СЕРЕДНІЙ СИМ: ОСНОВА, ПІДГОТОВКА ТА ВИКОРИСТАННЯ - БІОЛОГІЯ - 2025

SIM середу являє собою напівтвердий і диференційний агар, спеціально розроблений , щоб допомогти ідентифікувати деякі бактерії, особливо Enterobacteriaceae. До його складу входять триптеїн, пептон, сульфат заліза, сульфат амонію, тіосульфат натрію та агар.

Цей засіб дозволяє виконати три важливі випробування: отримання сірководню (H ₂ S), утворення індолу та рухливості, отже, абревіатура SIM. Через свою велику корисність він не може бути відсутній у лабораторії бактеріології.

A. Комерційне середовище SIM B. SIM H2S (-), Indole (-) та Mobility (+) і SIM H2S (+), Indole (-), Mobility (+). Джерело: А. Фото зроблено автором магістра. Маріельса Гіл Б. Мфлоайза

На відміну від інших носіїв, він повинен бути напівтвердим, щоб здатність виявити рухливість деяких бактерій. У цьому сенсі цей тест працює дуже добре для Enterobacteriaceae, але не у неферментуючих грамотрицательних стрижнях, де переважні інші методи, наприклад, висячі краплі.

Середовище SIM дозволяє виділити певні специфічні властивості, які характеризують одні бактерії по відношенню до інших. Наприклад, кишкова паличка відрізняється тим, що вона є H ₂ S (-), індолом (+) і рухливістю (+), тоді як Proteus mirabilis - H ₂ S (+), індол (-), рухливість (+).

Основа

Це культуральне середовище, яке вважається диференційованим, оскільки його використання відрізняє мікроорганізми, здатні виробляти сірководень, від тих, які цього не роблять; він також виділяє ті, що утворюють індол із триптофану, від тих, що цього не роблять, і, нарешті, відрізняє рухливі бактерії від нерухомих.

Джерело живлення

Як і будь-яке культуральне середовище, в ньому є елементи, які забезпечують необхідні поживні речовини, щоб могли розвиватися не вимогливі мікроорганізми. Ці елементи представлені пептонами та трипіном.

Розвиток мікроорганізму в середовищі має важливе значення, щоб можна було спостерігати за наявністю або відсутністю характеристик, які оцінює це середовище.

Виробництво сірководню

Буква S абревіатури SIM стосується виробництва сірководню (H ₂ S). Бактерії, здатні утворювати сірководень, приймуть сірку з тіосульфату натрію.

Після утворення H ₂ S-безбарвного газу- він вступає в реакцію з сіллю заліза, присутньою в середовищі, утворюючи сульфід заліза, добре видно (чорний осад). Бактерії, які не утворюють H ₂ S, залишають середовище початкового кольору (бежевий).

Наявність чорного осаду може перешкоджати тлумаченню моторики. Тим НЕ менше, більшість Н ₂ S - виробництво Enterobacteriaceae , як відомо, позитивно рухливі, такі як Salmonella, Proteus і Citrobacter. Крім того, чорний осад, який охоплює майже все середовище, говорить про позитивну рухливість.

Індолівська формація

Друга буква абревіатури SIM - «Я», що являє собою утворення індолу.

У цьому сенсі триптейн, крім того, що є джерелом поживних речовин, виконує ще одну фундаментальну функцію. Цей пептон багатий на амінокислоту, яку називають триптофаном, тому він може виявляти бактерії, які продукують триптофаназу.

Цей фермент відповідає за розщеплення амінокислоти триптофану з подальшим утворенням індолу (безбарвної речовини), піровиноградної кислоти та амонію.

Ось чому, щоб показати цю реакцію, потрібно додати розкриваючу речовину (реагент Ерліха чи реактив Ковача). Або реагує з індолом, утворюючи на поверхні агару кільцеподібну речовину червоної фуксії. Якщо з'являється кільце фуксії, індольний тест трактується як позитивний.

Бактерії, які не володіють цим ферментом, не утворюють кільця, і це трактується як негативний індоловий тест.

Важливо зазначити, що індольний тест повинен бути останнім для інтерпретації, оскільки після додавання реагенту середовище стає каламутною, що ускладнює візуалізацію моторики.

Моторика

Нарешті буква "М" слова SIM означає рухливість. Для того, щоб оцінити рухливість, цей засіб є стратегічно напівтвердим, оскільки ця характеристика є важливою для того, щоб можна було спостерігати, чи є бактеріальний рух чи ні. Бактерії, що володіють джгутиками, - це ті, що дають цей позитивний тест.

Позитивний тест буде очевидним, коли спостерігається помутніння, як у початковому прищепі, так і навколо нього. Тоді як нестійкі бактерії розвиваються лише на шляху початкового посіву.

