MEDIO MIO: ОСНОВА, ПІДГОТОВКА ТА ВИКОРИСТАННЯ - БІОЛОГІЯ - 2025

Середа МІО є біохімічним тестом , використовуваним , щоб допомогти в ідентифікації видів бактерій , що належать до сімейства Enterobacteriaceae. Він досить поживний і складається з глюкози, дріжджового екстракту, пептона, триптеїну, L-орнітину гідрохлориду, бромокрезолу фіолетового та агару.

Значення його абревіатури (MIO) описує кожен з параметрів, які можна спостерігати в цьому середовищі; моторики, індолу та орнітину. Моторика - це здатність мікроорганізму рухатися через наявність джгутиків. Для того, щоб ця властивість спостерігалася, консистенція середовища повинна бути напівтвердою, тому препарат містить менше агару.

Контур інтерпретації результатів у середовищі MIO. Джерело: Підготовлено автором магістра. Маріельса гіл

Виробництво індолу свідчить про наявність ферменту триптофанази, який діє на амінокислоту триптофану, що вимагає використання реагенту, що виявляє, щоб зробити виробництво індолу видимим.

Нарешті, орнітин визначає, чи здатна бактерія декарбоксилювати амінокислоту, тобто чи є в ній фермент орнітиніну декарбоксилаза.

Основа

Пептон, дріжджовий екстракт і трипін

Ці елементи сприяють живильній силі цього середовища. Вони служать джерелом поживних речовин і незамінних амінокислот для розвитку бактерій.

Крім того, триптейн є джерелом триптофану, який свідчить про наявність ферменту триптофанази, який деградує триптофан шляхом відновного дезамінування, вивільняючи індол, піровиноградну кислоту, аміак та енергію.

Індол є безбарвним, тому його наявність виявляється додаванням п'яти крапель реагенту Ерліха або Ковачса, обидва з п-диметиламинобензальдегидом.

Альдегідна група цієї сполуки вступає в реакцію з індолом, утворюючи кільцеподібний червоний продукт фуксії на поверхні агару.

Будь-який слід кольору слід вважати позитивним тестом. Доказ слід прочитати негайно, оскільки з часом колір погіршується.

Крім того, цей тест слід виявити після того, як були відмічені результати рухливості та декарбоксилювання орнітину.

Інтерпретація

Позитивний тест: утворення червоного кільця фуксії при додаванні крапель реагенту Ковач.

Негативний тест: немає утворення кільця.

Моторика

Здатність бактерій рухатися буде очевидною, якщо спостерігається помутніння середовища або якщо навколо початкової щеплення є товста лінія росту.

Тест на негативну рухливість буде свідчити, спостерігаючи за тонкою лінією росту, і все навколо нього буде без зростання.

Важливо, щоб моторика була прочитана ще до того, як буде показаний індол, оскільки додавання реагенту затьмарює все середовище.

У рухливих, але повільно зростаючих бактерій важко продемонструвати їх рухливість цим середовищем. У цьому випадку рекомендується використовувати інші випробування або методи, наприклад, середню моторику або метод, що очікує краплі.

Глюкоза

Глюкоза - це ферментований вуглевод, який, крім енергії, підкислює навколишнє середовище, необхідною умовою для декарбоксилювання амінокислоти орнітину.

Заквашування глюкози завжди має відбуватися, виходячи з принципу, що всі бактерії, що належать до сімейства Enterobacteriaceae, ферментують глюкозу.

L-орнітин

У випадку, якщо бактерії виробляють фермент орнітін-декарбоксилаза, вона може діяти, коли середовище було підкислено ферментацією глюкози.

Фермент орнітін-декарбоксилаза діє на карбоксильну групу амінокислоти, утворюючи амін під назвою путрезин, який знову алкалізує середовище.

Цей тест слід прочитати через 24 години інкубації, тому що якщо ви спробуєте прочитати, перш ніж ви зможете неправильно інтерпретувати тест з помилковим негативом.

Потрібно пам’ятати, що перша реакція, яка виникає, - це бродіння глюкози, так що середовище жовтіє в початковій фазі (перші 10-12 годин). Якщо згодом відбудеться декарбоксилювання орнітину, середовище стане фіолетовим.

Важливо інтерпретувати тест на орнітинову декарбоксилювання перед виявленням індолу, оскільки додавання реагенту Ковач змінює колір середовища.

Інтерпретація

Негативний тест: середній з жовтим кольором або з жовтим фоном.

Позитивний тест: середній повністю фіолетовий.

Індикатор PH

У цьому випадку використовується бромокрезол фіолетовий; той, хто відповідає за виявлення, коли відбувається зміна pH в середовищі. Після підкислення індикатор жовтіє, а при лугуванні стає фіолетовим.

