафранин. Під мікроскопом навколо кожної бактеріальної капсули з чорним фоном з’явиться червонуватий ореол.

Спорове фарбування

З бактеріальною суспензією робиться поширення. Потім його фіксують для нагрівання. Він покритий 5% малахітовим зеленим кольором, часто палаючий до викиду парів. Процес повторюють протягом 6-10 хвилин. Нарешті, його промивають водою і протистоять 0,5% сафранину протягом 30 секунд. Бацили плями червоні, а спори зелені.

Пляма по Граму-Хакеру

Робиться мазок бактеріальною суспензією і фіксується в теплі. Накрийте гірку кришталевою фіалкою на 1 хвилину. Потім люголь поміщають у вигляді борчевого розчину на 1 хвилину. Згодом його відбілюють ацетоновим спиртом і, нарешті, протистоять сафранину протягом 30 секунд.

Грампозитивні бактерії забарвлюють синюшну фіолетову, а грамнегативні бактерії червоні.

Деякі лабораторії перестали використовувати техніку Грам-Хакера для прийняття модифікованої методики Грама-Копелофа. В останньому сафранін замінюється основним фуксином. Це пояснюється тим, що сафранін слабко забарвлює види родів Legionella, Campylobacter та Brucella.

Методики в області гістології

Фарбування клітин Кульчицького (ентерохромафіни)

Тканинні відділи шлунково-кишкового тракту фарбуються хлоридом срібла. Потім він знебарвлюється тіосульфатом натрію і остаточно протиставляється сафранину.

Клітини Кульчицького відрізняються наявністю чорно-коричневих гранул.

Остеоартрит пляма

Оскільки сафранін має позитивний заряд, він дуже добре зв’язується з карбоксильними та сульфатними групами глікозаміногліканів. Це частина протеогліканів, що складають суглобовий хрящ. У цьому сенсі при фарбуванні сафраніном О можна виявити, чи є втрата хряща чи ні.

Втрату хрящової тканини можна виміряти за шкалою Манкіна або також називати шкалою остеоартриту.

Методика пояснюється нижче: гістологічний зріз занурюється в лоток із розчином заліза гематоксиліну Вайгерта, потім пропускається через кислотний спирт і промивається водою.

Продовжуйте процес фарбування, занурюючи аркуш у швидкий зелений колір, його промивають оцтовою кислотою і тепер занурюють у сафранін О. Для закінчення процесу його зневоднюють за допомогою спиртів у різних концентраціях у порядку зростання. Останній крок вимагає ксилолу або ксилолу для зразка для уточнення.

Слайди обумовлені бальзамом Канади або подібним, який слід спостерігати під мікроскопом.

За допомогою цієї методики ядра забарвлюються в чорний колір, кістки зелені та хрящі, де протеоглікани виявляються червоними.

Пляма для ідентифікації макроводоростей

Перес та ін в 2003 році запропонували просту і недорогу техніку фарбування макроводоростей. Зразки готують у парафінових гістологічних зрізах. Зрізи фіксують 1% гліцерином, що дозволяє їм повністю висохнути. Потім його поміщають у ксилол для видалення парафіну.

Секцію повторно зволожують, пропускаючи її через ряд лотків, що містять етанол у різних ступенях концентрації (по порядку спадання), по 2 хв у кожному.

Згодом його забарвлюють протягом 5 хвилин сумішшю 1% сафранину 3% 1 із 1% толуїдиновим синім, обидва готують 50% етанолом. До суміші додають три краплі пікрінової кислоти, яка виконує функцію мотанки.

Потім його зневоднюють, повторно проходячи через лотки з алкоголем, але цього разу висхідним способом. Нарешті, його промивають ксилолом, і зразок готують з бальзамом Канади, який слід спостерігати.

Токсичність

На щастя, сафранін - це барвник, який не представляє небезпеки для тих, хто з ним поводиться. Це нешкідливий барвник, він не є канцерогенним і не горючий.

Прямий контакт зі шкірою або слизовою оболонкою може викликати незначне почервоніння в ділянці, без великих ускладнень. Для цього рекомендується промити уражену ділянку великою кількістю води.

Список літератури

1. Гарсія Х. Колоранте сафраніна О. Технік з охорони здоров’я, 2012 р .; 1 (2): 83-85. Доступний за адресою: medigraphic.com
2. Пляма Гіл М. Грам: основа, матеріали, техніка та використання. 2019. Доступний за адресою: lifeder.com
3. Жил М. Спорове фарбування: обгрунтування, методи та використання. 2019. Доступний за адресою: lifeder.com
4. Сафранина ». Вікіпедія, Вільна енциклопедія. 7 березня 2017, 10:39 UTC. 3 серпня 2019, 20:49 en.wikipedia.org
5. Pérez-Cortéz S, Vera B, Sánchez C. Корисна техніка фарбування в анатомічній інтерпретації Gracilariopsis tenuifrons і Gracilaria chilensis (Rhodophyta). Дія Бот. Венеція. 2003 р .; 26 (2): 237-244. Доступно за адресою: scielo.org.
6. Церква Алейка, Перельта Естер Лілія, Альварес Ельба, Міліан Дж, Матос Мад'ю. Зв'язок функціональності судин ксилеми та наявність Leifsonia xyli subsp. ксилі. Захист вегетаріанців. 2007 р .; 22 (1): 65-65. Доступно за адресою: scielo.sld