Підготовка

Середня SIM-карта

Зважте 30 г зневодненого середовища і розчиніть в літрі дистильованої води. Суміш залишають постояти протягом 5 хвилин, після чого нагрівають до кипіння, часто перемішуючи до повного розчинення.

Розподіліть суміш по пробірках з бавовняними кришками та автоклавуйте при 121 ° С протягом 15 хвилин. Вийміть трубку з автоклава і дайте твердіти у вертикальному положенні, щоб середовище було у формі блоку.

Для його збереження зберігають у холодильнику до його використання. Підготовлена ​​середовище повинна мати кінцевий pH 7,3 ± 0,2.

На час щеплення середовища воно повинно бути при кімнатній температурі. Середній колір - бежевий.

Реактив Ковача

Відміряйте 150 мл амільного або ізоамілового або бутилового спирту. (Використовуйте один із трьох згаданих).

Розчиніть 10 г п-диметиламінобензальдегіду. Потім повільно додають 50 мл концентрованої соляної кислоти.

Готовий до вживання реагент безбарвний або світло-жовтий. Його слід зберігати в бурштиновій пляшці і зберігати в холодильнику. Не використовуйте, якщо він стає темно-коричневим; що вказує на те, що він пошкоджений. Цей реагент є кращим, коли мова йде про Enterobacteriaceae.

Реагент Ерліха

Зважте 2 г п-диметиламинобензальдегида і розчиніть в 190 мл абсолютного етилового спирту і повільно змішайте з 40 мл концентрованої соляної кислоти. Зберігайте таким же чином реагент Ковач. Реагент Ерліха використовується найбільше для неферментуючих та анаеробних бактерій.

Програми

Середовище SIM широко використовується в бактеріологічних лабораторіях. Його перевага полягає в тому, що в одній трубці при ідентифікації Enterobacteriaceae можна спостерігати три основні характеристики.

Посіяно

Правильний спосіб посіву цього середовища - це голка, за допомогою якої взята частина чистої колонії, яку слід вивчити, і вставляється вертикально в центр середовища. Слід здійснити один зал. Прокол не повинен доходити до дна трубки, правильна річ - покрити лише дві третини глибини.

Повторювати прищепи не рекомендується, оскільки це може призвести до помилкових тлумачень позитивної моторики. Інокульоване середовище інкубують аеробним шляхом при 37 ° С протягом 24 годин.

Як тільки час закінчився, спостерігається, чи не було вироблення H ₂ S і читається рухливість. Нарешті розкривається індол, додаючи 3 - 4 краплі реагенту Ерліха або Ковака, обережно перемішують і інтерпретують.

Джерело: Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Мікробіологічна діагностика. 5-е видання. Редакція Panamericana SA Аргентина.

QA

Для контролю стерильності одну або дві пробірки інкубують без щеплення в духовці при 37 ° С протягом 24 годин. Очікується, що після цього часу не спостерігається зростання чи зміна кольору.

В якості контролю якості можуть використовуватися відомі сертифіковані штами, такі як: Escherichia coli ATCC 25922, Enterobacter aerogenes ATCC 13048, Klebsiella pneumoniae ATCC 13883, Salmonella typhimurium ATCC 14028, Shigella sonnei ATCC 29930, Proteus vulgaris ATCC 13315.

Очікувані результати: Escherichia coli H ₂ S негативна, індол та позитивна рухливість, Enterobacter aerogenes лише позитивна моторика, Salmonella typhimurium H ₂ S та позитивна моторика, з негативною індолом. Proteus vulgaris позитивний, тоді як Klebsiella pneumoniae та Shigella - негативні.

Обмеження

- Деякі штами Morganella morganii, серед інших штамів, можуть утворювати коричневий пігмент у цьому середовищі завдяки виробленню меланіну, це не слід плутати з осадом сульфіду заліза. У недосвідчених професіоналів така ситуація може спричинити помилкові позитиви в інтерпретації тесту H ₂ S.

-Стриткі аеробні бактерії будуть рости лише на поверхні трубки, що ускладнить інтерпретацію моторики.

Список літератури

1. BD Laboratories. BBL SIM Середній. 2008. Доступно за адресою: bd.com
2. Неогенні лабораторії. SIM середній. Доступний за адресою: безпека харчових продуктів
3. Діфко Франсіско Сорія Мельгуїзо. SIM середній. 2009. Доступний за адресою: http://f-soria.es
4. Брізуела-Лабораторія. Середня SIM-карта. Доступний за адресою: .brizuela-lab.com
5. Britannia Laboratories. Середня SIM-карта. 2015. Доступний за адресою: studyres.es/doc
6. Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Мікробіологічна діагностика. 5-е видання. Редакція Panamericana SA Аргентина.