Техніка висіву та розробки

Для посіву середовища МІО використовується пряма петля або голка, а разом із нею збирається частина колонії, яку потрібно вивчити.

Глибокий прокол робиться в середині MIO по прямій лінії. Не рекомендується проводити подвійну пункцію, оскільки це може дати помилкове зображення моторики, якщо проколи не проводяться там же.

Інкубуйте протягом 24 - 48 годин при 37 ° С при аеробіозі. Подивіться на результати в такому порядку: рухливість, декарбоксилювання орнітину та нарешті виявіть індол.

Доцільно асептично видалити 2 мл середовища, перенести його в стерильну пробірку і провести там індольний тест, щоб, якщо він був негативним, решту вихідної пробірки можна інкубувати ще протягом 24 годин, щоб знову виявити індол.

Розробка індолу здійснюється наступним чином: 3 - 5 крапель реактиву Ковачса додають у середовище MIO і енергійно перемішують. Спостерігається, з’являється чи ні червоно-фуксійне кільце.

Підготовка

Середовище MIO

Зважте 31 г середовища MIO і розчиніть в одному літрі дистильованої води.

Нагрівайте, поки суміш не закипить протягом однієї хвилини, часто струшуючи до повного розчинення агару. Розподіліть 4 мл середовища в пробірки 13/100 з бавовняними кришками.

Стерилізуйте в автоклаві при 121 ° С протягом 15 хвилин. Вийміть з автоклава і залиште стояти прямо в стійці таким чином, щоб утворився напівтвердий блок.

Зберігати в холодильнику 2-8 ° C. Дайте прогрітися перед посівом штаму бактерій.

Колір зневодненого середовища - бежевий, а колір підготовленого середовища - злегка опалесцентний фіолетовий.

Кінцевий рН підготовленої середовища становить 6,5 ± 0,2

Середовище жовте при кислому рН та фіолетове при лужному.

Kovacs Reagent (Indole Test Developer)

Цей реагент готують наступним чином:

Вимірюється 150 мл амільного, ізоамільного або бутилового спирту (будь-якого з трьох). У ній розчинено 10 г п-диметиламінобензальдегіду. Згодом повільно додають 50 мл концентрованої соляної кислоти.

Приготований реагент є безбарвним або світло-жовтим. Його слід зберігати в бурштиновій пляшці і зберігати в холодильнику. Темно-коричневий колір показує його погіршення.

Також реагент Ковач може бути заміщений реагентом Ерліха. Останні, будучи більш чутливими, вважають за краще виявляти індол в бактеріях, які виробляють його в невеликих кількостях, наприклад, в деяких негативних паличках по Грам і певних анаеробів.

Використовуйте

Цей засіб - це тест, який доповнює безліч біохімічних тестів для ідентифікації бактерій, що належать до сімейства Enterobacteriaceae.

Дані декарбоксилювання орнітину служать для диференціювання Shigella sonnei, який випробовує позитивні, від Shigella boydii, Shigella flexneri та S. dysenterieae, які тестують негативні.

Він також відрізняє рід Klebsiella, який тестує негативний характер, від роду Enterobacter, де більшість його видів випробовують позитивні.

Джерело: Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Мікробіологічна діагностика. 5-е видання. Редакція Panamericana SA Аргентина.

QA

Кожен раз, коли готується партія носія MIO, можна проводити контрольний тест. Для цього використовуються відомі або сертифіковані штами для спостереження за поведінкою середовища.

Штами, які можуть бути використані: Escherichia coli, Morganella morganii, Klebsiella pneumoniae, Enterobacter aerogenes і Proteus mirabilis.

Очікувані результати: E. coli та M. morganii. Ден М: +, я: + і О: +.

Klebsiella pneumoniae - це все негативно (M: -, I: -, O :-). Proteus mirabilis і Enterobacter aerogenes дають M: + I: - і O: +.

Список літератури

1. Мак Фаддін Дж. (2003). Біохімічні тести для виявлення бактерій клінічного значення. 3-е вид. Редакція Panamericana. Буенос-Айрес. Аргентина.
2. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Мікробіологічна діагностика Бейлі та Скотта. 12 ред. Редакція Panamericana SA Аргентина.
3. Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Мікробіологічна діагностика. 5-е видання. Редакція Panamericana SA Аргентина.
4. Britannia Laboratories. MIO Medio 2015. Доступний за адресою: britanialab.com
5. BD Laboratories. BBL Mobility Indole Ornithine (MIO) Середній. 2007. Доступний за адресою: bd.com
6. Valtek Laboratories. Середній MIO Mobility, Indole, Ornithine. 2010. Доступний за адресою: andinamedica.com